Translacyjnie istotny model resekcji guza dla przedklinicznych modeli myszy raka płaskonabłonkowego jamy ustnej
3 kwietnia 2026
Unikalna metoda chirurgicznej resekcji raka płaskonabłonkowego jamy ustnej powstałych w jamie ustnej została przedstawiona tutaj.
Prace te koncentrują się na badaniu nowotworów jamy ustnej, ustanawiając praktyczny przedkliniczny model resekcji i nawrotu guza ortotopowego. Chirurgia jest podstawową metodą leczenia u większości pacjentów z rakiem jamy ustnej. Ten protokół pozwala nam to zbadać.
Na początek pobierz kolbkę z posiewką zawierającą 80% współpłynnych komórek raka jamy ustnej Mach 2. Usuń medium hodowlane z piersiówki. Przemyj przymocowane komórki magnezem i bezwapniowym PBS, aby usunąć pozostałe surowicę.
Dodaj objętość wystarczającą, aby całkowicie pokryć powierzchnię naczynia zawierającego komórki, a następnie zasysaj ją. Dodaj 0,05% trypsyny do kolby hodowlanej, aby odpowiednio pokryć dno. Inkubuj kolbę w temperaturze 37 stopni Celsjusza z 5% dwutlenku węgla przez około 5 minut, aby umożliwić odłączenie komórek.
Gdy zauważysz odwarstwienie komórek, schłodzić trypsynę, dodając co najmniej dwukrotnie większą objętość niż całe ośrodki. Delikatnie mieszać, aby zatrzymać aktywność enzymatyczną. Przenieś zawiesinę ogniwową do rurki wirówki i wirować w temperaturze 350G przez 5 minut w temperaturze pokojowej.
Usuń nadmiar po wirówce. Ponownie zawiesić granulkę komórkową w zimnym PBS. Usuń aliquot z zawieszenia do liczenia komórek.
Za pomocą dodatkowego PBS dostosuj zawiesinę komórkową do zoptymalizowanego stężenia do inokulacji. Trzymaj przygotowaną zawiesinę komórkową na lodzie do momentu użycia. Dokładnie wymieszaj zawiesinę komórkową, aby zapewnić równomierny rozkład komórek.
Zbierz zawiesinę do strzykawki insulinowej o pojemności 0,3 mililitra. Trzymaj znieczuloną mysz jedną ręką od tylnej szyi, tak aby przednia strona była zwrócona do opiekuna, a głowa była skierowana do góry. Utrzymuj usta otwarte i dostępne.
Ostrożnie włóż strzykawkę do otwartej jamy ustnej pod kątem w dół, w kierunku lewego dolnego przedsionka żuchwy. Przesuń igłę przez dolną błonę śluzową policzków. Dostarcz 30 mikrolitrów zawiesiny ogniwa do obszaru docelowego.
Przytrzymaj strzykawkę na miejscu przez 5 sekund, a następnie powoli ją wyjmij, aby zapobiec śledzeniu komórek. Upewnij się, że mysz wraca do normalnego stanu fizycznego i behawioralnego po szczepieniu. W miarę rozwoju guzów monitoruj wagę znieczulonej myszy za pomocą równowagi i oceniaj wzrost guza za pomocą cyfrowych zacisków dwa razy w tygodniu.
Wybierz czystą salę zabiegową z drzwiami do zamknięcia i ograniczonym ruchem. Umieść nową klatkę z czystą, suchą ściółką i gniazdkiem z ręcznika papierowego, częściowo na elektrycznym podgrzewaczu, aby ją podgrzać. Podgrzej sterylizator z kulkami do temperatury roboczej 250-265 stopni Celsjusza.
Włącz podkładkę chirurgiczną podgrzewaną wodą i ustaw ją na około 39 stopni Celsjusza. Nałóż niewielką ilość kremu do usuwania owłosienia na miejsce usunięcia guza u znieczulonej myszy za pomocą aplikatora bawełnianego. Zadbaj o odpowiednie marginesy, aby włosy nie dostały się do miejsca nacięcia.
Po 10 sekundach zetrzyj włosy suchą, czystą gazą. Usuń resztki kremu gazą lub wacikami zwilżonymi wodą. Ułóż znieczuloną mysz na termoforze w pozycji leżącej, z przednią stroną skierowaną do góry.
Umieść nos tuż wewnątrz stożka nosowego. Teraz nałóż odpowiednią ilość sterylnej maści lubrykantnej na każde oko, aby zapobiec wysuszeniu podczas zabiegu. Używając czystej bawełnianej końcówki, wymazuj miejsce resekcji 70% alkoholem izopropylowym, następnie 10% jodem, i powtórz sekwencję trzy razy.
Po ostatnim przejściu usuń jod za pomocą alkoholu izopropylowego 70%. Nosząc sterylne rękawice i odpowiedni sprzęt ochrony osobistej, przygotuj sterylne pole o szerokości co najmniej 18 cali i długości 26 cali. Rozłóż wszystkie potrzebne sterylne narzędzia i materiały.
Przykryj mysz sterylną zasłoną. Używając sterylnych nożyczek, wytnij otwór dostępu nad miejscem resekcji. Nowym skalpelem chirurgicznym wykonaj nacięcie podżuchwe tuż poniżej guza wzdłuż lewej linii szczęki.
Używając hemostatów Hartmanna, delikatnie poszerz otwór nacięcia w kierunku guza. W razie potrzeby osusz krew sterylną gazą. Zlokalizuj guz i przytrzymaj go za pomocą kleszczy.
Asystent w sterylnych OOP może trzymać mysz lub jej skórę na miejscu podczas tego zabiegu. Za pomocą nożyczek chirurgicznych przeciń podstawę guza, aby usunąć całą widoczną tkankę. Przełóż skórę na usunięte miejsce guza, a następnie zamknij nacięcie 4-6 szwami przerwanymi, używając szwów o trwałym charakterze 4/0 Vicryl.
Po zamknięciu nacięcia delikatnie przenieś mysz do podgrzanej klatki i monitoruj jej powrót świadomości i ruchomości aż do pełnego wyzdrowienia. Natychmiast podaj zmiękczoną karmę, umieszczając granulki z wodą mydłem w dostępnym pojemniku w klatce. Jeśli nie pojawią się komplikacje, wznowij normalną stałą dietę myszy przy kolejnym rutynowym karmieniu.
Za pomocą linii komórkowej Mach 2 powstały guzy i zostały z niej usunięte przez myszą błonę śluzową jamy ustnej. Kinetyka wzrostu guza została scharakteryzowana przed resekcją. Po resekcji guza zaobserwowano opóźnienie wzrostu guza w dniach bezpośrednio po operacji, co potwierdza zmniejszenie powierzchni guza krótko po resekcji w porównaniu z guzami nieusuniętymi.
W grupie z wycięciem zaobserwowano niewielkie zwiększenie przeżywalności w porównaniu z grupą kontrolną bez sekcji, choć różnica ta nie była istotna statystycznie. Myszy w grupie niesekcjonowanej po raz pierwszy osiągnęły kryteria eutanazji do 12. dnia po operacji, podczas gdy myszy z grupy usuniętej nie spełniały kryteriów eutanazji aż do 19. dnia. Najważniejszym aspektem przy stosowaniu tego protokołu jest spójność w szczepieniu i wszczepianiu guza.
Poza tym zabiegiem możemy przetwarzać usunięte guzy do analizy za pomocą cytometrii przepływowej lub immunohistochemii. Przyszłe badania mogą rozwijać tę pracę, łącząc ją z dodatkowym leczeniem. Możesz także zbadać badania immunologicznego mikrośrodowiska guza w kontekście resekcji i nawrotu.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych
Przegląd
Niniejszy artykuł przedstawia szczegółowy protokół tworzenia syngenicznego, klinicznie istotnego ortotopowego mysiego modelu subtotalnej resekcji raka płaskonabłonkowego jamy ustnej (OSCC). Model ten umożliwia badanie nawrotów nowotworu oraz oporności na leczenie po resekcji chirurgicznej, ściśle naśladując standard opieki nad pacjentami z OSCC u ludzi. Podejście to eliminuje ograniczenia poprzednich modeli przedklinicznych poprzez uproszczenie procesu indukowania guza oraz procedur chirurgicznych, zapewniając cenną platformę do oceny terapii po resekcji.
Kluczowe elementy badania
Dziedzina nauki
- Biologia nowotworów
- Modelowanie przedkliniczne
- Onkologia głowy i szyi
Wprowadzenie
- OSCC jest powszechnie leczone poprzez resekcję chirurgiczną, po której następują dostosowane do ryzyka terapie adjuwantowe.
- Obecne modele przedkliniczne często nie uwzględniają komponentów chirurgicznych lub wymagają złożonej mikrochirurgii i dodatkowych odczynników.
- Istnieje potrzeba opracowania ulepszonych modeli do badania nawrotów miejscowych i regionalnych oraz oporności na leczenie.
- Zrozumienie mechanizmów nawrotu nowotworu po operacji jest kluczowe dla opracowania skutecznych terapii.
Cel badania
- Opracowanie uproszczonego, istotnego klinicznie mysiego modelu subtotalnej resekcji OSCC.
- Umożliwienie badania mechanizmów nawrotu i oporności nowotworu po operacji.
- Zapewnienie platformy do oceny terapii adjuwantowych w warunkach naśladujących praktykę kliniczną.
Zastosowane metody
- Hodowla i przygotowanie komórek raka jamy ustnej Mach Two do inokulacji.
- Ortotopowe wstrzyknięcie komórek nowotworowych do błony śluzowej policzka u znieczulonych myszy.
- Monitorowanie wzrostu guza i przeprowadzanie podcałkowitej resekcji chirurgicznej w warunkach sterylnych.
- Opieka pooperacyjna, monitorowanie oraz ocena nawrotu nowotworu i przeżywalności.
Główne wyniki
- Pomyślne wytworzenie i wycięcie guzów błony śluzowej policzka u myszy.
- Po resekcji zaobserwowano opóźnienie w odrastaniu guza w porównaniu z nieoperowaną grupą kontrolną.
- Niewielkie wydłużenie całkowitego przeżycia u myszy po resekcji, choć nie było ono istotne statystycznie.
- Spójność protokołu w zakresie inokulacji i przyjęcia się przeszczepu guza jest kluczowa dla powtarzalności wyników.
Wnioski
- Model ten skutecznie odtwarza kliniczne postępowanie chirurgiczne w przypadku OSCC u myszy.
- Umożliwia on badanie nawrotów nowotworu i oporności w sposób kontrolowany i powtarzalny.
- Model stanowi podstawę do przyszłych badań nad terapiami adjuwantowymi oraz analizą mikrośrodowiska guza.
Najczęściej zadawane pytania
Znaczenie dla przemysłu
Modele resekcji u myszy o znaczeniu translacyjnym są kluczowe dla wypełnienia luki między badaniami przedklinicznymi a postępowaniem klinicznym w przypadku raka płaskonabłonkowego jamy ustnej (OSCC). Model ten umożliwia bezpośrednią analizę nawrotów nowotworu oraz oporności na leczenie po resekcji chirurgicznej, co odzwierciedla kliniczny standard opieki. Jego powtarzalność i zgodność z praktyką kliniczną wspierają dostosowany do ryzyka rozwój nowych terapii adjuwantowych w potoku badań onkologicznych.
Zastosowania strategiczne w badaniach i rozwoju biofarmaceutycznym
Wczesne etapy odkrywania i walidacja celu
- Umożliwia weryfikację hipotez terapeutycznych związanych z nawrotami nowotworów i mechanizmami oporności po operacji.
- Wspiera funkcjonalną walidację celów w klinicznie istotnym kontekście naśladującym przebieg choroby.
- Ułatwia biologiczną redukcję ryzyka poprzez modelowanie nawrotów miejscowych w warunkach standardowej opieki medycznej.
Przesiewy i rozwój testów
- Zapewnia zwalidowany system in vivo do oceny potencjalnych terapii w kontekście interwencji chirurgicznej.
- Standaryzuje proces indukowania i resekcji guza, co wspiera powtarzalność oraz ilościową ocenę nawrotów.
- Umożliwia dalszą analizę guza i mikrośrodowiska immunologicznego po resekcji w celu poszukiwania biomarkerów.
Badania translacyjne i przedkliniczne
- Ujednolica testy przedkliniczne z oknami terapeutycznymi w badaniach klinicznych, wspierając ciągłość translacyjną w ocenie terapii adjuwantowej.
- Umożliwia badanie istotnych dla choroby punktów końcowych, takich jak kinetyka nawrotów i wydłużenie przeżycia.
- Wspiera podejmowanie decyzji z uwzględnieniem ryzyka w procesie kierowania kandydatów do rozwoju klinicznego.
Integracja potoku i przepływu pracy
Model ten integruje się z kontinuum odkryć w onkologii, począwszy od wczesnych badań mechanistycznych, aż po przedkliniczną walidację terapii adjuwantowych.
- Biologia odkrywcza: Umożliwia testowanie hipotez dotyczących nawrotów i oporności w kontekście chirurgicznym.
- Przesiewanie: Zapewnia powtarzalną platformę do ilościowej oceny skuteczności terapeutycznej po resekcji.
- Analityka: Wspiera pomiary odrastania guza, przeżywalności oraz profilowanie immunologiczne po operacji.
- Badania translacyjne: Łączy procesy przedkliniczne i kliniczne poprzez modelowanie standardowej interwencji chirurgicznej.
- Ponowne wykorzystanie w przedsiębiorstwie: Oferuje skalowalny, zestandaryzowany model do powtarzalnej oceny różnorodnych metod terapeutycznych.
Wpływ operacyjny i przedsiębiorstwowy
- Wartość naukowa: Zwiększa pewność prognostyczną w zakresie nawrotów i mechanizmów oporności w OSCC.
- Wartość operacyjna: Optymalizuje tworzenie modeli i przebieg procedur chirurgicznych w celu uzyskania spójnych i powtarzalnych wyników.
- Wartość strategiczna: Dostarcza informacji niezbędnych do podejmowania decyzji o wdrożeniu lub odrzuceniu kandydatów na terapię adjuwantową w oparciu o klinicznie istotne punkty końcowe.
- Wpływ na portfolio: Wspiera priorytetyzację zasobów celujących w nawroty pozabiegowe i oporność, z uwzględnieniem analizy ryzyka.
Wskazówki dotyczące wdrożenia
- Wymaga doświadczenia w technikach chirurgicznych u myszy oraz inokulacji guzów.
- Wymaga dostępu do sterylnej infrastruktury chirurgicznej i systemów monitorowania zwierząt.
- Wymaga rygorystycznej standaryzacji procedur indukowania i resekcji guzów w obrębie zespołów badawczych.
- Możliwość adaptacji do dodatkowych badań mechanistycznych lub terapeutycznych obejmujących profilowanie immunologiczne lub molekularne.
- Spójność w przyjmowaniu przeszczepów i resekcji guzów jest kluczowa dla powtarzalności i integralności danych.
