Modele myszy zapalenia najądrza wywołanego przez wzorce molekularne związane z patogenem
12 grudnia 2025
Opisano tutaj dwa odrębne modele chirurgicznych zastrzyków służących do wywołania bodźców zapalnych w segmencie początkowym (zastrzyk śródmiąższowy) oraz w cauda gididymidis (zastrzyk dotaczny) myszy. Metody te umożliwiają badania reakcji specyficznych dla regionu w różnych obszarach najądrza.
Badamy wpływ stanu zapalnego na fizjologię najądrza w płodności mężczyzn. Precyzyjne, kompartmentalizowane wstrzykiwanie środków wywołujących stan zapalny bez uszkodzeń. Przewód najądrza w modelach myszy wymaga zaawansowanego połączenia umiejętności chirurgicznych i szkolenia.
Na początek umieść znieczulone zwierzę w pozycji leżącej na polu operacyjnym. Za pomocą elektrycznego podkaszaka wykonaj trychotomię odwłoka myszy, aby całkowicie usunąć futro. Następnie użyj bezpłodnej bawełny nasączonej roztworem 0,25% chlorheksydyny.
A potem z alkoholem do asepsy brzucha. Skalpelem w rozmiarze 15 wykonaj około czteromilimetrowego pionowego nacięcia po prawej stronie ściany brzucha. Teraz delikatnie rozdziel skórę za pomocą skośnych, tępych szczypiec chirurgicznych.
Następnie, używając tego samego skalpela, wykonuj kolejne około czteromilimetrowe pionowe nacięcie na otrzewnej po boku pierwszego nacięcia. Ostrożnie unieś najądrze w jądrze z jamy brzusznej, delikatnie naciskając prawą stronę moszny. Za pomocą zakrzywionych szczypiec chirurgicznych delikatnie pociągnij białą tkankę tłuszczową w najedrzu, aby zlokalizować początkowy segment najedrza.
Przy pomocy białej tkanki tłuszczowej najądrza odsłonić początkowy segment w miejscu nacięcia. Następnie ustawij strzykawkę Hamiltona z roztworem do wstrzykiwania pod kątem około 90 stopni równolegle do segmentu numer jeden segmentu początkowego. Ostrożnie włóż igłę w przestrzeń międzymiąższową, fazując ją w dół.
Następnie umieść zakrzywione szczypce chirurgiczne w miejscu wbicia igły i delikatnie uszczypnij torebkę najądrza oraz igłę. Powoli naciskaj tłok strzykawki, aż cały roztwór bodziecowy zostanie wstrzyknięty. Utrzymując zakrzywione szczypce chirurgiczne na miejscu, ostrożnie wyjmij igłę i zwolnij zakrzywione szczypce chirurgiczne po około 30 sekundach.
Następnie, używając białej tkanki tłuszczowej najądrza, delikatnie przeprowadź tkankę jądrową do jamy brzusznej. Zidentyfikuj otrzewną i zamknij ją, wykonując dwa szwy szwowe za pomocą uchwytu na igły i szwu chirurgicznego rozmiaru pięć-00, a nacięcie skórne zamknij dwoma szwami szwającymi. Po operacji obserwuj mysz, aby zapewnić odpowiednią rekonwalescencję po operacji.
Po podaniu znieczulenia ułóż mysz w pozycji leżącej na polu operacyjnym. Połóż palec wskazujący i kciuk poniżej moszny, aby obpalpować i potwierdzić pozycję jąder oraz najądrza. W razie potrzeby delikatnie masuj boki brzucha w kierunku moszny, aby ustawić jądra i najądrze na właściwe miejsce.
Za pomocą elektrycznego trymera wykonaj trichotomię moszny, aby całkowicie usunąć włosy i zdezynfekować miejsce sterylną watą nasączoną w roztworze chlorheksydyny 0,25%, a następnie alkoholem. Palcem wskazującym i kciukiem pod moszną delikatnie rozciągaj skórę moszny. Używając skalpela rozmiaru 15, wykonaj około dwumilimetrowego pionowego nacięcia na przyśrodkowej części moszny.
Teraz delikatnie przesuń lewe jądro i najądrze z powrotem do jamy brzusznej, pozostając jednocześnie prawym jądrem i najedrzem w mosznie. Z palcem wskazującym i kciukiem umieszczonym poniżej prawego jądra i najądrza, delikatnie rozciągaj skórę moszny. Następnie, używając skośnych, tępych szczypiec chirurgicznych, ostrożnie otwieraj i zamykaj końcówki na wewnętrznej powięzi plemniczej, aby przerwać wewnętrzną powięzi plemną i tunikę pochwową.
Następnie odciąż nacisk palca wskazującego i kciuka oraz wprowadź skośne szczypce chirurgiczne przez otwór tuniki pochwy w kierunku podstawy moszny. Za pomocą kleszczy ostrożnie wyciągnij dalszy tłuszcz najądrza, aby zlokalizować najądrze ogonowe. Teraz zlokalizuj nasienie i umieść proste kleszcze chirurgiczne pod nim.
Załóż pęsetę buldoga na nasienie nasieniodawców, zapewniając wystarczającą przestrzeń między najedrzem ogonowu a zaciskiem. Następnie ustaw strzykawkę Hamiltona z wcześniej załadowanym roztworem do wstrzykiwania pod kątem około 10 do 15 stopni równolegle do nasieniowodosie, a igłę włóż w naczyniowodzie tak, że faza jest skierowana do góry. Delikatnie ściśnij proste szczypce chirurgiczne, aby uwolnić nasiewosie, i powoli wciśnij tłok strzykawki, aby wstrzyknąć cały roztwór bodziec.
Teraz usuń proste szczypce chirurgiczne. Używając zakrzywionych szczypiec chirurgicznych, delikatnie ściśnij okolice miejsca wbicia igły, a następnie ostrożnie wyjmij igłę strzykawki. Po około 30 sekundach usuń zakrzywione szczypce chirurgiczne i pęsetę bulldoga i delikatnie odłóż naczyniowód do moszny.
Następnie zidentyfikuj tunikę pochwową i zamykaj ją jednym ściegiem, używając uchwytu na igły i chirurgicznego szwu w rozmiarze 500. Palcem wskazującym delikatnie wpchnij prawe jądro i najedrze z powrotem do jamy brzusznej oraz przesuń lewe jądro i najedrze do moszny. Na koniec zamknij nacięcie skóry moszny dwoma szwami szwowymi za pomocą uchwytu na igły i szwów chirurgicznych rozmiaru 50 i obserwuj mysz, aby zapewnić prawidłową rekonwalescencję po operacji.
Wstrzyknięcie śródmiąższowe w początkowym segmencie spowodowało, że wstrzyknięty niebieski barwnik Evansa był ograniczony głównie do pierwszego segmentu przez maksymalnie 30 minut po wstrzyknięciu, a następnie dyfundował do sąsiednich segmentów początkowego segmentu i najądrza caput. Iniekcja wewnątrznaczyniowa do naczyniowodosiewowego nasiewia uwięziła niebieski barwnik Evansa w lumencie segmentu 10 na maksymalnie 30 minut po wstrzyknięciu. Histologiczne mikrografie fotograficzne potwierdziły, że zastrzyki kontrolowane solą fizjologiczną nie zmieniły morfologii najądrza najądrza 72 godziny po leczeniu.
Iniekcja z LPS śródmiąższowego w początkowym segmencie wywołała obrzęk śródmiąższowy, a intensywne infiltracje komórek odpornościowych śródmiąższowych, śródbłonkowych i śródświatłowych 72 godziny po leczeniu. Wstrzyknięcie LPS lub LTA do śródbłonka w ogono wywołało obrzęk śródmiąższowy oraz infiltracje komórek odpornościowych w przedziałach śródmiąższowych i śródświatłowych 72 godziny po leczeniu. Brak powtarzalnych modeli zwierzęcych badających lokalizowane zapalenie najądrza i jego wpływ na płodność mężczyzn.
Bezpośrednie regionalne wstrzyknięcie substancji zapalnych wywołujących stan zapalny umożliwia precyzyjną analizę regionalnych odpowiedzi immunologicznych w wyniku najądrza.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych
Przegląd
Niniejszy artykuł opisuje dwa odrębne chirurgiczne modele wstrzykiwania w celu wywołania bodźców zapalnych w określonych obszarach najprzewodu u myszy. Wstrzyknięcie śródmiąższowe celuje w segment początkowy, natomiast wstrzyknięcie dniami naczyniowymi koncentruje się na cauda epididymidis. Metody te ułatwiają badanie odpowiedzi specyficznych dla poszczególnych regionów najprzewodu.
Kluczowe elementy badania
Dziedzina nauki
- Neuronauka
- Biologia
- Odpowiedź zapalna
Wprowadzenie
- Zrozumienie odpowiedzi zapalnej w najwidziego jest kluczowe dla zdrowia rozrodczego.
- Różne obszary najwidziego mogą w zróżnicowany sposób reagować na bodźce zapalne.
- Istniejące modele mogą nie uwzględniać w wystarczający sposób odpowiedzi specyficznych dla poszczególnych regionów.
- Nowoczesne techniki chirurgiczne mogą usprawnić badanie tych odpowiedzi.
Cel badania
- Opracowanie modeli chirurgicznych do badania stanu zapalnego w najądrzu.
- Porównanie reakcji w różnych obszarach najądrza.
- Zapewnienie wglądu w mechanizmy zapalne w tkankach rozrodczych.
Zastosowane metody
- Wtryskiwanie śródmiąższowe w celu wywołania stanu zapalnego w segmencie początkowym najądrza.
- Wtryskiwanie do naczyń w celu ukierunkowania na ogon najądrza (cauda epididymidis).
- Ocena odpowiedzi zapalnych w obu modelach.
- Analiza efektów specyficznych dla poszczególnych regionów w zakresie funkcji najądrza.
Główne wyniki
- Oba modele iniekcyjne skutecznie wywołały stan zapalny.
- Zaobserwowano odmienne odpowiedzi zapalne w segmencie początkowym w porównaniu z ogonem najwidokruju (cauda epididymidis).
- Wyniki sugerują, że najwidokruj posiada specyficzne dla poszczególnych regionów mechanizmy odpowiedzi na stan zapalny.
- Modele te mogą być wykorzystane w dalszych badaniach nad zdrowiem rozrodczym.
Wnioski
- Opracowane modele chirurgiczne są skuteczne w badaniu stanu zapalnego najączka.
- Reakcje specyficzne dla poszczególnych obszarów podkreślają złożoność procesów zapalnych w tkankach rozrodczych.
- Przyszłe badania mogą opierać się na tych wynikach w celu zbadania interwencji terapeutycznych.
Najczęściej zadawane pytania
Znaczenie dla przemysłu
Regionalne modele mysie zapalenia najpierśnika indukowanego przez wzorce molekularne związane z patogenami (PAMPs) stanowią kontrolowaną platformę do analizy mechanizmów zapalnych istotnych w kontekście męczej niepłodności. Modele te umożliwiają redukcję ryzyka mechanistycznego oraz walidację celów dla interwencji mających na celu łagodzenie dysfunkcji rozrodczych wywołanych infekcją. Ich strategiczna wartość polega na wspieraniu wiarygodności prognostycznej w badaniach translacyjnych oraz wczesnym testowaniu hipotez terapeutycznych.
Strategiczne zastosowania w badaniach i rozwojnych biopharmy
Wczesne odkrywanie i walidacja celu
- Umożliwia badanie szlaków zapalnych zaangażowanych w zdrowie reprodukcyjne mężczyzn.
- Wspiera funkcjonalną walidację celów poprzez izolowanie swoistych dla regionu odpowiedzi immunologicznych.
- Ułatwia mechanistyczną minimalizację ryzyka dla potencjalnych celów powiązanych z niepłodnością.
- Zapewnia platformę do opartej na hipotezach eksploracji interakcji między patogenami a najwidrużkiem.
Przesiewanie i opracowanie testu
- Ustanawia zwalidowane systemy in vivo do ilościowego pomiaru punktów końcowych w zakresie stanu zapalnego i funkcji narządu.
- Wspiera standaryzację testów poprzez umożliwienie powtarzalnej indukcji stanu zapalnego w konkretnych regionach.
- Umożliwia ilościową ocenę parametrów plemników oraz odpowiedzi tkankowych.
- Przygotowuje modele do późniejszego screeningu związków ukierunkowanego na mediatorzy stanu zapalnego.
Badania translacyjne i przedkliniczne
- Jest zgodne z mechanizmami istotnymi dla choroby, które leżą u podłoża męskiej niepłodności wywołanej infekcją.
- Zapewnia ciągłość od odkrycia mechanizmów po przedkliniczną ocenę interwencji przeciwzapalnych.
- Wspiera dostosowany do ryzyka rozwój kandydatów terapeutycznych celujących w zapalenia dróg rodnych.
- Umożliwia identyfikację biomarkerów dla badań translacyjnych w zakresie zdrowia reprodukcyjnego mężczyzn.
Integracja potoku i przepływu pracy
Niniejsze modele mysie sytuują się w continuum od wczesnej fazy odkrywania do etapu przedklinicznego, umożliwiając testowanie hipotez, walidację celów oraz ciągłość translacyjną w badaniach nad stanami zapalnymi układu rozrodczego.
- Biologia odkrywcza: Ułatwia testowanie hipotez dotyczących szlaków zapalnych indukowanych przez PAMP w odrębnych regionach najwidzenia.
- Przesiewanie: Zapewnia powtarzalne, ilościowe wyniki służące do oceny związków przeciwzapalnych.
- Analityka: Umożliwia pomiar swoistych dla danego regionu markerów zapalnych oraz parametrów jakości nasienia.
- Badania translacyjne: Łączy odkrycia mechanistyczne z przedkliniczną walidacją strategii terapeutycznych w leczeniu męskiej niepłodności.
- Ponowne wykorzystanie w przedsiębiorstwie: Oferuje reużywalną platformę in vivo do różnorodnych badań nad dysfunkcjami rozrodczymi wywołanymi przez infekcje.
Wpływ operacyjny i przedsiębiorstwowy
- Wartość naukowa: Zwiększa pewność prognostyczną i zmniejsza niejednoznaczność mechanistyczną w badaniach nad stanami zapalnymi układu rozrodczego.
- Wartość operacyjna: Standaryzuje indukcję i pomiar odpowiedzi zapalnych specyficznych dla danego regionu.
- Wartość strategiczna: Dostarcza informacji niezbędnych do podejmowania decyzji o kontynuacji lub przerwaniu (go/no-go) interwencji przeciwzapalnych i chroniących płodność.
- Wpływ na portfolio: Wspiera priorytetyzację celów i kandydatów w obszarze zdrowia reprodukcyjnego w oparciu o analizę ryzyka.
Wskazówki dotyczące wdrożenia
- Wymagana jest biegłość w technikach mikrochirurgicznych oraz biologii rozrodczej gryzoni.
- Konieczny jest dostęp do pomieszczeń dla zwierząt oraz infrastruktury analitycznej do ilościowego pomiaru wskaźników stanu zapalnego i parametrów plemników.
- Niezbędna jest standaryzacja protokołów iniekcji i analiz końcowych pomiędzy zespołami.
- Adaptacja do innych modeli gryzoni może wymagać optymalizacji protokołu ze względu na różnice anatomiczne.
- Ograniczenia obejmują odpowiedzi specyficzne dla gatunku oraz konieczność ostrożnej interpretacji znaczenia translacyjnego.
