Model ćwiczeniowy amputacji kończyny dolnej szczura poniżej kolana i natychmiastowa ingerencja mięśniowa

Badanie analizuje ból związany z uszkodzeniem nerwów i amputacją oraz wpływ przekierowania nerwów na ten ból. Amputacja ogranicza możliwość stosowania standardowych ocen bólu. Niniejszy protokół wykorzystuje zmodyfikowane i alternatywne testy do pomiaru zachowań bólowych po amputacji.

Na początek należy przygotować szczura rasy Sprague Dawley w wieku od 8 do 10 tygodni o masie od 250 do 300 g. Włącz podkładkę grzewczą i przygotuj sterylne pole operacyjne. Ułóż wszystkie sterylne narzędzia i materiały niezbędne do przeprowadzenia zabiegu.

Po znieczuleniu szczura izofluranem w dawce indukcyjnej 4% i dawce podtrzymującej od 1 do 2%, ogolić obszar zaczynając od dolnej części pleców i kontynuując wzdłuż całej długości kończyny tylnej. Oczyścić miejsce operacyjne antyseptycznym roztworem jodyny povidone, a następnie przetrzeć je gazikiem nasączonym alkoholem. Powtórzyć tę procedurę jeszcze dwa razy.

Za pomocą strzykawki tuberkulinowej podaj podskórnie meloksykam w dawce 1 mg/kg. Użyj linijki, aby zaznaczyć linię stawu kolanowego. Następnie zrób dwa dodatkowe oznaczenia, 2 cm i 3 cm dystalnie względem kolana.

Za pomocą skalpela wykonaj okalające nacięcie skóry trzy centymetry dystalnie w stosunku do kolana. Przeprowadź tępe i ostre rozwarstwienie, aby okalająco oddzielić skórę od leżących poniżej mięśni, aż do momentu swobodnego odsunięcia skóry. Powtórz proces podcinania w głębszych warstwach mięśniowych, aby przeprowadzić preparację aż do kości, zachowując przy tym płaszczyzny tkankowe.

Użyj markera, aby zaznaczyć piszczel i strzałkę jeden centymetr proksymalnie od ncięcia okalającego. Użyj małych nożyczek do kości, aby przeciąć piszczel i strzałkę w zaznaczonym miejscu. Użyj kauteryzacji, aby opanować krwawienie i uzyskać hemostazę.

Obejrzyj koniec kości i w razie potrzeby stępi lub przytnij ostre krawędzie. Użyj wchłanialnej plecionej nici chirurgicznej 4-O do zbliżenia przednich krawędzi przedziałów mięśniowych nad kością piszczelową i zabezpiecz je za pomocą czterech do sześciu równomiernie rozmieszczonych szwów przerywanych. Wyrównaj i zamknij przedni i tylny przedział mięśniowy razem nad kością, aby utworzyć poduszkę mięśniową.

Zamknąć skórę bocznie za pomocą przerywanych szwów z chłonnego splotu 4-O, unikając ich umieszczenia w miejscu obciążenia kikuta. Nanieść klej tkankowy wzdłuż linii nacięcia. Wykonać podłużne nacięcie wzdłuż bruzdy pośladkowej o długości od 1,5 do dwóch centymetrów, około pięciu milimetrów za kością udową.

Wykonaj rozczepianie tępym narzędziem, aby oddzielić mięśnie pośladkowe i kulszowo-goleniowe, a następnie odsłoń nerw kulszowy proksymalnie względem jego trifurkacji. Zidentyfikuj proksymalne gałęzie ruchowe, w tym dużą gałąź przebiegającą pod tętnicą udowąstogową (CFM) oraz jej odgałęzienia. Unieś CFM pęsetą i przetnij go.

Za pomocą precyzyjnych pęsety mikrochirurgicznej Dumont należy wyizolować gałęzie przeznaczone dla mięśnia półbłoniastego i mięśnia dwugłowego uda poprzez rozczepianie tępym sposobem. Chwyć epineurium i rozetnij je wzdłuż, używając zakrzywionych nożyczek sprężynowych. Następnie oddziel poszczególne gałęzie nerwowe.

Zachowaj gałąź mięśnia odcniowego uda i przetnij pozostałe gałęzie w pobliżu pnia nerwu kulszowego. Zegnij gałęzie ruchowe w dół, aby ułatwić koaptację. Użyj zakrzywionych nożyczek sprężynowych do otwarcia epineurium i jego przecięcia w celu neutralizacji trifurkacji nerwu kulszowego.

Za pomocą precyzyjnych pęset delikatnie rozdziel gałęzie nerwowe. Użyj pęsety, aby uchwycić każdą z trzech gałęzi – wspólną strzałkową, piszczelową i łydkową – w odległości od 5 do 10 mm dystalnie od trifurkacji. Podczas przykładania napięcia przetnij każdy nerw dystalnie i wycięj segment o długości od 5 do 10 mm.

Użyj szwów nylonowych 10-0 do wykonania koaptacji, łącząc w pierwszej kolejności wspólny nerw krocza z mięśniem półblonastym. Na każdy szew załóż co najmniej trzy węzły. Zapewnij rozmieszczenie bez napięć, unikając nadmiernego zaciskania i marszczenia nerwu, a koaptacje ułóż bez ostrych kątów.

Następnie połącz nerw piszczelowy z dużym odgałęzieniem mięśnia dwugłowego uda, a nerw skórny łydki z małym odgałęzieniem mięśnia dwugłowego uda. W przypadku amputacji bez reinerwacji mięśnia docelowego, po odsłonięciu odgałęzień nerwu kulszowego, użyj szwu jedwabnego 5-O i pęsety, aby podwiązać wspólny nerw strzałkowy, nerw piszczelowy oraz nerw skórny łydki, upewniając się, że podwiązka zaciska nerw i jest zabezpieczona czterema węzłami prostymi. Delikatnie pociągnij każdy nerw proksymalnie, wykorzystując węzeł, a następnie przetnij go jeden do dwóch milimetrów dystalnie od miejsca podwiązania.

Usuń 10 milimetrów dystalnego odcinka nerwu, a następnie przeprowadź amputację zgodnie z wcześniejszą demonstracją. Po zamknięciu nacięcia nałóż klej do skóry wzdłuż linii cięcia. Monitoruj szczura codziennie przez siedem dni pod kątem integralności rany, objawów infekcji, bólu lub stresu i interweniuj w razie potrzeby zgodnie z wytycznymi IACUC.

Progi wycofania mechanicznego mierzone testem Von Frey zostały znacząco obniżone w stosunku do wartości wyjściowych i pozostawały obniżone we wszystkich punktach czasowych po amputacji. Testy z użyciem szpili wykazały tendencję do wzrostu reakcji nocyceptywnych w czasie w porównaniu z wartościami wyjściowymi. Nadwrażliwość na zimno w obrębie kikuta była wyraźna i utrzymywała się w stosunku do wartości wyjściowych we wszystkich punktach czasowych.

Niniejszy protokół pozwala na ocenę różnych strategii zarządzania nerwami w kontekście amputacji. Największym wyzwaniem podczas realizacji tego protokołu jest atraumatyczne manipulowanie nerwami o szerokości mniejszej niż jeden milimetr. Przyszłe badania mogą rozwinąć te prace w celu ulepszenia modeli i opracowania bardziej wiarygodnych metod badania bólu fantomowego.