3 lipca 2025
Przedstawiamy tutaj protokół mający na celu ustanowienie długoterminowego modelu przechowywania i przeszczepu chłodzenia wątroby u susła daurskiego (DGS), który był technicznie trudny w standardowych modelach gryzoni.
Badamy ssaki przystosowane do zimna, takie jak DGS, aby opracować lepsze metody zachowania narządów. Naszym celem jest zrozumienie ich naturalnego przechowywania w chłodzie oraz poprawa zachowania ludzkich organów. Nasze przyszłe badania będą analizować, jak poziom hibernacji, ekstremalny zimno i stres będą wykorzystywane do poprawy zachowania organów, wydłużenia czasu przechowywania i zwiększenia sukcesu przeszczepów.
Na początek wykonaj wymagane nacięcie rozciągające się od wyrostka ksunioidalnego do współstywy łonowej u znieczulonego zwierzęcia. Użyj patyczków watowych, aby ostrożnie uwolnić podwodną żyłę żyłową dolną powyżej prawej żyły nerkowej od otaczających tkanek zwierzęcia. Następnie podwiązać żyłę nadnerczową i lędźwiową prawej ręki, prowadząc do żyły głównej dolnej w pobliżu wątroby, stosując szwy 7-0.
Wyizoluj właściwą tętnicę wątrobową, tętnicę dwunastnicową oraz tętnicę wątrobową zwykłą z otaczających tkanek za pomocą mikrokleszczy. Włóż igłę dożylną o grubości siedmiu gauge do aorty i zabezpiecz ją zaciskiem. Następnie naciń przeponę, aby odsłonić aortę piersiową i założyć zacisk naczyniowy na aortę piersiową.
Po przekroczeniu wątroby nacinaj żyłę wewnątrzklatkową oraz żyłę dolną podwodno-dołną nad prawą żyłą nerkową, aby umożliwić odpływ perfuzacji. Podczas przelewu wyciąć pęcherzyk żółciowy nożyczkami chirurgicznymi. Wykonaj małe nacięcie na przedniej ścianie wspólnego przewodu żółciowego i włóż stent przewodu żółciowego do przewodu, zabezpieczając go szwem jedwabnym 7-0.
Teraz, używając mikrokleszczy, odizoluj żyłę wrotną od otaczającej tkanki łącznej. Podwiązać i przeciąć żyłę odźwiernicową szwem 7-0 oraz przeciąć pień żyły wrotnej na poziomie żyły śledzionowej. Podwiązać i przeciąć tętnicę gastroduodenalną dystalnie i tworzyć małe nacięcie na przedniej ścianie tętnicy wątrobowej wspólnej.
Włóż stent tętnicy wątrobowej do wspólnej tętnicy wątrobowej i zabezpiecz ją szwem jedwabnym 7-0. Odizoluj lewą żyłę przeponową od żyły nadskórowej dolnej i podwiązuj ją szwitem 7-0. Rozcinać nadwłosową żyłę dolną jak najbliżej przepony za pomocą precyzyjnych narzędzi chirurgicznych.
Podwiązać więzadło wątrobowo-naczyniowe za pomocą szwu 7-0. Zabezpiecz uchwyt mankietu żyły wrotnej zaciskiem naczyniowym i ustabilizuj go za pomocą kleszczy przeciwkomarowych. Ostrożnie przeprowadź żyłę wrotną przez mankiet, upewniając się, że nie jest skręcona, i złóż żyłę wrotną na mankiet i zabezpiecz ją szwem 7-0.
Spodwiązuj przewód torbielowaty stabilnie. Umieść pojedynczy szew jedwabny o grubości 7-0 wokół żyły głównej dolnej podwodno-półkowej, pomiędzy przyczepionym mankietem a prawym dolnym płatem wątroby. Wstaw 8-0 szwy boczne na obu bocznych narożnikach dolnej żyły nadgłowej od zewnątrz do wnętrza.
Ostrożnie przeprowadź kleszcze za żyłą nadwłosową dolną i załóż wokół niej jedwabny szew 7-0. Podwiązać wspólny przewód żółciowy proksimalnie szwem jedwabnym 7-0 i przeciąć go powyżej więza. Po oddzieleniu przewodu żółciowego przeciąć tętnicę żołądkowo-dwunastnicową oraz właściwą tętnicę wątrobową pomiędzy podwiązaniami.
Na końcu wspólnej tętnicy wątrobowej utworz rozgałęzienie w kształcie litery Y i pozostawij dwucentymetrowy szew na odpowiedniej ligaturze do późniejszego użycia. Uwolnić prawą i lewą odnogę żyły wrotnej. Następnie na każdej gałęzi załóż pięciocentymetrowe szwy 7-0, aby ułatwić późniejszą obróbkę.
Teraz zaciskaj żyłę dolną podwodno-środkową nad prawą żyłą nerkową, a następnie zaciskaj żyłę wrotną nad żyłą odźwierową. Wstrzyknąć 1,5 mililitra soli fizjologicznej do prawej żyły wrotnej w ciągu 10 sekund, używając dwumililitrowej strzykawki, aby wypłukać krew z wątroby. Aby cofnąć przeponę, delikatnie pociągnij jedwabny szew 7-0 umieszczony wokół dolnej żyły głównej nadgłowej.
Następnie załóż zacisk bulldog na tętno piersiowe dolne nadgórne, w tym część przepony w zacisku. Następnie przetnij żyłę dolną nad wątrobą. Zabezpiecz szwy 7-0 na obu gałęziach żyły wrotnej i przetnij żyłę wrotną powyżej tych ligatur.
Następnie przeciąć żyłę dolną podwodno-półkową blisko mięździa wątroby i natychmiast usunąć wątrobę, przecinając pozostałe przystawy więzadeł. Zszyj tylną ścianę ośmioma do dziesięciu ciągłymi oczkami zaczynając od lewego narożnika. Kontynuuj zamykanie przedniej ściany, używając 10 do 12 oczek przesuwających się z prawej na lewą stronę tym samym szwem.
Do rekonstrukcji żyły wrotnej użyj wcześniej umieszczonych pięciocentymetrowych szwów usztywniających do delikatnego podniesienia obu rozgałęzień żyły wrotnej, stosując trakcję do góry za pomocą zacisków naczyń. Przepłukać lumen żyły wrotnej heparynizowaną solą fizjologiczną w stężeniu 300 jednostek międzynarodowych na mililitr. Wprowadź mankiet do żyły wrotnej i zabezpiecz go szwem jedwabnym 7-0.
Kolejno zwolnić zaciski na żyłie wrotnej oraz na żyłę dolną nadwłosową, aby przywrócić przekroczenie przeszczepu i zakończyć fazę anhepatyczną. Następnie wykonaj małe nacięcie na rozgałęzieniu konfiguracji Y na końcu wspólnej tętnicy wątrobowej biorcy. Przepłukaj światło wspólnej tętnicy wątrobowej solą heparynową o stężeniu 300 jednostek międzynarodowych na mililitr.
Wprowadź stent tętniczy do tętnicy wątrobowej i zabezpiecz go szwem jedwabnym 7-0. Zwiąż szwy na wstrzymce zarówno po stronie dawcy, jak i biorcy, aby ustabilizować stent i zapobiec jego przesunięcie. Zwolnij mikronaczyniowy klips, aby przywrócić przepływ krwi tętniczej.
Następnie wykonaj małe nacięcie na przedniej ścianie wspólnego przewodu żółciowego biorcy. Włóż stent przewodu żółciowego do lumenu i zabezpiecz go szwem jedwabnym 7-0. Na koniec zwiąż szwy na przewodach żółciowych dawcy i biorcy, aby dobrze utrzymać stent na miejscu i zapobiec przemieszceniu.
Odbiorcy przeszczepów wątroby przechowywanych w zimnym roztworze UW przez 24 godziny wykazywali 100% przeżywalności po siedmiu dniach po przeszczepie, niezależnie od tego, czy przed przeszczepem byli w stanie hibernacji, czy nie. Dla porównania, wszystkie szczury SD otrzymające przeszczepy wątroby od innych szczurów SD przechowywanych przez 24 godziny w zimnym roztworze UW, zmarły w ciągu 12 godzin po przeszczepie.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych
Niniejsze badanie przedstawia protokół ustanowienia modelu długoterminowego chłodniczego przechowywania i transplantacji wątroby u świstaków dajurskich (DGS). Celem badań jest usprawnienie metod konserwacji narządów poprzez wykorzystanie unikalnych adaptacji ssaków przystosowanych do niskich temperatur.
Uszkodzenia przeszczepu indukowane przechowywaniem w niskiej temperaturze pozostają krytycznym wąskim gardłem w transplantacji wątroby, ograniczając zarówno żywotność organu, jak i regenerację po przeszczepieniu. Model z wykorzystaniem wiewiórki dauryjskiej wprowadza unikalny, biologicznie odporny system do badania adaptacji do zimna oraz tolerancji na niedokrwienie i reperfuzję, co bezpośrednio wpływa na wiarygodność przewidywań w strategiach konserwacji narządów. Platforma ta umożliwia mechanistyczną redukcję ryzyka na etapie odkryć, wspierając ciągłość translacyjną dla rozwiązań w zakresie konserwacji nowej generacji.
Model ten sytuuje badania nad adaptacją do zimna na styku wczesnych odkryć i walidacji przedklinicznej, umożliwiając iteracyjne testowanie hipotez oraz uzyskanie wglądu w mechanizmy konserwacji narządów.