Name: Mysia krezkowa limfadenektomia w celu selektywnego zakłócenia komunikacji limfatycznej z jelitem specyficznym dla regionu (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-12-30T12:35:00.000+00:00
Duration: 7 min 27 s
Description: Poznaj selektywną limfadenektomię krezkową u myszy, umożliwiającą zakłócanie limfatycznej komunikacji z określonymi odcinkami jelit. Ta metoda wspiera badania nad lokalnymi węzłami chłonnymi w immunologii jelitowej.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dziękujemy J. Aldermanowi, B. Caduganowi, E. Hughes-Picardowi i J. Horrocksowi za pomoc administracyjną oraz C. Hughesowi za zarządzanie kolonią myszy. H.N.B. jest stypendystą Yale Surgeon Scientist Training Program, który częściowo finansował i wspierał ten projekt. Prace te były również finansowane przez Howard Hughes Medical Institute (dla R.A.F.) oraz American College of Surgeons Resident Research Award (dla H.N.B.).

<ol><li>Chopp, L., Redmond, C., O'shea, J. J., Schwartz, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+thymus+to+tissues+and+tumor%3A+A+review+of+T+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">From thymus to tissues and tumor: A review of T cell biology.</a> J Allergy Clin Immunol. 151 (1), 81-97 (2023).</li>
<li>Rouiz-Argüelles, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRouiz-Arg%C3%BCelles%2C+A+%22Autoimmunity%3A+From+bench+to+bedside%22">Autoimmunity: From bench to bedside</a>. Anaya, J. -M. , El Rosario University Press. Colombia. (2013).</li>
<li>Crespo, J., Sun, H., Welling, T. H., Tian, Z., Zou, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cell+anergy%2C+exhaustion%2C+senescence%2C+and+stemness+in+the+tumor+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Immunol%22%5BJournal%5D)">T cell anergy, exhaustion, senescence, and stemness in the tumor microenvironment.</a> Curr Opin Immunol. 25 (2), 214-221 (2013).</li>
<li>Mempel, T. R., Henrickson, S. E., Von Andrian, U. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-cell+priming+by+dendritic+cells+in+lymph+nodes+occurs+in+three+distinct+phases%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">T-cell priming by dendritic cells in lymph nodes occurs in three distinct phases.</a> Nature. 427 (6970), 154-159 (2004).</li>
<li>Divi, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymph+node+count+from+neck+dissection+predicts+mortality+in+head+and+neck+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Lymph node count from neck dissection predicts mortality in head and neck cancer.</a> J Clin Oncol. 34 (32), 3892-3897 (2016).</li>
<li>Chang, G. J., Rodriguez-Bigas, M. A., Skibber, J. M., Moyer, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymph+node+evaluation+and+survival+after+curative+resection+of+colon+cancer%3A+Systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22JNCI%22%5BJournal%5D)">Lymph node evaluation and survival after curative resection of colon cancer: Systematic review.</a> JNCI. 99 (6), 433-441 (2007).</li>
<li>Simoes, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymph+node+yield+in+the+pathological+staging+of+resected+nonmetastatic+colon+cancer%3A+The+more+the+better%5BTitle%5D)+AND+%22Surg+Oncol%22%5BJournal%5D)">Lymph node yield in the pathological staging of resected nonmetastatic colon cancer: The more the better.</a> Surg Oncol. 43, 101806(2022).</li>
<li>Resio, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Commission+on+cancer+standards+for+lymph+node+sampling+and+oncologic+outcomes+after+lung+resection%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Thorac+Surg%22%5BJournal%5D)">Commission on cancer standards for lymph node sampling and oncologic outcomes after lung resection.</a> Ann Thorac Surg. 119 (2), 308-315 (2025).</li>
<li>Connolly, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reservoir+of+stem-like+CD8+T+cells+in+the+tumor-draining+lymph+node+preserves+the+ongoing+antitumor+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Immunol%22%5BJournal%5D)">A reservoir of stem-like CD8 T cells in the tumor-draining lymph node preserves the ongoing antitumor immune response.</a> Sci Immunol. 6 (64), eabg7836(2021).</li>
<li>Saddawi-Konefka, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphatic-preserving+treatment+sequencing+with+immune+checkpoint+inhibition+unleashes+cdc1-dependent+antitumor+immunity+in+HNSCC%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Lymphatic-preserving treatment sequencing with immune checkpoint inhibition unleashes cdc1-dependent antitumor immunity in HNSCC.</a> Nat Commun. 13, 4298(2022).</li>
<li>Saddawi-Konefka, R., Schokrpur, S., Gutkind, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Let+it+be%3A+Preserving+tumor-draining+lymph+nodes+in+the+era+of+immuno-oncology%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Let it be: Preserving tumor-draining lymph nodes in the era of immuno-oncology.</a> Cancer Cell. 42 (6), 930-933 (2024).</li>
<li>Houston, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lymph+nodes+draining+the+small+intestine+and+colon+are+anatomically+separate+and+immunologically+distinct%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">The lymph nodes draining the small intestine and colon are anatomically separate and immunologically distinct.</a> Mucosal Immunol. 9 (2), 468-478 (2016).</li>
<li>Brinkmann, V., Pinschewer, D., Chiba, K., Feng, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fty720%3A+A+novel+transplantation+drug+that+modulates+lymphocyte+traffic+rather+than+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Pharmacol+Sci%22%5BJournal%5D)">Fty720: A novel transplantation drug that modulates lymphocyte traffic rather than activation.</a> Trends Pharmacol Sci. 21 (2), 49-52 (2000).</li>
<li>Mehandru, S., Colombel, J. -F., Juarez, J., Bugni, J., Lindsay, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+molecular+mechanisms+of+anti-trafficking+therapies+and+their+clinical+relevance+in+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">Understanding the molecular mechanisms of anti-trafficking therapies and their clinical relevance in inflammatory bowel disease.</a> Mucosal Immunol. 16 (6), 859-870 (2023).</li>
<li>Mariathasan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absence+of+lymph+nodes+in+lymphotoxin-alpha+%28lt+alpha%29-deficient+mice+is+due+to+abnormal+organ+development%2C+not+defective+lymphocyte+migration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Inflam%22%5BJournal%5D)">Absence of lymph nodes in lymphotoxin-alpha (lt alpha)-deficient mice is due to abnormal organ development, not defective lymphocyte migration.</a> J Inflam. 45 (1), 72-78 (1995).</li>
<li>Kwon, S., Agollah, G. D., Wu, G., Sevick-Muraca, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatio-temporal+changes+of+lymphatic+contractility+and+drainage+patterns+following+lymphadenectomy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Spatio-temporal changes of lymphatic contractility and drainage patterns following lymphadenectomy in mice.</a> PLoS One. 9 (8), e106034(2014).</li>
<li>Blum, K. S., Proulx, S. T., Luciani, P., Leroux, J. -C., Detmar, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+lymphatic+regeneration+and+flow+patterns+after+lymph+node+dissection%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res+Treat%22%5BJournal%5D)">Dynamics of lymphatic regeneration and flow patterns after lymph node dissection.</a> Breast Cancer Res Treat. 139 (1), 81-86 (2013).</li>
<li>Shaikh, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenteric+lymph+node+transplantation+in+mice+to+study+immune+responses+of+the+gastrointestinal+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Mesenteric lymph node transplantation in mice to study immune responses of the gastrointestinal tract.</a> Front Immunol. 12, 689896(2021).</li>
</ol>

R.A.F. jest doradcą dla GlaxoSmithKline, Plythera Inc. oraz Ventus Therapeutics. Wszyscy inni autorzy deklarują brak konkurencyjnych interesów.

Opisano tutaj procedurę przeżywalną dla bezpiecznej i dobrze tolerowanej mysiej krezki limfadenektomii na każdym z czterech stanowisk węzłowych. Głównym ograniczeniem tego zabiegu jest pośredni związek między ekspozycją a postępem węzłów chłonnych wzdłuż łańcucha krezkowego. Pierwsza stacja węzłów chłonnych jest łatwo i łatwo odsłonięta w całości. Często widoczna jest druga stacja węzłów chłonnych, a ekspozycja na 2.do 4. stacji można poprawić poprzez rozszerzenie nacięcia skóry/ściany brzucha, cefa...

Limfocyty T są jednym z głównych typów komórek efektorowych w odporności adaptacyjnej, z opisanymi rolami w różnych kategoriach chorób, w tym infekcjach, autoimmunologii i nowotworach 1,2,3. Kluczowym krokiem dla funkcjonowania limfocytów T jest trójfazowe primowanie przez komórki prezentujące antygen w wtórnych narządach chłonnych, takich jak lokalne węzły chłonne4. We współczesnej medycynie podstawą prawidłowej resekcji onkologicznej w wielu układach narządowych jest pewien stopień pobierania próbek lokalnych lub resekcji węzłów chłonnych en bloc 5,6,7,8. Na przykład w przypadku raka jelita grubego konsensus zaleca usunięcie 12 węzłów chłonnych i badanie w resekcji z zamiarem leczniczym ze względu na wyraźną korelację z poprawą długoterminowego przeżycia 6,7. Jednak czy lokalne węzły chłonne naprawdę mogą być usuwane bezkarnie? Najnowsze badania na myszach wykazały, że węzeł chłonny odprowadzający odpływ nowotworowy zawiera rezerwuar prekursorów limfocytów T przeciwnowotworowych, które mogą być chronione przed terminalną różnicacją i wyczerpaniem limfocytów T występującym w mikrośrodowisku nowotworowym 9,10,11. Sugeruje to, że usunięcie tak krytycznej populacji mogłoby osłabić ciągłe możliwości immunonadzoru.
Wzorzec drenażu limfatycznego jelit u myszy jest znany jako dość wyspecjalizowany wzdłuż łańcucha węzłów chłonnych krezki; na przykład jelito proksymalne jest niemal wyłącznie odprowadzane przez pierwszą stację węzła chłonnego, jelito cienkie przez drugą/trzecią stację, a dalsze jelito grube głównie przez czwartą stacjęwęzła chłonnego nr 12 (Rysunek 1, Ilustracja uzupełniająca 1). W ten sposób bezpośrednia komunikacja między segmentami jelit a limfatycznymi może zostać zakłócona poprzez celowaną ablację tych węzłów. Aby zablokować transport między węzłami chłonnymi a tkankami, powszechnie stosuje się agonisty receptorów S1P, takie jak FTY720, oraz blokadę integriny; jednak leki te szeroko hamują handel i dlatego nie mogą być wykorzystywane do badania udziału konkretnych węzłów chłonnych13,14. Jednak zdolność szerszej społeczności naukowej do badania lokalnych efektów interakcji immunologicznych w węzłach chłonnych jelitowych jest ograniczona przez brak dobrze opisanej resekcji chirurgicznej dla każdego stanowiska. Mając na uwadze tę lukę, opracowano procedurę przeżycia dla mysiej krezki limfadenektomii na każdym stanowisku węzłowym, która jest opisana tutaj. Głównym celem tego zabiegu jest bezpieczne i niezawodne wycięcie stacji węzłów chłonnych krezki u myszy o wysokiej przeżywalności i tolerancji pooperacyjnej.
Procedura ta została przetestowana i łatwa do przeprowadzenia u młodych i dorosłych myszy w różnych szczepach (np. Balb/c, C57BL/6J, 129S4), ale jest ograniczona przez potrzebę dostępnych i łatwo rozpoznawalnych węzłów chłonnych. Dlatego może nie być dobrze dopasowany do łączenia z myszymi modelami lub genotypami z mniejszymi lub niedostrzegalnymi węzłami chłonnymi (np. myszy z niedoborem limfotoksyn-alfa)15. Ponadto starsze myszy (>15 tygodnia) mają tendencję do większej tłustości trzewnej, co utrudnia identyfikację i izolację węzłów chłonnych, i choć nie jest to przeciwwskazanie, może to ograniczać sukces lub zabieg. Poza tymi ograniczeniami, limfadenektomia krezkowa oferuje wysoce kontrolowaną i selektywną perturbację węzłów chłonnych. Zabieg ten najlepiej sprawdziłby się w rozwiązywaniu pytań dotyczących lokalnego wpływu węzłów chłonnych i powiązanych z nimi komórek odpornościowych oraz interakcji na fragmentach jelit (np. okrężnica proksymalna, dalsza jelito, jelito cienkie).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68696/68696fig1.jpg" /> 
Rysunek 1: Anatomiczne punkty orientacyjne stacji w łańcuchu węzłów chłonnych krezki. (A) Nieoznaczone i (B) oznaczone przedstawienie czterech głównych stacji węzłów chłonnych krezkowej in situ. Drenaż okrężnego jelita grubego odbywa się głównie przez stację 1, jelito cienkie przeważa przez stację 2/3, a jelito dystalne przeważnie przez stację 4. (DC= dalsze jelito, ICV= naczynia jelicowe, PC= okrężnica proksymalna, CEC= krewka, IV/JV= naczynia jelito/czejun, SI = jelito cienkie). Paski skali: 1,5 cm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68696/68696fig1large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby zobaczyć większą wersję tej figurki.</a>

<table><tbody><tr><td>Obwód anestezjologiczny</td><td>Dowolny</td><td></td><td>Albo znieczulenie do zastrzyków</td></tr><tr><td>Cytometr przepływowy BD LSRII (lub odpowiednik)</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td>Wyposażony w oprogramowanie FACS Diva (do cytometrii przepływowej) i nie do końca;</td></tr><tr><td>Buprenorfina XR</td><td>Dowolny</td><td></td><td>Dla przeciwbólu</td></tr><tr><td>Medium do hodowli komórkowych &nbsp;</td><td>Dowolny</td><td></td><td>(dla technik z żywymi komórkami; np. DMEM lub RPMI)</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Biolegenda</td><td>422801</td><td>Stężenie robocze: 15 ug/mL</td></tr><tr><td>Etanol (70% w wodzie)</td><td>Dowolny</td><td></td><td>Do czyszczenia</td></tr><tr><td>FITC-sprzężony antymyszy CD45.2 (104)</td><td>Biolegenda</td><td>109806</td><td>Stężenie robocze: 5 ug/mL</td></tr><tr><td>Kleszcze: Ukośne, cienko końcówkowe kleszcze</td><td>Roboz</td><td>RS-5058</td><td>Materiał: Dumoxel; Wzór #5, kąt 45 stopni; Rozmiar grotu 0,1 x 0,06 mm</td></tr><tr><td>Kleszcze: Kleszcze z drobnymi końcówkami</td><td>Roboz</td><td>RS-4960</td><td>Materiał: Dumostar; Wzór #1; Rozmiar grotu: 0,20 x 0,12 mm</td></tr><tr><td>Kleszcze: Kleszcze z drobnymi końcówkami</td><td>Roboz</td><td>RS-4966</td><td>Materiał: Dumostar, wskazówka biologiczna; Wzór #3; Rozmiar grotu: 0,08 x 0,04 mm</td></tr><tr><td>Lidokaina</td><td>Dowolny</td><td></td><td>Dla przeciwbólu</td></tr><tr><td>Metalowa igła gavage</td><td>Dowolny</td><td></td><td>Igła gavage o grubości 20/22, powtarzalna, ze stali nierdzewnej.</td></tr><tr><td>Przewozki igły</td><td>Roboz</td><td>RS-6410</td><td>uchwyt na igły Castroviejo; Prosta</td></tr><tr><td>OPTIONAL:&nbsp; &nbsp; &nbsp; Lampy LED mikroskopu z podwójną lub podwójną gęsią szyjką</td><td>Dowolny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>OPCJONALNE: barwnik Evans Blue</td><td>Sigma</td><td>E2129-10G</td><td>Opcjonalne śledzenie limfy.</td></tr><tr><td>OPTIONAL: Mikroskop operacyjny</td><td>Leica</td><td>MZ9.5</td><td>Stereo mikroskop operacyjny Leica Mz9.5</td></tr><tr><td>Sól fizjologiczna z buforem fosforanowym (PBS)</td><td>Dowolny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Roztwór povidonu i jodu</td><td>Dowolny</td><td></td><td>Do przygotowania/sterylizacji skóry</td></tr><tr><td>Nożyczki: Nożyczki z dodatkowymi cienkimi końcówkami</td><td>Roboz</td><td>RS-5605</td><td>McPherson-Vannas; Krawędź tnąca 3 mm; zakrzywiony (dla węzłów stacji 3/4)</td></tr><tr><td>Nożyczki: Nożyczki z cienkim końcówką</td><td>Roboz</td><td>RS-5650SC</td><td>Surecut Castroviejo scissors (dla węzłów stacji 1/2/3)</td></tr><tr><td>Nożyczki: Nożyczki średnie</td><td>Roboz</td><td>RS-5676</td><td>Noyes; Krawędź tnąca 13 mm; proste</td></tr><tr><td>Klej chirurgiczny</td><td>Dowolny</td><td></td><td>Klej tkankowy 3M Vetbond</td></tr><tr><td>Szew: 6-0 niebieski monofilament polipropyleks</td><td>Dowolny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Szew: 9-0 szew nylonowy z monofilamentu</td><td>Dowolny</td><td></td><td>(opcjonalnie) Można też użyć nieco większego 8-0 Rozmiar szwów.</td></tr><tr><td>Utrwalacz tkankowy</td><td>Dowolny</td><td></td><td>(dla planowanej histologii; tj. 10% neutralnej formaliny buforowanej lub 4% paraformaldehydu)</td></tr><tr><td>Poduszka grzewcza z cyrkulacją w ciepłej wodzie</td><td>Dowolny</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

mysia krezkowa limfadenektomia w celu selektywnego zakłócenia komunikacji limfatycznej z jelitem specyficznym dla regionu

Murine Mesenteric Lymphadenectomy for Selective Disruption of Lymphatic Communication with Region-Specific Gut

Immunosurveillance kontra tolerancja antygenowa to delikatna równowaga w mikrośrodowisku jelitowym, podczas której kluczowa rola krążącego primingu limfocytów T w lokalnych węzłach chłonnych jest dobrze znana. Po primowaniu limfocytów T, najnowsza literatura zaczęła wykazywać unikalną, nieredundancyjną rolę niekrążących limfocytów T znajdujących się w drenażowym węźle chłonnym narządu. Może to być szczególnie prawdziwe w jelitach, gdzie drenaż limfatyczny jest znany z bardzo specyficznego charakteru. Jednak aby naprawdę zrozumieć unikalny wpływ tych lokalnych komórek w porównaniu z systemową redundancją funkcjonalną, społeczność naukowa potrzebuje dobrze opisanej procedury izolacji i selektywnego zaburzenia tych węzłów. Opisano tutaj procedurę przeżywalną zapewniającą bezpieczną i dobrze tolerowaną myszą krezkową naczyniową dewenektomię na każdym z czterech stacji wzdłuż łańcucha węzłów chłonnych krezki. Procedura ta jest adaptowalna, aby umożliwić selektywne zakłócenie komunikacji limfatycznej z dalszym jelitem grubym, bliższym i/lub jelitem cienkim. W zestawie znajdują się szczegółowe instrukcje, pomoce wizualne, pomocne wskazówki dotyczące poprawy sukcesu oraz metody rozwiązywania problemów z nieoptymalnym przeżyciem. Przecięte węzły chłonne są natychmiast gotowe do dalszego przetwarzania, jeśli zajdzie taka potrzeba. Technika ta najlepiej sprawdza się w badaniach wymagających selektywnego zakłócania drenażu limfatycznego z dalszego jelita grubego, bliższego okrężnicy i/lub jelita cienkiego.

Aby potwierdzić dokładność tego zabiegu, wykonano krezkowe naczynia chłonne u jedenastu dzieci w wieku 4-6 tygodni, o wieku wieku, płci i genotypie dopasowanym z szczepu szczepu C57BL/6J. Czas zabiegu wynosił od 5 do 15 minut na myszkę. Wszystkie myszy dobrze tolerowały zabieg, z 100% przeżyciem okołooperacyjnym. Usunięte próbki umieszczono w PBS na lodzie. Wszystkie próbki natychmiast zatonęły, potwierdzając niską zawartość tłuszczu. Usunięte próbki (oraz cztery oddzielne grupy tkankowe tłuszczowe) były następnie miażdż...

Protokół ten opisuje procedurę przeżycia dla bezpiecznej i dobrze tolerowanej mysiej krezki limfadenektomii na każdym z czterech stacji wzdłuż łańcucha węzłów chłonnych krezki. Procedura ta jest adaptowalna, aby umożliwić selektywne zakłócenie komunikacji limfatycznej z dalszym jelitem grubym, bliższym i/lub jelitem cienkim.

Mysia krezkowa limfadenektomia w celu selektywnego zakłócenia komunikacji limfatycznej z jelitem specyficznym dla regionu

Immunosurveillance versus antigen-tolerance is a fine balance within the gut microenvironment, during which the critical role of circulating T cell ...

Nasze badania koncentrują się na odpowiedziach limfocytów T na neoantygeny i tkanki obwodowe, a te odpowiedzi są silnie zależne od primingu, dlatego skupiamy się głównie na miejscach, gdzie te zdarzenia zachodzą. Obecnie jedynymi szeroko stosowanymi opcjami blokującymi transport między węzłami chłonnymi a tkankami są metodyki systemowe, takie jak agoniści receptorów S1P oraz blokada integriny. Jednak to szerokie hamowanie uniemożliwia nam badanie wpływu konkretnych lokalnych węzłów chłonnych.Nasz protokół zawiera szczegółowy opis wysoce selektywnych limfadenektomii na każdym z czterech głównych stacji węzłów chłonnych krezki, a ponieważ węzły te są dość wyspecjalizowane w odprowadzanym przez siebie segmencie jelitowym, ta dobrze tolerowana procedura przetrwania pozwala nam zakłócić konkretne segmenty osi limfatycznej jelita, pozostawiając pozostałe nienaruszone. Po potwierdzeniu odpowiedniej głębokości znieczulenia za pomocą uszczypnięcia tylnej stopy, użyj sterylnych nożyczek chirurgicznych, aby wykonać nacięcie o średnicy środkowej linii skóry o grubości 0,5 do 1 centymetra w znieczulonej myszy. Używając sterylnych kleszczy, rozciń skórę z dala od ściany brzucha i zidentyfikuj linię albę.Następnie wykonaj kolejne nacięcie o średnicy 0,5 do 1 centymetra przez linię albę, aby dostać się do jamy otrzewnej. Za pomocą igły gavage z tępym końcem wprowadź jeden mililitr sterylnej soli fizjologicznej w temperaturze ciała do jamy otrzewnej. Zwilż sterylne zasłony, aby przygotować się do ustawienia jelit.Aby usunąć pierwszą stację węzła chłonnego, należy ukierunkować zewnętrzne jelito na wilgotne zasłony, z cekum ułożonym w dóle, okrężnicą bliższą górną, a kończyną jelita mocnej w stronę chirurga. Zidentyfikuj łańcuch węzłów chłonnych krezki, który biegnie wzdłuż jelita grubego. Używając skośnych, cienko zakończonych kleszczy, tępo rozcinaj pierwszą stację węzłów chłonnych z dala od naczyń ileokolowych, umieszczając zamknięte kleszcze między tymi strukturami i delikatnie je otwierając.Aby zmniejszyć teoretyczne ryzyko przepływu bocznego do pobliskich węzłów, wykonaj opcjonalną ligację szwów z pojedynczymi przerwanymi szwami wzdłuż łańcucha węzłów chłonnych, jednym milimetrowym i jednym milimetrowym bliskim od pierwszego stanowiska węzła chłonnego, używając szwu nylonowego monofilamentu i cienko zakończonych kleszczy. Delikatnie cofnij stację węzła chłonnego spod kaudalnego, a następnie za pomocą nożyczek cienkich wyciąć docelową stację węzła chłonnego od głowicy do ogonowej. Obserwuj dalsze gałęzie naczyń kościowo-kościowych, naczyń jelietowych i czczowych, aby potwierdzić, że ukrwienie pozostaje nienaruszone.Aby wyciąć drugie stanowisko węzła chłonnego, delikatnie rozciąć jelito cienkie i ukierunkować zewnętrzne jelito na wilgotne zasłony, z cekum ułożonym dolnie, okrężnym jelitem górnym, a jelitem cienkim po prawej stronie chirurga. Następnie zidentyfikowaj drugą stację węzłów chłonnych, która biegnie wzdłuż jelita grubego i zaczyna się na zbiegu naczyń jelita brzęgowego i czego. Używając skośnych, cienko zakończonych szczypiec, tępo rozciąć drugie stanowisko węzła chłonnego z dala od naczyń jelitowca.Aby zmniejszyć teoretyczne ryzyko przepływu bocznego do pobliskich węzłów, wykonaj opcjonalną ligację szwów z pojedynczymi przerwanymi szwami wzdłuż łańcucha węzłów chłonnych, jednym milimetrowym i jednym milimetrowym bliskim do drugiego stanowiska węzła chłonnego, używając szwu nylonowego monofilamentu i cienko zakończonych kleszczy. Delikatnie cofnij stację węzła chłonnego do skałki, a następnie za pomocą nożyczek cienkich wyciąć drugą stację węzła chłonnego od głowicy do ogona. Sprawdź pole operacyjne, aby upewnić się nad hemostazą.Aby wyciąć czwartą stację węzła chłonnego, delikatnie rozciąć całe jelito cienkie aż do tylnego punktu umocowania. Ułóż jelito na wilgotnych zasłonach tak, że cekum skierowano od dołu, jelito bliższe ku górze, a jelito cienkie po prawej stronie chirurga. Zidentyfikuj czwartą stację węzłów chłonnych, która znajduje się tuż przyśrodkowo od dalszego jelita grubego i bocznie od trzeciej stacji.Używając skośnych, cienko zakończonych kleszczy lub nożyczek o bardzo cienkim końcu, tępo rozciń czwartą stację węzła chłonnego z dala od naczyń jelita grubego i otaczającej tkanki tłuszczowej. Aby zmniejszyć teoretyczne ryzyko przepływu bocznego do pobliskich węzłów, wykonaj opcjonalną ligację szwów z pojedynczymi przerwanymi szwami przy każdym rozpoznawalnym węźle chłonnym, zwykle jeden milimetr od węzła, przy użyciu szwów nylonowych monofilamentowych i cienko zakończonych kłębków. Następnie delikatnie cofnij czwartą stację węzłów chłonnych cephalad.Za pomocą nożyczek cienkich lub bardzo cienkich punktów wycinam stacje węzłów chłonnych od ogonowego do cefaladu. Powtórz procedurę dla drugiego węzła w czwartej stacji węzłów chłonnych. Ostrożnie rozciń węzeł, wykonaj ligację szwów w razie potrzeby i wyciąj go.Sprawdź pole operacyjne, aby potwierdzić hemostazę. Po sprowadzeniu zawartości jamy brzusznej do jamy otrzewnej należy wprowadzić do jamy brzusznej jeden mililitr sterylnej soli fizjologicznej o temperaturze ciała, aby zrekompensować utratę płynu odparowującego. Zamknąć brzuch w dwóch warstwach: najpierw ścianę brzucha, potem skórę za pomocą szwu z monofilamentu polipropylenowego 6-0 w układzie bieganym.Tkanka pobierana metodą limfadenektomii krezkowej konsekwentnie skutkowała próbkami o niskiej zawartości tłuszczu, co potwierdza natychmiastowe zapadnięcie PBS. Analiza cytometrii przepływowej potwierdziła pomyślną ekstrakcji węzłów chłonnych, przy czym ponad 95% komórek w próbkach pochodzących z krezki limfadenektomii zostało zidentyfikowanych jako CD45 pozytywnych, w porównaniu do jedynie 7% w kontrolnej grupie tkanki tłuszczowej trzewnej.

murine-mesenteric-lymphadenectomy-for-selective-disruption-lymphatic

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Aby śledzić przebieg odpowiedzi immunologicznej w czasie u tej samej myszy, węzły chłonne można usuwać sekwencyjnie drogą chirurgiczną. W niniejszym materiale opisujemy sposób wykonania tej techniki.

Chirurgiczne usuwanie powierzchownych węzłów chłonnych u myszy

Ten film demonstruje technikę kanniulacji krezkowego przewodu chłonnego u szczurów. Metoda ta umożliwia bezpośredni dostęp do całej objętości składników obecnych w płynie limfatycznym.

Kaniulacja krezki limfatycznej w modelu szczura w celu pobrania płynu limfatycznego

Tutaj opisujemy technikę kannuacji krezkowego przewodu chłonnego u szczurów, która umożliwia ilościowe określenie transportu lipidów i leków przez układ limfatyczny po porodzie jelitowym. Technika ta może być dostosowana do oceny stężenia limfy krezkowej i/lub transportu płynu, komórek odpornościowych, peptydów, białek i cząsteczek lipofilowych.

Model szczura kaniulowanego kaniulowanego w krezkowym przewodzie chłonnym: zastosowanie do oceny transportu leków limfatycznych w jelitach

Przedstawiamy zabieg chirurgiczny polegający na cewnikowaniu jelitowego pnia limfatycznego u nowonarodzonych świń w celu pobrania dużych ilości składników metabolizmu lipidów z odprowadzającej limfy.

Długotrwałe cewnikowanie pnia limfatycznego jelit i pobieranie limfy u nowonarodzonych świń

Tutaj opisujemy minimalnie inwazyjną technikę laparoskopową do seryjnego pobierania próbek wątroby i krezkowych węzłów chłonnych (MLN) u makaków, która pozwala na zwiększenie częstotliwości pobierania próbek i zmniejsza ryzyko powikłań chirurgicznych w porównaniu do wykonywania laparotomii.

Technika laparoskopowa do seryjnego pobierania węzłów chłonnych wątroby i krezki u makaków

Przedstawiono protokół blokowania przepływu limfy poprzez chirurgiczne zszywanie doprowadzających naczyń limfatycznych.

Blokowanie przepływu limfy poprzez zszywanie aferentnych naczyń limfatycznych u myszy

Obecny protokół opisuje szczegółowy protokół chirurgiczny izolowania przepływającej limfy jelitowej w odpowiedzi na infuzje składników odżywczych dodwunastnicy u myszy. Pozwala to na fizjologiczne określenie całkowitego wchłaniania lipidów w jelitach oraz syntezy i wydzielania chylomikronu w odpowiedzi na różne eksperymentalne składniki odżywcze.

Izolacja przepływającej limfy krezkowej u myszy w celu ilościowego określenia in vivo kinetyki wchłaniania lipidów w diecie i wydzielania chylomikronu

Celem pracy jest przedstawienie możliwości przeprowadzenia makro- i mikrodysekcji węzłów chłonnych krezkowych w korzeniu krezki wraz z towarzyszącą morfometrią klirensów limfatycznych.

Rola rozwarstwienia anatomicznego w określaniu kolki i wiązek limfatycznych naczyń jelita cienkiego w objętości D3 krezki jelita cienkiego i cienkiego

Protokół ten opisuje procedurę przeżycia dla bezpiecznej i dobrze tolerowanej obustronnej limfadenektomii nerki u myszy.

Grzybicza limfadenektomia nerek u myszy

Chirurgia laparoskopowa jest szeroko stosowana w leczeniu raka jelita grubego po prawej stronie i oferuje liczne korzyści. Artykuł opisuje podejście chirurgiczne od ogonowego do czaszki połączone z całkowitą wycięciem mezokolicznym (CME) oraz rozwarstwieniem węzła chłonnego D3, co może potencjalnie zmniejszyć trudności techniczne i wydawać się bezpiecznym rozwiązaniem.

Podejście ogo-na-czaszkę w laparoskopowej prawej hemikolektomii z całkowitą wycięciem mezokolona i rozwarstwieniem węzła chłonnego D3

Poznaj selektywną limfadenektomię krezkową u myszy, umożliwiającą zakłócanie limfatycznej komunikacji z określonymi odcinkami jelit. Ta metoda wspiera badania nad lokalnymi węzłami chłonnymi w immunologii jelitowej.

Mysia krezkowa limfadenektomia w celu selektywnego zakłócenia komunikacji limfatycznej z jelitem specyficznym dla regionu

Przeglądaj więcej filmów