Name: Mysi model zaawansowanego zapalenia przyzębia wywołanego przez ligaturę nylonową w drugim górnym zębie trzonowym (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-30T13:20:00.000+00:00
Duration: 7 min 14 s
Description: Poznaj zmodyfikowaną metodę ligatury nylonowej 6-0 do wywoływania periodontitis u myszy. Model ten pozwala badać czynniki komórkowe i molekularne choroby oraz jej patologiczne konsekwencje.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca została częściowo sfinansowana przez Radę ds. Nauki i Technologii Stanu Meksyk (COMECYT) numer grantu [FICDTEM-2021-072] oraz Program Wsparcia Projektów Badawczych i Innowacji Technologicznych (PAPIIT)-UNAM, numer grantu [IN-217021]. Dziękujemy programowi specjalizacji w Endoperiodontología, FES Iztacala, UNAM za udogodnienia zapewnione do nakręcenia tego filmu oraz Rosalba Yañez Ortiz, DDS, za jej wsparcie w tworzeniu tego filmu. Niektóre figury zostały stworzone za pomocą programu Biorender (numer umowy ME282NWCI1).

Wszystkie procedury z udziałem zwierząt doświadczalnych były przeprowadzane w ścisłej zgodności z 'Ramami etycznymi dla badań biomedycznych na zwierzętach laboratoryjnych', zgodnie z oficjalnym meksykańskim standardem NOM-062-ZOO-1999. Badanie to zostało zatwierdzone przez komisję etyczną Facultad de Estudios Superiores Iztacala (FES-Iztacala) na podstawie protokołu CE/FESI/072024/1765. Myszy były trzymane w komorach dla zwierząt ze swobodnym dostępem do pożywienia i wody w środowisku wolnym od patogenów w obiekcie dla zwierząt FES-Iztacala. Protokół ten jest modyfikacją metody opisanej wcześniej przez Abe et al.27. Sześcio- do ośmiotygodniowych samic myszy BALB/c (o wadze 16 g) podzielono na grupy kontrolne (CTL) i zapalenie przyzębia (PT). Zapalenie przyzębia wywołano przez założenie nylonowego szwu 6-0 w dniu 0, aby promować trwałą adhezję bakteryjną i wywołać ciężką, przewlekłą progresję choroby. Po 30 dniach wszystkie myszy zostały poddane eutanazji (zgodnie z instytucjonalnie zatwierdzonymi protokołami) w celu oceny uszkodzenia tkanek i utraty przyczepu (AL) za pomocą analizy histometrycznej (<silna klasa = "xfig">Ryc. 1). Szczegółowe informacje na temat stosowanych odczynników i sprzętu są wymienione w Tabeli materiałów.
1. Przygotowanie znieczulenia
<ol>
	<li>Przygotować rozcieńczenie ksylazyny i ketaminy (1:10) z wodą do wstrzykiwań (bulion). Przechowywać w temperaturze 4 °C i zużyć w ciągu 4 tygodni.</li>
	<li>Zidentyfikuj i zważ każdą mysz. Przygotować dawkę ksylazyny (1 mg/kg) i ketaminy (2 mg/kg) do podania domięśniowego za pomocą strzykawki insulinowej.</li>
	<li>Wstrzyknąć 50% całkowitej dawki roztworu znieczulającego w ćwierćtuszę tylną. Powtórz procedurę po przeciwnej stronie.</li>
	<li>Umieść myszy w głębokim pudełku (10 cm³) i pozwól im zasnąć, co zajmuje około 3-5 minut.</li>
	<li>Zapobiegaj suchości oczu i uszkodzeniom rogówki spowodowanym znieczuleniem, nakładając kroplę hypromelozy na każde oko co 15 minut, aż myszy w pełni się obudzą i będą mogły normalnie mrugać. 
	UWAGA: Myszy muszą być trzymane pod obserwacją przez 45 minut, co jest przybliżonym czasem trwania znieczulenia. Jeśli mysz obudzi się przed zakończeniem procedury, procedurę należy zawiesić, a mysz należy wymienić.</li>
</ol>
2. Pozycjonowanie zwierząt
<ol>
	<li>Gdy mysz zaśnie, połóż ją na stole roboczym przodem do góry, z głową skierowaną w stronę operatora. Delikatnie pociągnij każdą nogę bez napięcia i zabezpiecz je taśmą z mikroporami, aby zapobiec nagłym mimowolnym ruchom. Przykryj mysz kocem lub gazą, aby utrzymać ciepłotę ciała.</li>
	<li>Aby usta były otwarte, umieść jeden koniec gumki ortodontycznej wokół górnych siekaczy, a drugi koniec przymocuj do górnego uchwytu bez naprężenia. Umieść drugą gumkę ortodontyczną wokół dolnych siekaczy i przymocuj ją do dolnego uchwytu za pomocą gumki.</li>
	<li>Umieść separatory policzkowe i ostrożnie przesuń język na bok, aby uzyskać lepszą widoczność.</li>
	<li>Ustaw mikroskop tak, aby umożliwić odpowiednią wizualizację górnych zębów trzonowych, zaczynając od obiektywu o najmniejszym powiększeniu. Po zlokalizowaniu wyreguluj powiększenie, aby zapewnić operatorowi optymalny komfort i ostrość.</li>
</ol>
3. Rozmieszczenie ligatury
<ol>
	<li>Gdy obraz będzie wyraźny, zidentyfikuj trzy górne zęby trzonowe: największy i proksymalny trzonowiec (M1), następny ząb trzonowy (M2) oraz najmniejszy i dystalny trzonowiec (M3). Założyć szew nylonowy 6-0, ponieważ jego średnica ułatwia założenie ligatury i powoduje mniej uszkodzeń mechanicznych tkanek niż szersze szwy.
	<ol>
		<li>Zlokalizuj dystalną stronę M2, przytrzymaj końcówkę nylonowego szwu 6-0 za pomocą kleszczy tkankowych i umieść końcówkę u podstawy brodawki od podniebienia. Zastosuj lekki nacisk przez podstawę przestrzeni międzyzębowej podniebienia w kierunku powierzchni policzkowej (<silna klasa = "xfig">Rysunek 2A).</li>
		<li>Gdy nylonowy szew 6-0 się skrzyżuje, przeciągnij go przez przestrzeń międzyzębową w kierunku strony policzkowej (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 2B).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Umieść końcówkę nylonowego szwu 6-0 u podstawy obszaru międzyzębowego na mezjalnej powierzchni M2 od strony policzkowej. Delikatnie popchnij końcówkę szwu, aby przeciąć go pod przestrzenią międzyzębową i przełóż przez przestrzeń policzkową z powrotem do podniebienia (<silna klasa = "xfig">Rysunek 2C).</li>
	<li>Delikatnie pociągnij nylonowy szew 6-0, przytrzymaj końcówkę kleszczami do tkanek, wyreguluj ją wokół M2 i zabezpiecz szew trzema prostymi węzłami.</li>
	<li>Przetnij nylonowy szew 6-0 cienkimi nożyczkami (<silna klasa="xfig">Rysunek 2D).</li>
</ol>
4. Odzyskiwanie zwierząt
<ol>
	<li>Aby uwolnić mysz, najpierw usuń gumkę wokół dolnych siekaczy, następnie usuń separatory policzkowe, usuń taśmę mikroporową z nóg, a następnie usuń gumkę wokół górnych siekaczy.
	<ol>
		<li>Zdejmij mysz ze stołu roboczego, zawiń ją w gazę lub szmatkę i połóż ją stroną zadrukowaną do góry. Trzymaj język z boku, aby utrzymać otwarte drogi oddechowe i zapobiec zablokowaniu.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Utrzymuj zwierzę w cieple, przykryj szmatką lub gazą i pod obserwacją, aż całkowicie się obudzi. Następnie umieść je w zwykłych klatkach.</li>
	<li>Nałóż kroplę hypromelozy na każde oko, aż mysz będzie mogła normalnie mrugać.</li>
	<li>Trzymaj zwierzę w standardowych warunkach.</li>
</ol>
5. Kontrola ligatury
<ol>
	<li>Co tydzień sprawdzaj trwałość ligatury nylonowej (<silna klasa="xfig">Rysunek 3A,B).</li>
	<li>Weź mysz, mocno chwyć głowę i ciało, a następnie użyj kleszczy tkankowych, aby otworzyć usta. Obserwuj nylonowy szew 6-0 wokół M2 w świetle lampy.</li>
	<li>Ustal rozwój choroby przyzębia na podstawie akumulacji biofilmu i podrażnienia mechanicznego. Sprawdź to za pomocą analizy histologicznej. 
	UWAGA: Analgezja nie jest konieczna w oparciu o zrozumienie bólu związanego z rozwojem zapalenia przyzębia.</li>
</ol>
6. Histologia
<ol>
	<li>Po 30 dniach poddać myszy eutanazji w komorze CO2 (zgodnie z instytucjonalnie zatwierdzonymi protokołami). Zbierz szczęki, jak wcześniej zgłoszono39. Umyj pobrane tkanki w 0,9% roztworze NaCl i umieść je w nowych, oznakowanych probówkach do mikrowirówek.</li>
	<li>Utrwalić próbki w 4% roztworze paraformaldehydu na 2 godziny z mieszaniem.</li>
	<li>Próbki należy myć wodą z kranu przez 2 godziny.</li>
	<li>Aby usunąć minerały z kości i przygotować wysokiej jakości skrawki parafiny, odwapnić próbki w dwudziestu objętościach 4% roztworu EDTA (pH 7,3) przez 20 dni w probówkach do mikrowirówek, zmieniać EDTA co 4 dni40.</li>
	<li>Zanurz próbki w parafinie. Wytnij 5-μm odcinki obszaru M2 i zabarwij je Hematoksyliną i Eozyną (H&E)41.</li>
</ol>
7. Analiza danych
<ol>
	<li>Obserwuj barwione skrawki histologiczne pod mikroskopem optycznym, aby przeprowadzić opisową analizę zmian w konfiguracji nabłonka bruzdy, włókien dziąsłowych, włókien przyzębia, wysokości i integralności grzebienia wyrostka zębodołowego.</li>
	<li>Określ utratę przyczepu (AL), mierząc odległość między połączeniem cementowo-szkliwnym (CEJ) a najwyższym punktem grzebienia kostnego. Narysuj linię między tymi dwoma punktami za pomocą programu do edycji cyfrowej. Wykonaj analizę histometryczną na powierzchni policzkowej i podniebiennej zgodnie z metodologią opisaną przez Semenoff i wsp.42 (<silna klasa="xfig">Rysunek 4).</li>
</ol>
8. Analiza statystyczna
<ol>
	<li>Przeanalizuj dane uzyskane z grup CTL i PT za pomocą testu U Manna-Whitneya. Uznajmy, że p < 0,05 jest statystycznie istotne. Korzystaj z oprogramowania do statystyk i wykresów do analizy.</li>
</ol>

<ol><li>Nazir, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+prevalence+of+periodontal+disease+and+lack+of+its+surveillance%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+World+J%22%5BJournal%5D)">Global prevalence of periodontal disease and lack of its surveillance.</a> Sci World J. 2020 (1), 2146160(2020).</li>
<li>Tonetti, M. S., Jepsen, S., Jin, L., Otomo-Corgel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+the+global+burden+of+periodontal+diseases+on+health%2C+nutrition+and+wellbeing+of+mankind%3A+A+call+for+global+action%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Periodontol%22%5BJournal%5D)">Impact of the global burden of periodontal diseases on health, nutrition and wellbeing of mankind: A call for global action.</a> J Clin Periodontol. 44 (5), 456-462 (2017).</li>
<li>Caton, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+classification+scheme+for+periodontal+and+peri-implant+diseases+and+conditions+-+introduction+and+key+changes+from+the+1999+classification%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Periodontol%22%5BJournal%5D)">A new classification scheme for periodontal and peri-implant diseases and conditions - introduction and key changes from the 1999 classification.</a> J Clin Periodontol. 45 (Suppl 20), S1-S8 (2018).</li>
<li>Harrel, S. K., Cobb, C. M., Sottosanti, J. S., Sheldon, L. N., Rethman, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+decisions+based+on+the+2018+classification+of+periodontal+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Compend+Contin+Educ+Dent%22%5BJournal%5D)">Clinical decisions based on the 2018 classification of periodontal diseases.</a> Compend Contin Educ Dent. 43 (1), 52-56 (2022).</li>
<li>Stöhr, J., Barbaresko, J., Neuenschwander, M., Schlesinger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bidirectional+association+between+periodontal+disease+and+diabetes+mellitus%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis+of+cohort+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Bidirectional association between periodontal disease and diabetes mellitus: A systematic review and meta-analysis of cohort studies.</a> Sci Rep. 11 (1), 13686(2021).</li>
<li>Sanz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Periodontitis+and+cardiovascular+diseases%3A+Consensus+report%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Periodontol%22%5BJournal%5D)">Periodontitis and cardiovascular diseases: Consensus report.</a> J Clin Periodontol. 47 (3), 268-288 (2020).</li>
<li>Figuero, E., Han, Y. W., Furuichi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Periodontal+diseases+and+adverse+pregnancy+outcomes%3A+Mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Periodontol+2000%22%5BJournal%5D)">Periodontal diseases and adverse pregnancy outcomes: Mechanisms.</a> Periodontol 2000. 83 (1), 175-188 (2000).</li>
<li>Jung, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+etiology+of+preeclampsia%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">The etiology of preeclampsia.</a> Am J Obstet Gynecol. 226 (2s), S844-S866 (2022).</li>
<li>Hajishengallis, G., Chavakis, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+and+systemic+mechanisms+linking+periodontal+disease+and+inflammatory+comorbidities%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Local and systemic mechanisms linking periodontal disease and inflammatory comorbidities.</a> Nat Rev Immunol. 21 (7), 426-440 (2021).</li>
<li>Arjunan, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exacerbation+of+AMD+phenotype+in+lasered+CNV+murine+model+by+dysbiotic+oral+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxidants%22%5BJournal%5D)">Exacerbation of AMD phenotype in lasered CNV murine model by dysbiotic oral pathogens.</a> Antioxidants. 10 (2), 309(2021).</li>
<li>Ma, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dementia+and+the+risk+of+periodontitis%3A+A+population-based+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">Dementia and the risk of periodontitis: A population-based cohort study.</a> J Dent Res. 101 (3), 270-277 (2022).</li>
<li>Hajishengallis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Illuminating+the+oral+microbiome+and+its+host+interactions%3A+Animal+models+of+disease%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Microbiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Illuminating the oral microbiome and its host interactions: Animal models of disease.</a> FEMS Microbiol Rev. 47 (3), fuad018(2023).</li>
<li>Hajishengallis, G., Lamont, R. J., Graves, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+enduring+importance+of+animal+models+in+understanding+periodontal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">The enduring importance of animal models in understanding periodontal disease.</a> Virulence. 6 (3), 229-235 (2015).</li>
<li>Weinberg, M. A., Bral, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+animal+models+in+periodontology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Periodontol%22%5BJournal%5D)">Laboratory animal models in periodontology.</a> J Clin Periodontol. 26 (6), 335-340 (1999).</li>
<li>Shanbhag, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peri-implant+bone+regeneration+in+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Implant+Dent%22%5BJournal%5D)">Peri-implant bone regeneration in pigs.</a> Int J Implant Dent. 10 (1), 55(2024).</li>
<li>Do, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+animal+experimental+periodontitis+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Periodontal+Implant+Sci%22%5BJournal%5D)">Development of animal experimental periodontitis models.</a> J Periodontal Implant Sci. 43 (4), 147-152 (2013).</li>
<li>Khuda, F., Baharin, B., Anuar, N. N. M., Satimin, B. S. F., Nasruddin, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+modalities+of+periodontitis+induction+in+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vet+Dent%22%5BJournal%5D)">Effective modalities of periodontitis induction in rat model.</a> J Vet Dent. 41 (1), 49-57 (2024).</li>
<li>Marchesan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+murine+model+to+study+periodontitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">An experimental murine model to study periodontitis.</a> Nat Protoc. 13 (10), 2247-2267 (2018).</li>
<li>Martuscelli, G., Fiorellini, J. P., Crohin, C. C., Howell, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+interleukin-11+on+the+progression+of+ligature-induced+periodontal+disease+in+the+beagle+dog%5BTitle%5D)+AND+%22J+Periodontol%22%5BJournal%5D)">The effect of interleukin-11 on the progression of ligature-induced periodontal disease in the beagle dog.</a> J Periodontol. 71 (4), 573-578 (2000).</li>
<li>Lin, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+ligature-induced+periodontitis+in+mice+to+explore+the+molecular+mechanism+of+periodontal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Application of ligature-induced periodontitis in mice to explore the molecular mechanism of periodontal disease.</a> Int J Mol Sci. 22 (16), 8900(2021).</li>
<li>Wong, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparing+the+healing+potential+of+late-stage+periodontitis+and+peri-implantitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Oral+Implantol%22%5BJournal%5D)">Comparing the healing potential of late-stage periodontitis and peri-implantitis.</a> J Oral Implantol. 43 (6), 437-445 (2017).</li>
<li>Chadwick, J. W., Glogauer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Robust+ligature-induced+model+of+murine+periodontitis+for+the+evaluation+of+oral+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Robust ligature-induced model of murine periodontitis for the evaluation of oral neutrophils.</a> J Vis Exp. (155), e59667(2020).</li>
<li>De Almeida, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+microRNAs+expressed+in+an+animal+model+of+periodontal+disease+and+their+impact+on+pathological+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Cell%22%5BJournal%5D)">Identification of microRNAs expressed in an animal model of periodontal disease and their impact on pathological processes.</a> Tissue Cell. 90, 102525(2024).</li>
<li>Yoon, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+changes+of+periodontal+tissue+pathology+in+a+periodontitis+animal+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Periodontal+Implant+Sci%22%5BJournal%5D)">Temporal changes of periodontal tissue pathology in a periodontitis animal model.</a> J Periodontal Implant Sci. 53 (4), 248-258 (2023).</li>
<li>Benzen, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+two+models+of+experimental+periodontitis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Scand+J+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">A comparison of two models of experimental periodontitis in rats.</a> Scand J Lab Anim Sci. 32 (2), 73-80 (2005).</li>
<li>Franca, L. F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Periodontitis+changes+renal+structures+by+oxidative+stress+and+lipid+peroxidation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Periodontol%22%5BJournal%5D)">Periodontitis changes renal structures by oxidative stress and lipid peroxidation.</a> J Clin Periodontol. 44 (6), 568-576 (2017).</li>
<li>Abe, T., Hajishengallis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+ligature-induced+periodontitis+model+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimization of the ligature-induced periodontitis model in mice.</a> J Immunol Methods. 394 (1-2), 49-54 (2013).</li>
<li>Ortiz-Sánchez, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Periodontitis+exacerbation+during+pregnancy+in+mice%3A+Role+of+macrophage+migration+inhibitory+factor+as+a+key+inductor%5BTitle%5D)+AND+%22J+Periodontal+Res%22%5BJournal%5D)">Periodontitis exacerbation during pregnancy in mice: Role of macrophage migration inhibitory factor as a key inductor.</a> J Periodontal Res. 59 (2), 267-279 (2023).</li>
<li>Lu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+stress+accelerates+ligature-induced+periodontitis+by+suppressing+glucocorticoid+receptor-%CE%B1+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Chronic stress accelerates ligature-induced periodontitis by suppressing glucocorticoid receptor-α signaling.</a> Exp Mol Med. 48 (3), e223(2016).</li>
<li>França, A. L. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+docking+study+and+antireabsorptive+activity+of+a+semi-synthetic+coumarin+derivative+from+Platymiscium+floribundum+in+the+ligature-induced+periodontitis+in+rats%3A+The+involvement+of+heme+oxygenase-1%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Oral+Investig%22%5BJournal%5D)">Molecular docking study and antireabsorptive activity of a semi-synthetic coumarin derivative from Platymiscium floribundum in the ligature-induced periodontitis in rats: The involvement of heme oxygenase-1.</a> Clin Oral Investig. 26 (2), 1701-1711 (2022).</li>
<li>Lima, M. L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+receptor+at1+appears+to+be+important+for+the+maintenance+of+bone+mass%2C+and+at2+receptor+function+in+periodontal+bone+loss+appears+to+be+regulated+by+at1+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">The receptor at1 appears to be important for the maintenance of bone mass, and at2 receptor function in periodontal bone loss appears to be regulated by at1 receptor.</a> Int J Mol Sci. 22 (23), 12849(2021).</li>
<li>Faris, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+suture+materials+used+in+oral+surgery%3A+Systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Dent+J%22%5BJournal%5D)">Characteristics of suture materials used in oral surgery: Systematic review.</a> Int Dent J. 72 (3), 278-287 (2022).</li>
<li>Nadafpour, N., Montazeri, M., Moradi, M., Ahmadzadeh, S., Etemadi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+colonization+on+different+suture+materials+used+in+oral+implantology%3A+A+randomized+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Dent%22%5BJournal%5D)">Bacterial colonization on different suture materials used in oral implantology: A randomized clinical trial.</a> Front Dent. 18, 25(2021).</li>
<li>Naghsh, N., Yaghini, J., Arab, A., Soltani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+number+of+bacterial+colonies+among+four+types+of+suture+threads+using+simple+loop+method+following+periodontal+surgery+in+patients+with+periodontitis%3A+A+single-blind+randomized+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Dent+Res+J+%28Isfahan%29%22%5BJournal%5D)">Comparison of the number of bacterial colonies among four types of suture threads using simple loop method following periodontal surgery in patients with periodontitis: A single-blind randomized clinical trial.</a> Dent Res J (Isfahan). 20, 71(2023).</li>
<li>De Castro Costa Neto, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+bacteria+adherence+to+suture+threads%3A+An+in+vitro+study%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Maxillofac+Surg%22%5BJournal%5D)">Oral bacteria adherence to suture threads: An in vitro study.</a> Oral Maxillofac Surg. 19 (3), 275-280 (2015).</li>
<li>Asher, R., Chacartchi, T., Tandlich, M., Shapira, L., Polak, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbial+accumulation+on+different+suture+materials+following+oral+surgery%3A+A+randomized+controlled+study%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Oral+Investig%22%5BJournal%5D)">Microbial accumulation on different suture materials following oral surgery: A randomized controlled study.</a> Clin Oral Investig. 23 (2), 559-565 (2019).</li>
<li>Banche, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbial+adherence+on+various+intraoral+suture+materials+in+patients+undergoing+dental+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Oral+Maxillofac+Surg%22%5BJournal%5D)">Microbial adherence on various intraoral suture materials in patients undergoing dental surgery.</a> J Oral Maxillofac Surg. 65 (8), 1503-1507 (2007).</li>
<li>Kaur Randhawa, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+mechanical+properties+of+different+suture+materials+for+oral+surgery%3A+An+in+vitro+tensile+strength+study%5BTitle%5D)+AND+%22Cureus%22%5BJournal%5D)">Assessment of the mechanical properties of different suture materials for oral surgery: An in vitro tensile strength study.</a> Cureus. 16 (8), e65952(2024).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+inducible+osteoblastic+lineage-specific+stat3+knockout+mice+to+study+alveolar+bone+remodeling+during+orthodontic+tooth+movement%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Using inducible osteoblastic lineage-specific stat3 knockout mice to study alveolar bone remodeling during orthodontic tooth movement.</a> J Vis Exp. (197), e65613(2023).</li>
<li>Wang, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Itgb6+loss-of-function+mutations+cause+autosomal+recessive+amelogenesis+imperfecta%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Itgb6 loss-of-function mutations cause autosomal recessive amelogenesis imperfecta.</a> Hum Mol Genet. 23 (8), 2157-2163 (2014).</li>
<li>Sadeghipour, A., Babaheidarian, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Making+formalin-fixed%2C+paraffin-embedded+blocks%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Making formalin-fixed, paraffin-embedded blocks.</a> Methods Mol Biol. 1897, 253-268 (2019).</li>
<li>Semenoff, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histometric+analysis+of+ligature-induced+periodontitis+in+rats%3A+A+comparison+of+histological+section+planes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Oral+Sci%22%5BJournal%5D)">Histometric analysis of ligature-induced periodontitis in rats: A comparison of histological section planes.</a> J Appl Oral Sci. 16 (4), 251-256 (2008).</li>
<li>Oz, H. S., Puleo, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+periodontal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Animal models for periodontal disease.</a> J Biomed Biotechnol. 2011, 754857(2011).</li>
<li>Zhao, P., Xu, A., Leung, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obesity%2C+bone+loss%2C+and+periodontitis%3A+The+interlink%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Obesity, bone loss, and periodontitis: The interlink.</a> Biomolecules. 12 (7), 865(2022).</li>
<li>Graves, D. T., Corrêa, J. D., Silva, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+oral+microbiota+is+modified+by+systemic+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">The oral microbiota is modified by systemic diseases.</a> J Dent Res. 98 (2), 148-156 (2019).</li>
<li>Yoshimi, K., Mashimo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+genome+editing+technologies+in+rats+for+human+disease+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Application of genome editing technologies in rats for human disease models.</a> J Hum Genet. 63 (2), 115-123 (2018).</li>
<li>Vandamme, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+for+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Rodent models for human diseases.</a> Eur J Pharmacol. 759, 84-89 (2015).</li>
<li>Liberman, D. N., Pilau, R. M., Orlandini, L. F., Gaio, E. J., Rösing, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+two+methods+for+alveolar+bone+loss+measurement+in+an+experimental+periodontal+disease+model+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Braz+Oral+Res%22%5BJournal%5D)">Comparison of two methods for alveolar bone loss measurement in an experimental periodontal disease model in rats.</a> Braz Oral Res. 25 (1), 80-84 (2011).</li>
</ol>

Autorzy oświadczają, że nie występują konflikty interesów w związku z publikacją niniejszej pracy.

Do oceny różnych aspektów, takich jak reakcje mikrobiologiczne i immunologiczne, wykorzystano kilka zwierzęcych modeli zapalenia przyzębia i wykazano pewne podobieństwa z chorobami ludzkimi43. Odkrycia te dostarczają dowodów na ramy chorób przyzębia, takie jak rola biofilmów, odpowiedź immunologiczna i interakcje z chorobami ogólnoustrojowymi44,45.
Zwierzęce modele zapalenia przyzębia mają różną złożoność i podo...

Choroba przyzębia (PD) jest chorobą zapalną tkanek podporowych zębów i jest jedną z najbardziej rozpowszechnionych chorób na świecie1; częstość występowania PD waha się od 20%-50% na całym świecie2. PD ma różne stopnie progresji; jego łagodna postać, zwana zapaleniem dziąseł, dotyczy tylko tkanek miękkich, a jego ciężka postać, zwana zapaleniem przyzębia (PT), wpływa na tkanki twarde, takie jak Bone3. Ponieważ PT jest chorobą zapalną, należy ją uznać za złożoną odpowiedź immunologiczną, która może być modyfikowana przez kilka czynników ryzyka, które mogą zmienić proces chorobowy4, takich jak cukrzyca5, choroby sercowo-naczyniowe6, interakcje hormonalne, takie jak niekorzystne wyniki ciąży7 lub stan przedrzucawkowy8, choroby zapalne9, a nawet zmiany w oku10 lub dementia11.
Dlatego, aby zrozumieć etiologię związaną z rozwojem lub rozpowszechnieniem PT, przetestować nowe lub bardziej skuteczne strategie terapeutyczne, lub zidentyfikować jakąkolwiek korelację między chorobami ogólnoustrojowymi a PT lub mikrobiotą przyzębia, potrzebne są modele zwierzęce12.
Wybór skutecznej metody badawczej jest kluczowy dla zrozumienia rozwoju PT i odpowiedniego odpowiadania na pytania badawcze13. Z biegiem lat opracowano różne modele zwierzęce do badania PT; Jednak modele takie jak naczelne, psy, króliki i miniaturowe świnie są drogie i skomplikowane w użyciu14,15,16. Mysie modele PT, w szczególności model PT indukowany ligacją, mają wiele zalet, w tym szybki rozwój, odtwarzalność, przewidywalność i niski koszt17,18,19.
Chociaż do wywołania PT używa się kilku metod, takich jak doustne szczepienie bakteryjne, wstrzykiwanie lipopolisacharydów i indukcja ligatur10,20, każda z nich ma zalety i wady17, mysi model PT indukowany przez ligaturę nylonową przypominał ludzki mechanizm jej rozwoju20,21,22,23. PT występuje poprzez zatrzymywanie zamieszkanej mikrobioty, powodując stan zapalny i prowadząc do utraty tkanek. Co więcej, myszy mogą być genetycznie modyfikowane w celu badania różnych populacji komórek lub cząsteczek będących przedmiotem zainteresowania w badaniu PT.
Podwiązanie zębów można wykonać przy użyciu różnych materiałów, takich jak druty ortodontyczne, nici jedwabne24,25, lub szwy nylonowe26. Najczęstszym materiałem do indukowania PT przez podwiązanie u myszy jest jedwab; ta metodologia została wyjaśniona przez różnych autorów, takich jak Marchesan et al.18, Abe et al.27 oraz Chadwick et al.22, każdy z własnymi modyfikacjami, a wszystkie te metody były z powodzeniem stosowane przez kilku badaczy28. Jednak założenie jedwabnego szwu wokół górnych zębów trzonowych u myszy może być skomplikowane. Marchesan i wsp. zasugerowali użycie "uchwytu na ligaturę"; Abe i wsp. oraz Chadwick i wsp. umieścili szew przez punkt kontaktowy, chociaż Chadwick i wsp. umieścili go wokół zębów trzonowych M1 i M2.
Nylonowe szwy o różnej grubości zostały użyte do opracowania PT w różnych modelach zwierzęcych29,30,31. et al.31 używali nici nylonowych 5-0; W poprzednich badaniach używaliśmy nici nylonowych 6-0 z podobnymi wynikami<klasa SUP="xref">28.
W porównaniu do szwów wielowłókienkowych, nici nylonowe są niewchłanialnymi monofilamentami syntetycznymi i wykazują niższą reakcję tkanki zapalnej 32; ponadto, nici nylonowe również umożliwiają akumulację mikrobiologiczną33,34, i istnieją dowody na adhezję Fusobacterium nucleatum i Porphyromona intermedia35,36, wraz z fakultatywnymi bakteriami beztlenowymi w szwach nylonowych12,14,17,19,24,27,35,37 (Tabela 1).
Te cechy mogą pozwolić na skupienie reakcji zapalnej głównie na akumulacji bakterii, a nie na akumulacji materiału. Ponadto nylon ma lepsze właściwości mechaniczne, takie jak wytrzymałość na rozciąganie, niż silk38.
Dlatego też, w obecnym badaniu, nylonowy szew 6-0 umieszczony wokół M2 pod obszarem kontaktu międzyzębowego wywołał rozwój zaawansowanego zapalenia przyzębia u myszy. Takie podejście pozwala na umieszczanie ligatury za pomocą zwykłych kleszczyków tkankowych, a wyniki są spójne. Po 30 dniach rozwój PT można potwierdzić za pomocą analizy histometrycznej i histologicznej.

<table><tbody><tr><td>0,9% roztwór NaCl&nbsp;</td><td>PiSA</td><td></td><td>Płukanie szczęki&nbsp;</td></tr><tr><td>6-0 szew nylonowy</td><td>Atramat, Internacional Farmac&eacute; utica</td><td>PE1946-N</td><td>Umieszczanie ligatur</td></tr><tr><td>Amscope 3.7 program do aparatu cyfrowego</td><td>Amscope&nbsp;</td><td>x64, 4.11.21973.20230107</td><td>Rozwiązanie EDTA do zbierania danych</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Sigma&ndash; Aldrich</td><td>E5134</td><td>Odwapnienie&nbsp;</td></tr><tr><td>Cienkie nożyczki</td><td>ogólne</td><td></td><td>Do cięcia nylonowego szwu 6-0</td></tr><tr><td>Kleszcze do cienkich tkanek</td><td>ogólne</td><td></td><td>6-0 nylonowy szew</td></tr><tr><td>Gaza</td><td>ogólny</td><td></td><td>Aby utrzymać temperaturę ciała&nbsp;</td></tr><tr><td>Pryzmat GraphPad&nbsp;</td><td>Pryzmat GraphPad&nbsp;</td><td>Wersja 8.3.0</td><td>Analiza danych&nbsp;</td></tr><tr><td>Hypromeloza</td><td>ogólna&nbsp;</td><td></td><td>Smar do oczu</td></tr><tr><td>Woda do wstrzykiwań</td><td>Piza</td><td></td><td>Rozcieńczanie roztworu znieczulającego</td></tr><tr><td>Ketamina</td><td>Znieczulacz, Piza</td><td></td><td>Anesthetic</td></tr><tr><td>Mikroprobówki wirówkowe&nbsp;</td><td>Cellpro</td><td>801501</td><td>Do przechowywania tkanek podczas odwapnienia&nbsp;</td></tr><tr><td>Mikropory</td><td>3M&nbsp;</td><td>1533</td><td>Aby naprawić mysz</td></tr><tr><td>Mikroskop cyfrowy aparat fotograficzny</td><td>Amscope&nbsp;</td><td>MU1603</td><td>Histologia&nbsp;</td></tr><tr><td>Mikroprobówki</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-C</td><td>Przechowywać rozcieńczalnik znieczulający</td></tr><tr><td>Mikroskop optyczny&nbsp;</td><td>UNICO</td><td>Serie G380</td><td>Histologia&nbsp;</td></tr><tr><td>Gumy ortodontyczne</td><td>TP Orthodsinics, Inc&nbsp;</td><td>niebieski</td><td>Aby pysk był otwarty&nbsp;</td></tr><tr><td>Roztwór paraformaldehydu</td><td>Sigma&ndash; Aldrich</td><td>158127</td><td>Utrwalanie tkanek&nbsp;</td></tr><tr><td>Paraplast&nbsp;</td><td>Leica</td><td>39601006</td><td>Histologia&nbsp;</td></tr><tr><td>Mikroskop chirurgiczny&nbsp;</td><td>Carl Zeiss GmbH Berlin</td><td></td><td>6-0 nylonowy szew</td></tr><tr><td>Ultra drobne strzykawki insulinowe 6 mm U-100, 0,3 ml</td><td>BD</td><td>326385</td><td>Do wstrzykiwania roztworu znieczulającego&nbsp;</td></tr><tr><td>Gumki uniwersalne&nbsp;</td><td>ogólny</td><td></td><td>Aby utrzymać otwarty pysk&nbsp;</td></tr><tr><td>Stół roboczy</td><td>Ogólne&nbsp;</td><td></td><td>Drewniana podstawa do podparcia myszy&nbsp;</td></tr><tr><td>Ksylazyna</td><td>Porcin, Piza</td><td></td><td>Preanesthetic</td></tr></tbody></table>

mysi model zaawansowanego zapalenia przyzębia wywołanego przez ligaturę nylonową w drugim górnym zębie trzonowym

Murine Model of Advanced Periodontitis Induced by Nylon Ligature in the Second Upper Molar

Choroba przyzębia (PD) jest zaburzeniem zapalnym wpływającym na tkanki podporowe zębów i jest jedną z najbardziej rozpowszechnionych chorób na świecie. Jego ciężka postać, zapalenie przyzębia, prowadzi do zniszczenia tkanek miękkich, zębów i kości. Zwierzęce modele zapalenia przyzębia zostały opracowane przy użyciu naczelnych, psów, miniaturowych świń i myszy. Wśród nich mysi model indukowany ligaturą oferuje takie korzyści, jak szybki postęp choroby, odtwarzalność, przewidywalność i niskie koszty, jednocześnie skutecznie odwzorowując kluczowe aspekty zapalenia przyzębia u ludzi. Modele mysie wykorzystujące ligatury dostarczyły cennych informacji na temat mikrobiologicznych i immunologicznych mikrośrodowisk tkanki przyzębia, podkreślając kluczową rolę biofilmów w odpowiedziach immunologicznych i ich związek z chorobami ogólnoustrojowymi. W badaniu przedstawiono zmodyfikowaną metodę podwiązywania nylonu w celu wywołania zapalenia przyzębia u myszy. Modyfikacja polega na użyciu szwu nylonowego zamiast szwu jedwabnego i umieszczeniu go poniżej obszaru styku międzyzębowego, zamiast przepuszczania go przez punkt kontaktowy. Takie podejście upraszcza technikę, jednocześnie skutecznie wywołując zapalenie przyzębia. Szczegółowa metodyka zakładania szwów jest zilustrowana graficznie, a postęp paradontozy jest demonstrowany za pomocą analiz histologicznych i histometrycznych.

Niniejsza metodologia pozwala na indukcję zapalenia przyzębia (PT) u myszy od drugiego tygodnia wzwyż. Myszy były monitorowane co tydzień w celu weryfikacji obecności ligatury. Eutanazję przeprowadzono w 30. dniu. Oceńiono cechy kliniczne wszystkich grup. Grupa kontrolna zachowała w czasie prawidłowe cechy, takie jak kolor i struktura dziąsła marginalnego. W porównaniu z grupą CTL, w tkankach grupy PT zaobserwowano stan zapalny, krwawienie oraz tworzenie się kieszonek przyzębia w obrębie brzegu dziąsła u myszy z indukowa...

To badanie opisuje zmodyfikowaną metodę podwiązania nylonu 6-0 do wywoływania zapalenia przyzębia u myszy, która jest wysoce powtarzalna i stanowi alternatywę dla badaczy do badania chorób przyzębia od ich rozwoju do patologicznych konsekwencji.

Mysi model zaawansowanego zapalenia przyzębia wywołanego przez ligaturę nylonową w drugim górnym zębie trzonowym

Periodontal disease (PD) is an inflammatory disorder affecting the supporting tissues of teeth and is one of the most prevalent diseases worldwide. Its ...

Zakres naszych badań polega na zbadaniu czynników komórkowych i molekularnych sprzyjających zapaleniu przyzębia, w przypadku których stosujemy mysi model zapalenia przyzębia wywołanego ligaturą.Ostatnie badania wykazały znaczenie stanu zapalnego. Dysbioza i choroby ogólnoustrojowe są czynnikami decydującymi o rozwoju paradontozy.Technologia stosowana ostatnio w periodontologii obejmuje między innymi modele zwierzęce, niektóre zwracają uwagę na różne cząsteczki, sekwencjonowanie proteomiczne, cytometrię przepływową i histologię.Obecne wyzwania eksperymentalne są związane ze zrozumieniem interakcji między chorobami ogólnoustrojowymi a zapaleniem przyzębia.Używamy mysiego modelu zapalenia przyzębia w podwiązaniu, aby wykazać, że cytokina prozapalna A i S bierze udział w rozwoju zapalenia przyzębia w czasie ciąży.[Narrator] Aby rozpocząć, umieść znieczuloną mysz na stole roboczym skierowaną do góry, z głową skierowaną w stronę operatora. Delikatnie pociągnij każdą nogę bez napięcia i zabezpiecz je taśmą z mikroporami, aby zapobiec nagłym mimowolnym ruchom. Przykryj mysz kocem lub gazą, aby utrzymać ciepło jej ciała. Umieść jeden koniec gumki ortodontycznej wokół górnych siekaczy, a drugi koniec przymocuj do górnego uchwytu bez wywierania napięcia. Następnie umieść drugą gumkę ortodontyczną wokół dolnych siekaczy i przymocuj ją do dolnego uchwytu za pomocą gumki. Teraz włóż separatory policzkowe i ostrożnie przesuń język na bok, aby poprawić widoczność. Ustaw mikroskop tak, aby uwidocznić górne zęby trzonowe przy użyciu obiektywu o najmniejszym powiększeniu. Po zlokalizowaniu zwiększa powiększenie, aby zoptymalizować komfort i ostrość operatora. Gdy obraz jest wyraźny, zidentyfikuj największy i proksymalny trzonowiec M1, następny trzonowiec M2 oraz najmniejszy i dystalny trzonowiec M3. Do zakładania ligatury należy używać nici nylonowej 6-0, ponieważ powoduje ona mniej uszkodzeń mechanicznych w porównaniu z szerszymi szwami. Za pomocą kleszczyków tkankowych przytrzymaj dystalną końcówkę nylonowego szwu 6-0 i umieść ją u podstawy brodawki od strony podniebienia na dystalnej części M2. Zastosuj lekki nacisk przez podstawę przestrzeni międzyzębowej podniebiennej, aby przesunąć ją w kierunku powierzchni policzkowej. Kiedy szew się krzyżuje, przeciągnij go przez przestrzeń międzyzębową w kierunku strony policzkowej. Teraz umieść końcówkę szwu u u podstawy obszaru międzyzębowego na mezjalnej powierzchni M2 od strony policzkowej. Popchnij go delikatnie, aby przekroczyć przestrzeń międzyzębową i przełóż go z powrotem przez przestrzeń policzkową do podniebienia. Delikatnie pociągnij za nylonowy szew 6-0. Przytrzymaj końcówkę kleszczami tkankowymi wyregulowanymi wokół M2 i zabezpiecz szew za pomocą trzech prostych węzłów. Następnie przetnij szew cienkimi nożyczkami. Aby zwolnić mysz, najpierw usuń gumkę wokół dolnych siekaczy, a następnie separatory policzkowe. Następnie usuń gumkę wokół górnych siekaczy i taśmę z mikroporami z nóg. Teraz zdejmij mysz ze stołu roboczego i trzymaj język na boku, aby utrzymać otwarte drogi oddechowe i zapobiec zablokowaniu. Owiń mysz gazą lub szmatką i umieść ją ekranem do góry. Utrzymuj zwierzę w cieple, przykryj szmatką lub gazą i pod obserwacją, aż całkowicie się obudzi. Nałóż po jednej kropli hypromelozy do każdego oka, aż mysz będzie mogła normalnie mrugać. Następnie włóż go z powrotem do zwykłej klatki. Aby sprawdzić trwałość ligatury, weź mysz. Trzymaj mocno głowę i ciało i użyj kleszczy tkankowych, aby otworzyć usta. Pod lampą obserwuj nylonowy szew 6-0 wokół M2. Aby potwierdzić tworzenie się biofilmu za pomocą histologii, po 30 dniach należy pobrać szczęki od zwierząt poddanych eutanazji. Umyj tkanki w 0,9% roztworze chlorku sodu i umieść je w oznakowanych probówkach do mikrowirówek. Utrwalić próbki w 4% roztworze paraformaldehydu na dwie godziny pod mieszaniem. Następnie umyj utrwalone próbki wodą z kranu przez dwie godziny. Następnie odwapnić próbki w 20 objętościach 4% EDTA o pH 7,3 przez 20 dni, zmieniając EDTA co cztery dni. Następnie zanurz próbki w parafinie. Wytnij pięć skrawków mikrometru z obszaru M2 i zabarwij je hematoksyliną i eozyną. Obserwuj barwione skrawki pod mikroskopem optycznym, aby opisać zmiany w nabłonku bruzdy, włóknach dziąseł i przyzębia, wysokości i integralności grzebienia wyrostka zębodołowego. Zmierz ubytek przyczepu, określając odległość między połączeniem szkliwa cementowego a najwyższym punktem grzebienia kostnego za pomocą programu do edycji cyfrowej. Po analizie histometrycznej przeanalizuj dane z grup kontrolnych i periodontologicznych za pomocą testu U Manna-Whitneya. Zapalenie przyzębia powoduje utratę tkanek u myszy, stan zapalny, krwawienie i tworzenie się kieszonek przyzębnych na brzegu dziąsła do 30 dnia, w przeciwieństwie do grupy kontrolnej. Analiza histologiczna potwierdziła istotne uszkodzenia strukturalne w grupie PT, z obecnością kieszonek przyzębnych, oderwaniem włókien i migracją wierzchołkową nabłonka. Obserwowano również ubytki jąder komórkowych w dziąśle i kości po stronie policzkowej i podniebiennej. Natomiast grupa CTL wykazała zdrową histologię. Analiza ilościowa wykazała znacznie zwiększoną utratę przyczepu w grupie PT z utratą strony policzkowej na około 209 mikrometrów i po stronie podniebienia na około 254 mikrometrach.

murine-model-advanced-periodontitis-induced-nylon-ligature-second

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Tutaj prezentujemy protokół miejscowego wywoływania wierzchołkowego zapalenia przyzębia u myszy. Pokazujemy, jak wywiercić otwór w zębie myszy i odsłonić jego miazgę, aby wywołać miejscowy stan zapalny. Przedstawiono również metody analityczne mające na celu zbadanie charakteru tego zapalenia, takie jak mikrotomografia komputerowa i histologia.

Wywoływanie wierzchołkowego zapalenia przyzębia u myszy

Ten artykuł przedstawia protokół tworzenia indukowanego przez ligaturę modelu mysiego zapalenia przyzębia obejmującego wiele zębów trzonowych szczęki, co skutkuje większymi obszarami zaangażowanej tkanki dziąsłowej i kości do późniejszej analizy, a także zmniejszeniem zużycia przez zwierzęta. Opisano również technikę oceny neutrofili w jamie ustnej w sposób analogiczny do osób badanych u ludzi.

Solidny model mysiego zapalenia przyzębia indukowany ligaturą do oceny neutrofili jamy ustnej

W tym badaniu, szczurzy model indukcji zapalenia przyzębia jest prezentowany poprzez kombinację ligatury retencyjnej i powtarzających się iniekcji lipopolisacharydu pochodzącego z Porphyromonas gingivalis, przez 14 dni wokół pierwszych zębów trzonowych szczęki. Techniki podwiązania i iniekcji LPS były skuteczne w wywoływaniu zapalenia ozębnej, co skutkowało utratą kości wyrostka zębodołowego i stanem zapalnym.

Indukcja zapalenia przyzębia poprzez połączenie ligatury i wstrzyknięcia lipopolisacharydu w modelu szczurzym

To jest raport na temat eksperymentalnego modelu zapalenia okołoimplantowego wywołanego ligaturą u myszy. Opisujemy wszystkie etapy chirurgiczne, od przed- i pooperacyjnego postępowania ze zwierzętami, ekstrakcji, wszczepienia implantu i zapalenia okołoimplantowego wywołanego podwiązaniem.

Eksperymentalny model peri-implantitis wywołanego ligaturą u myszy

Eksperymentalne modele mysie astmy alergicznej oferują nowe możliwości badania patogenezy choroby oraz opracowywania nowych terapii. Modele te są odpowiednie do pomiaru czynników kontrolujących alergiczną odpowiedź immunologiczną, zapalenie dróg oddechowych i patofizjologię płuc.

Mysi model astmy indukowanej alergenem

Zakażenie człowieka przez Entamoeba histolytica prowadzi do amebii, głównej przyczyny biegunki w krajach tropikalnych. Zakażenie jest inicjowane przez interakcje patogenu z komórkami nabłonka jelitowego, powodując otwarcie kontaktów komórka-komórka, a w konsekwencji biegunkę, po której czasami następuje zakażenie wątroby. W tym artykule przedstawiono model do oceny wczesnych interakcji gospodarz-patogen, aby lepiej zrozumieć patogenezę amebiozy.

Analiza uszkodzeń nabłonka wywołanych zakażeniem Entamoeba histolytica

Ten protokół opisuje nieinwazyjną technikę pobierania próbek nienaruszonego płynu z błony śluzowej z górnych dróg oddechowych. Może być stosowany do ilościowego oznaczania in vivo poziomów mediatorów białkowych, takich jak cytokiny i chemokiny, u osób w każdym wieku.

Nieinwazyjne pobieranie próbek płynu wyściełającego błonę śluzową w celu ilościowego określenia in vivo poziomów mediatorów immunologicznych w górnych drogach oddechowych

Celem tego protokołu jest umożliwienie wykrywania in vivo specyficznego dla antygenu zabijania komórki docelowej w modelu mysim.

In vivo (in vivo) Test do wykrywania swoistej dla antygenu funkcji cytolitycznej limfocytów T przy użyciu modelu szczepienia

Tutaj prezentujemy protokół tworzenia immunokompetentnego mysiego modelu infekcji ośrodkowego układu nerwowego ICR (Institute of Cancer Research), aby pokazać rozwój neuropatii. Monitorowanie ostrych wirusowych zaburzeń encefalitycznych za pomocą identycznych wyników choroby można przeprowadzić w celu wykazania neuropatii wywołanej wirusem dengi in vivo.

Mysi model ostrej choroby podobnej do wirusowego zapalenia mózgu wywołanej wirusem dengi

Opisano prosty i niezawodny model gryzoni indukowany dietą dla niealkoholowego stłuszczeniowego zapalenia wątroby (NASH), osiągnięty dzięki trzymaniu zwierząt bez SPF i podawaniu specyficznej diety wysokotłuszczowej. Opisujemy identyfikację podzbiorów komórek odpornościowych wątroby i tkanki tłuszczowej w celu podsumowania ludzkich warunków immunologicznych poprzez wystawienie myszy na zarazki środowiskowe.

Zaawansowany mysi model niealkoholowego stłuszczeniowego zapalenia wątroby w połączeniu z cukrzycą typu 2

Poznaj zmodyfikowaną metodę ligatury nylonowej 6-0 do wywoływania periodontitis u myszy. Model ten pozwala badać czynniki komórkowe i molekularne choroby oraz jej patologiczne konsekwencje.

Mysi model zaawansowanego zapalenia przyzębia wywołanego przez ligaturę nylonową w drugim górnym zębie trzonowym

Przeglądaj więcej filmów