Zawartość flawonoidów podczas wzrostu i rozwoju kwiatowego nagietka lekarskiego (Calendula officinalis L.)

W naszym badaniu wykorzystano dostępną i wiarygodną metodę kolorymetryczną do ilościowego oznaczania całkowitej flawonoidów, ułatwiając analizę danych w laboratoriach fitochemicznych i wspierając badania nad związkami o właściwościach terapeutycznych.

Zawartość flawonoidów w nagietku jest badana podczas rozwoju kwiatów w celu określenia optymalnego czasu zbioru i maksymalizacji jego potencjału leczniczego i komercyjnego.

Nasz protokół jest czułą i wydajną mikrotechniką, która umożliwia ilościowe oznaczanie flawonoidów przy użyciu małych ilości próbek, optymalizację użycia rozpuszczalników, a analiza materiału roślinnego jest ograniczona.

[Instruktor] Na początek susz materiał roślinny w piekarniku z wymuszonym obiegiem powietrza w temperaturze 40 stopni Celsjusza przez 48 godzin. Po wyschnięciu wyjmij go z piekarnika, przenieś wysuszony materiał do papierowych kopert i przechowuj w ciemności w temperaturze pokojowej. Zamroź materiał roślinny za pomocą ciekłego azotu, aby przygotować się do mielenia. Następnie zamrożony materiał należy zmielić w moździerzu porcelanowym, aż uzyska jednolitą konsystencję. Przygotować próbki, ważąc 25 miligramów sproszkowanego materiału z każdej próbki. Do zważonego materiału dodać 500 mikrolitrów 80% metanolu. Aby wyekstrahować flawonoidy, inkubuj mieszaninę w temperaturze 70 stopni Celsjusza przez godzinę. Po inkubacji odwirować mieszaninę o stężeniu 731 g przez 13 minut. Teraz przygotuj podwielokrotności, biorąc 150 mikrolitrów otrzymanego ekstraktu i dodając do niego 37 mikrolitrów 80% metanolu. Weź 50 mikrolitrów ekstraktu i dodaj 100 mikrolitrów jednego molowego octanu potasu i 100 mikrolitrów 10% chlorku glinu. Uzupełnij roztwór, zwiększając całkowitą objętość mieszaniny do pięciu mililitrów za pomocą wody destylowanej. Ustaw długość fali absorbancji spektrofotometru na 415 nanometrów i zmierz absorbancję roztworu. Wygeneruj krzywą kalibracyjną, przygotowując roztwory kwercetyny w zakresie od 50, 100, 175 i 350 miligramów na mililitr. Aby przygotować próbki kalibracyjne, należy odpipetować 500 mikrolitrów roztworu kwercetyny z ostatniego punktu krzywej kalibracyjnej i dodać do roztworu 100 mikrolitrów 10% chlorku glinu i 100 mikrolitrów jednego molowego octanu potasu. Następnie dodaj 1,5 mililitra 80% metanolu i 2,8 mililitra wody destylowanej. Pozostaw roztwory kalibracyjne na 40 minut w temperaturze pokojowej. Ustaw długość fali absorbancji spektrofotometru na 415 nanometrów i zmierz absorbancję próbek kalibracyjnych, aby skonstruować krzywą kalibracyjną. Na koniec należy obliczyć stężenie flawonoidów i zawartość flawonoidów na gram suchej masy. Poniższa tabela podsumowuje, w jaki sposób stężenie flawonoidów i produkcja flawonoidów na roślinę różnią się od początkowego tworzenia pąków do pełnego kwitnienia i rozwoju owoców w główkach kwiatowych nagietka. Wyższe poziomy całkowitego stężenia flawonoidów zaobserwowano między stadiami ósmym i jedenastym, co odpowiada pąkom z oddzielonymi działkami kielicha do w pełni otwartych główek kwiatowych. We wcześniejszych stadiach, takich jak pąki ze zjednoczonymi działkami, oraz w późniejszych stadiach, takich jak starzejące się główki kwiatowe, stężenia flawonoidów były o 22% do 27% niższe w porównaniu z w pełni otwartymi główkami kwiatowymi. Rysunek ten przedstawia pomiar całkowitego stężenia flawonoidów w suchej masie główek kwiatowych nagietka, kwiatów języczkowatych i kwiatów rurkowych na różnych etapach rozwoju kwiatowego. Wyniki sugerują, że zrozumienie zmienności stężenia flawonoidów między różnymi strukturami i etapami kwiatowymi jest przydatne do określenia optymalnego czasu zbiorów, aby zmaksymalizować zawartość flawonoidów w główkach kwiatowych nagietka.