Badanie fizjologicznych barier przenoszenia wirusa u mszyc za pomocą mikroiniekcji

Jeśli są to skuteczne przekaźniki wirusów roślinnych, jeśli jest to mikroiniekcja wirusa, procedura, którą dzisiaj pokażemy, jest techniką pozwalającą naukowcom wstrzyknąć wirusa bezpośrednio do komórki hemograficznej migotania przedsionków, omijając jelita, jedną z dwóch głównych barier dla transmisji wirusa w sposób krążący. Cześć, nazywam się Cecilia Tamrin Dehi i jestem doktorantką na wydziale patologii roślin na Uniwersytecie Cornella. Dzisiaj pokażę Ci, jak wstrzyknąć wirusa do wirusa komórek hemokomórkowych AFI, który może być następnie przenoszony na różne gatunki roślin.

Na przykład ta roślina FE jest zakażona wirusem PLRV liści ziemniaka. Możesz zobaczyć różnicę między zdrową a zainfekowaną rośliną. Najbardziej zauważalnym objawem jest stwardnienie rozsiane taven.

PLRV to wirus lutniczy, który jest przenoszony przez APHIS w ich hemolimfie, owadziej odpowiedniku krwi ssaków. Kiedy niezakażony AFI żywi się zainfekowaną rośliną, zaraża się wirusem poprzez grypę roślinną, którą można zobaczyć tutaj. Po spożyciu wirus musi przejść z jelita owada do hemolimfy, a następnie musi przejść przez gruczoł ślinowy, aby zostać przeniesionym z powrotem do rośliny ESE.

A jeśli może to wymagać wielu wirusów podczas żerowania na roślinie ESE, jednak tylko dlatego, że większa frakcja przejdzie przez jelita i gruczoły ślinowe. Dwie główne bariery transmisji to infekowanie większej liczby roślin do przetestowania. Jeśli AFI nie jest w stanie przenosić wirusa, karmimy go zainfekowaną tkanką przez dwa dni, a następnie pozwalamy mu żerować w zdrowej roślinie przez pięć dni.

Roślina jest następnie poddawana fumigacji i po trzech tygodniach zaczynamy szukać objawów. Kiedy znajdziemy migotanie przedsionków, które nie są w stanie przenosić wirusa, możemy ocenić, która z dwóch barier powstrzymuje wirusa za pomocą procedury mikroiniekcji, którą zamierzam wam dzisiaj pokazać. W tej procedurze wirus jest wstrzykiwany bezpośrednio do tamtejszej komórki hemologicznej, omijając barierę transmisji jelitowej.

Więc zacznijmy i pokażę ci, jak mikro wstrzyknąć trochę wierzchołka. To jest szkło, szklane igły, których używamy. Ściągamy szklane igły z tych szklanych osłon za pomocą APU apu.

Więc to jest mikro wtryskiwacz. Aby wykonać mikro wstrzyknięcie wirusa. Zacznę wkładać igłę do uchwytu na igłę.

Więc po prostu wkładam igłę i umieszczam ją na miejscu. Więc teraz zamierzam załadować wirusa do igły na szczycie tego steru. Teraz musimy ustawić AFI do mikroiniekcji.

Więc zamierzam wziąć AFI z ciśnieniem bólu i zamierzam umieścić go w uchwycie AFI. Idealnie byłoby, gdybym spróbował przyłożyć tył mszycy do uchwytu, aby mieć dostęp do brzusznej części migotania przedsionków. Okej, świetnie.

Teraz możemy przejść dalej i mikro wstrzyknięcie. Dobra, teraz ustawię igłę i przybliżę ją do migotania przedsionków. Więc teraz zamierzam zetknąć igłę z migotaniem przedsionków i przekłuć egzoszkielet, najlepiej spróbować przebić się między segmentem u podstawy nóg.

Więc zamierzam wstrzyknąć. Teraz wyjmuję AFI za pomocą pędzla i wkładam do papieru do odzyskiwania, gdzie pozwolę mu na chwilę nagrać. Tak więc musimy również mikro wstrzykiwać kontrolę afi.

To kontrolne mikrowstrzyknięcie jest wykonywane tylko z buforem bez wirusa. Budel, którego używamy, to 0,1 więcej buforu fosforanowego o pH siedem. Więc zamierzam umieścić A fit w zdrowej roślinie, gdzie pozwolę mu się zmieścić przez pięć dni po tym, jak zamierzam podzielić roślinę na los i czekać na rozwój objawów po mikro wstrzyknięciu dolnego nici NA przez tydzień każdego dnia, poziom ekspresji docelowego genu jest mierzony w afi.

Tak więc po prostu wstrzyknęliśmy mikro afit, który nie był w stanie przenieść wirusa. Jeśli po mikroiniekcji AFI jest w stanie przenieść wirusa, będzie to oznaczać, że ten AFI ma barierę jelitową, która blokowała wirusa. Z drugiej strony, jeśli nie ma żadnych objawów, oznacza to, że ten afit ma silną barierę gruczołów ślinowych.

Właśnie pokazaliśmy, jak wstrzykiwać wirusa do mszyc. Ta sama procedura jest stosowana do mikrowstrzykiwania tych sutkanych RNA do mszyc w celu przeprowadzenia interferencji oka RNI, co jest interesującą techniką pomagającą w badaniu funkcji genów u mszycy. To tyle, jeśli chodzi o mikro iniekcję.

Mam nadzieję, że Ci się spodoba i będzie pomocny w Twoich eksperymentach. Dziękuję.