Mysi model rany kłutej do badania krwotoku i stanu zapalnego w urazowym uszkodzeniu mózgu

Uproszczone modele urazowego uszkodzenia mózgu (TBI) ułatwiły rozwój podejść terapeutycznych. Protokół ten nakreśla tworzenie kory myszy z raną kłutą za pomocą igieł, umożliwiając analizę krwotoku i stanu zapalnego. Model myszy TBI z raną kłutą ma tę zaletę, że można go wykonać bez konieczności stosowania specjalistycznego sprzętu.

Jesteśmy zainteresowani opracowaniem metody tamowania krwotoku i tłumienia stanu zapalnego w TVI, dlatego opracowaliśmy protokół umożliwiający łatwe wykonanie modelu masy TVI przy użyciu samej igły. Nasz model TVI do ran kłutych jest korzystny, ponieważ smaruje krwotok i aktywację szarości. Nasz protokół ma trzy główne zalety w porównaniu z innymi technikami.

Nie jest wymagany żaden specjalistyczny sprzęt ani narzędzia. Można to zrobić łatwo i szybko, a rana jest tak mała, że nie wpływa na zachowanie myszy, więc każdy może to zrobić z wysoką powtarzalnością. Nasze laboratorium skupi się na komunikacji neuronów, komórek szarych i komórek glejowych oraz pasożytów podczas naprawy urazowego uszkodzenia mózgu.

Komunikacja odgrywa kluczową rolę w naprawie. Jednak do tej pory nie jest to w pełni zrozumiałe. Nasz protokół jest bardzo przydatny do analizy komunikacji.

Na początek połóż znieczuloną mysz na brzusznej stronie na ręczniku papierowym. Upewnij się, że mysz jest głęboko znieczulona za pomocą testu szczypania palców u stóp. Zdezynfekuj miejsce operowane, naprzemiennie stosując po trzy razy baterie betadyny i peelingu z 70% etanolu.

Teraz chwyć skórę potyliczną kleszczami i wykonaj nacięcie o szerokości od jednego do 1,5 milimetra, aby odsłonić kość potyliczną bez uszkadzania czaszki lub jakiegokolwiek narządu. Następnie delikatnie i powoli otwórz nacięcie, aby obserwować granicę między korą mózgową a móżdżkiem przez czaszkę. Aby wykonać kraniotomię myszy, utwórz mały otwór w prawej półkuli kości potylicznej za pomocą igły.

Delikatnie obrócić igłę, aby utworzyć punkt wkłucia do igłowania ran kłutych, uważając, aby nie uszkodzić miąższu mózgu. W przypadku rany kłutej należy wprowadzić odpowiednią igłę od miejsca wprowadzenia i wbić korę mózgową wzdłuż osi rostralnej ogona. Na koniec zszyj nacięcie skóry za pomocą nylonowego szwu 3-0 z półokrągłą igłą.

Rana po zabiegu została potwierdzona pod kątem mikroskopowym. Wynaczynienie IGG osiągnęło szczyt dzień po urazie, po którym nastąpiła postępująca rekonwalescencja i zmniejszenie intensywności barwienia po trzech, pięciu i siedmiu dniach. Wyciek niebieskiego barwnika Evana do miąższu mózgu nastąpił natychmiast po urazie, a jego stężenie osiągnęło szczyt o jedną godzinę.

Stężenie barwnika stopniowo zmniejszało się po jednym i trzech dniach. Szczytowa akumulacja mikrogleju IBA1 dodatniego i astrocytów GFAP dodatnich wystąpiła odpowiednio po pięciu i trzech dniach od urazu, przy czym ich obecność zmniejszyła się o siedem dni. Cytokiny zapalne, w tym czynnik martwicy nowotworu alfa, interleukina szósta i interleukina jedna beta, wykazywały szczytową ekspresję mRNA w ciągu jednego dnia po urazie, podczas gdy transformujący czynnik wzrostu beta jeden osiągał szczyt w trzech dniach po urazie.