Name: Model szczura z kanulacją przewodu limfatycznego szyjnego do oceny transportu limfatycznego z głowy i mózgu (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-03-10T13:10:00.000+00:00
Duration: 8 min 3 s
Description: Poznaj metodę kanulacji głębokiego przewodu limfatycznego szyjnego u szczurów do zbierania limfy z ośrodkowego układu nerwowego. Technika umożliwia pomiar przepływu limfy i analizę substancji pochodzących z mózgu.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy serdecznie dziękują panu Zhenglin Hao oraz pani Jie Zhao z Centrum Eksperymentów Zwierzęcych Chińskiego Uniwersytetu Farmaceutycznego za wsparcie w prowadzeniu eksperymentów na zwierzętach.

<ol><li>Hu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphatic+system+identification%2C+pathophysiology+and+therapy+in+the+cardiovascular+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Lymphatic system identification, pathophysiology and therapy in the cardiovascular diseases.</a> J Mol Cell Cardiol. 133 (1), 99-111 (2019).</li>
<li>Breslin, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphatic+vessel+network+structure+and+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22Compr+Physiol%22%5BJournal%5D)">Lymphatic vessel network structure and physiology.</a> Compr Physiol. 9 (1), 207-299 (2018).</li>
<li>Moore, J. E. Jr, Bertram, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphatic+system+flows%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Fluid+Mech%22%5BJournal%5D)">Lymphatic system flows.</a> Annu Rev Fluid Mech. 50, 459-482 (2018).</li>
<li>Dupont, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Our+current+understanding+of+the+lymphatics+of+the+brain+and+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Anat%22%5BJournal%5D)">Our current understanding of the lymphatics of the brain and spinal cord.</a> Clin Anat. 32 (1), 117-121 (2019).</li>
<li>Aspelund, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dural+lymphatic+vascular+system+that+drains+brain+interstitial+fluid+and+macromolecules%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">A dural lymphatic vascular system that drains brain interstitial fluid and macromolecules.</a> J Exp Med. 212 (7), 991-999 (2015).</li>
<li>Xu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lymphatic+system%3A+a+therapeutic+target+for+central+nervous+system+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regen+Res%22%5BJournal%5D)">The lymphatic system: a therapeutic target for central nervous system disorders.</a> Neural Regen Res. 18 (6), 1249-1256 (2023).</li>
<li>Raper, D., Louveau, A., Kipnis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+do+meningeal+lymphatic+vessels+drain+the+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">How do meningeal lymphatic vessels drain the CNS.</a> Trends Neurosci. 39 (9), 581-586 (2016).</li>
<li>Louveau, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+functions+and+relationships+of+the+glymphatic+system+and+meningeal+lymphatics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Understanding the functions and relationships of the glymphatic system and meningeal lymphatics.</a> J Clin Invest. 127 (9), 3210-3219 (2017).</li>
<li>Salvador, A. F. M., Abduljawad, N., Kipnis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meningeal+lymphatics+in+central+nervous+system+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Meningeal lymphatics in central nervous system diseases.</a> Annu Rev Neurosci. 47 (1), 323-344 (2024).</li>
<li>Guo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+roles+of+meningeal+lymphatic+vessels+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Alzheimers+Dis%22%5BJournal%5D)">Emerging roles of meningeal lymphatic vessels in Alzheimer's disease.</a> J Alzheimers Dis. 94 (S1), S355-S366 (2023).</li>
<li>Mestre, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrospinal+fluid+influx+drives+acute+ischemic+tissue+swelling%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Cerebrospinal fluid influx drives acute ischemic tissue swelling.</a> Science. 367 (6483), eaax7171(2020).</li>
<li>Da Mesquita, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+aspects+of+meningeal+lymphatics+in+ageing+and+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Functional aspects of meningeal lymphatics in ageing and Alzheimer's disease.</a> Nature. 560 (7717), 185-191 (2018).</li>
<li>Zou, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blocking+meningeal+lymphatic+drainage+aggravates+Parkinson%27s+disease-like+pathology+in+mice+overexpressing+mutated+%CE%B1-synuclein%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Blocking meningeal lymphatic drainage aggravates Parkinson's disease-like pathology in mice overexpressing mutated α-synuclein.</a> Transl Neurodegener. 8 (1), 7(2019).</li>
<li>Wu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tauopathy+after+long-term+cervical+lymphadenectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Alzheimers+Dement%22%5BJournal%5D)">Tauopathy after long-term cervical lymphadenectomy.</a> Alzheimers Dement. 21 (4), e70136(2025).</li>
<li>Fang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+perspective+on+cerebrospinal+fluid+dynamics+after+subarachnoid+hemorrhage%3A+from+normal+physiology+to+pathophysiological+changes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">A new perspective on cerebrospinal fluid dynamics after subarachnoid hemorrhage: from normal physiology to pathophysiological changes.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 42 (4), 543-558 (2022).</li>
<li>Yen, Y. H., Chen, M. W., Lim, J. X., Chew, K. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploring+lymphovenous+anastomosis+for+Alzheimer%27s+disease%3A+addressing+brain+lymphatic+dysfunction%2C+feasibility%2C+and+outcome+metrics%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Exploring lymphovenous anastomosis for Alzheimer's disease: addressing brain lymphatic dysfunction, feasibility, and outcome metrics.</a> Plast Reconstr Surg. , (2025).</li>
<li>Rubenstein, J., Ferreri, A. J., Pittaluga, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+lymphoma+of+the+central+nervous+system%3A+epidemiology%2C+pathology+and+current+approaches+to+diagnosis%2C+prognosis+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Leuk+Lymphoma%22%5BJournal%5D)">Primary lymphoma of the central nervous system: epidemiology, pathology and current approaches to diagnosis, prognosis and treatment.</a> Leuk Lymphoma. 49 (1), 43-51 (2008).</li>
<li>Camilleri-Broët, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+uniform+activated+B-cell-like+immunophenotype+might+explain+the+poor+prognosis+of+primary+central+nervous+system+lymphomas%3A+analysis+of+83+cases%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">A uniform activated B-cell-like immunophenotype might explain the poor prognosis of primary central nervous system lymphomas: analysis of 83 cases.</a> Blood. 107 (1), 190-196 (2006).</li>
<li>Papadopoulos, Z., Herz, J., Kipnis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meningeal+lymphatics%3A+from+anatomy+to+central+nervous+system+immune+surveillance%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Meningeal lymphatics: from anatomy to central nervous system immune surveillance.</a> J Immunol. 204 (2), 286-293 (2020).</li>
<li>Hoang, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+application+of+a+novel+cervical+lymph+collection+method+to+assess+lymphatic+transport+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Development and application of a novel cervical lymph collection method to assess lymphatic transport in rats.</a> Front Pharmacol. 14 (1), 1111617(2023).</li>
<li>Licastro, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glymphatic+and+lymphatic+communication+with+systemic+responses+during+physiological+and+pathological+conditions+in+the+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">Glymphatic and lymphatic communication with systemic responses during physiological and pathological conditions in the central nervous system.</a> Commun Biol. 7 (1), 229(2024).</li>
<li>Sarker, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrathecal+%5B%2864%29Cu%5DCu-albumin+PET+reveals+age-related+decline+of+lymphatic+drainage+of+cerebrospinal+fluid%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Intrathecal [(64)Cu]Cu-albumin PET reveals age-related decline of lymphatic drainage of cerebrospinal fluid.</a> Sci Rep. 13 (1), (2023).</li>
<li>Khang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrathecal+delivery+of+nanoparticle+PARP+inhibitor+to+the+cerebrospinal+fluid+for+the+treatment+of+metastatic+medulloblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Intrathecal delivery of nanoparticle PARP inhibitor to the cerebrospinal fluid for the treatment of metastatic medulloblastoma.</a> Sci Transl Med. 15 (720), eadi1617(2023).</li>
<li>Pizzo, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrathecal+antibody+distribution+in+the+rat+brain%3A+surface+diffusion%2C+perivascular+transport+and+osmotic+enhancement+of+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Intrathecal antibody distribution in the rat brain: surface diffusion, perivascular transport and osmotic enhancement of delivery.</a> J Physiol. 596 (3), 445-475 (2018).</li>
<li>Yan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphatic+clearance+is+the+main+drainage+route+of+lamotrigine-loaded+micelles+following+delivery+to+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharm+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Lymphatic clearance is the main drainage route of lamotrigine-loaded micelles following delivery to the brain.</a> J Pharm Pharmacol. 71 (10), 1488-1496 (2019).</li>
<li>Ringstad, G., Eide, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glymphatic-lymphatic+coupling%3A+assessment+of+the+evidence+from+magnetic+resonance+imaging+of+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Glymphatic-lymphatic coupling: assessment of the evidence from magnetic resonance imaging of humans.</a> Cell Mol Life Sci. 81 (1), 131(2024).</li>
<li>Pan, W. R., Suami, H., Taylor, G. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphatic+drainage+of+the+superficial+tissues+of+the+head+and+neck%3A+anatomical+study+and+clinical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Lymphatic drainage of the superficial tissues of the head and neck: anatomical study and clinical implications.</a> Plast Reconstr Surg. 121 (5), 1614-1624 (2008).</li>
<li>Bou-Assaly, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+forgotten+lymph+nodes%3A+review+of+the+superficial+head+and+neck+lymphatic+system%5BTitle%5D)+AND+%22Radiol+Imaging%22%5BJournal%5D)">The forgotten lymph nodes: review of the superficial head and neck lymphatic system.</a> Radiol Imaging. 1 (1), 9-13 (2016).</li>
<li>Yağmurlu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomical+features+of+the+deep+cervical+lymphatic+system+and+intrajugular+lymphatic+vessels+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Sci%22%5BJournal%5D)">Anatomical features of the deep cervical lymphatic system and intrajugular lymphatic vessels in humans.</a> Brain Sci. 10 (12), 953(2020).</li>
<li>Suami, H., Scaglioni, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphatic+territories+%28lymphosomes%29+in+the+rat%3A+an+anatomical+study+for+future+lymphatic+research%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Lymphatic territories (lymphosomes) in the rat: an anatomical study for future lymphatic research.</a> Plast Reconstr Surg. 140 (5), 945-951 (2017).</li>
<li>Zawieja, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphatic+cannulation+for+lymph+sampling+and+molecular+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Lymphatic cannulation for lymph sampling and molecular delivery.</a> J Immunol. 203 (8), 2339-2350 (2019).</li>
<li>Hoang, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+the+lymphatic+transport+of+model+therapeutics+from+the+brain+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharm%22%5BJournal%5D)">Quantifying the lymphatic transport of model therapeutics from the brain in rats.</a> Mol Pharm. 21 (5), 2473-2483 (2024).</li>
<li>Hoang, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+neuroinflammation+alters+the+transport+of+a+model+therapeutic+protein+from+the+brain+into+lymph+and+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharm%22%5BJournal%5D)">Acute neuroinflammation alters the transport of a model therapeutic protein from the brain into lymph and blood.</a> Mol Pharm. 21 (10), 5138-5149 (2024).</li>
<li>Maloveska, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+Evans+blue+clearance+from+cerebrospinal+fluid+into+meningeal+lymphatic+vessels+and+deep+cervical+lymph+nodes%5BTitle%5D)+AND+%22Neurol+Res%22%5BJournal%5D)">Dynamics of Evans blue clearance from cerebrospinal fluid into meningeal lymphatic vessels and deep cervical lymph nodes.</a> Neurol Res. 40 (5), 372-380 (2018).</li>
<li>Trevaskis, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mesenteric+lymph+duct+cannulated+rat+model%3A+application+to+the+assessment+of+intestinal+lymphatic+drug+transport%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The mesenteric lymph duct cannulated rat model: application to the assessment of intestinal lymphatic drug transport.</a> J Vis Exp. (97), e52389(2015).</li>
<li>Gakuba, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((General+anesthesia+inhibits+the+activity+of+the+glymphatic+system%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">General anesthesia inhibits the activity of the glymphatic system.</a> Theranostics. 8 (3), 710-722 (2018).</li>
<li>Miao, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+clearance+is+reduced+during+sleep+and+anesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Brain clearance is reduced during sleep and anesthesia.</a> Nat Neurosci. 27 (6), 1046-1050 (2024).</li>
<li>Bachmann, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+effects+of+anaesthesia+on+the+contractility+of+lymphatic+vessels+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Differential effects of anaesthesia on the contractility of lymphatic vessels in vivo.</a> J Physiol. 597 (11), 2841-2852 (2019).</li>
<li>Ruscic, K. J., Padera, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silence+of+the+lymphs%3A+some+anaesthetic+regimens+inhibit+lymphatic+pumping%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Silence of the lymphs: some anaesthetic regimens inhibit lymphatic pumping.</a> J Physiol. 597 (11), 2827-2828 (2019).</li>
<li>Dahan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+general+anesthesia+on+the+intestinal+lymphatic+transport+of+lipophilic+drugs%3A+comparison+between+anesthetized+and+freely+moving+conscious+rat+models%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharm+Sci%22%5BJournal%5D)">The effect of general anesthesia on the intestinal lymphatic transport of lipophilic drugs: comparison between anesthetized and freely moving conscious rat models.</a> Eur J Pharm Sci. 32 (4), 367-374 (2007).</li>
<li>de Jong, W. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+cannulation+of+the+vena+cava+of+rats+for+blood+sampling%3A+local+and+systemic+effects+observed+by+histopathology+after+six+weeks+of+cannulation%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Long-term cannulation of the vena cava of rats for blood sampling: local and systemic effects observed by histopathology after six weeks of cannulation.</a> Lab Anim. 35 (3), 243-248 (2001).</li>
</ol>

Autorzy deklarują, że nie mają znanych konkurujących ze sobą interesów finansowych ani relacji osobistych, które mogłyby wpłynąć na prace opisane w tym artykule.

Protokół ten ustanawia powtarzalną metodę kaniulowania przewodu chłonnego szyjki u szczurów, umożliwiając ciągłe zbieranie chłonności przez dłuższy czas. Dzięki odpowiedniemu szkoleniu mikrochirurgicznemu, zabieg może być przeprowadzany efektywnie i dostarcza stałe próbki limfy w stabilnych warunkach fizjologicznych, utrzymywanych przez ciągłą anestezję, co czyni go odpowiednim do rutynowych zastosowań eksperymentalnych. Po opanowaniu zabieg chirurgiczny zazwyczaj zajmuje około 40 do 50 minut, co pozwala na przetwarzanie...

Układ limfatyczny, rozmieszczony w całym ciele, jest niezbędny do utrzymania homeostazy płynów, regulacji odpowiedzi immunologicznych oraz ułatwiania transportu składników odżywczych i cząsteczek sygnałowych1. Limfatyczne obwodowe zaczynają się w naczyniach włosowatych limfatycznych, które zbierają płyn śródmiąższowy i rozpuszczone substancje, a następnie odprowadzają wody do większych naczyń limfatycznych (LV), które posiadają otaczającą warstwę mięśni gładkich; Naczynia te następnie dostarczają limfę do lokalnych węzłów chłonnych w celu przetwarzania odpornościowego 2,3. Sieć limfatyczna drenujące obszar głowy jest ważna dla homeostazy zarówno narządów śródczaszkowych (np. mózg), jak i pozaczaszkowych (np. jamy nosowej i jamy ustnej). Struktura i organizacja sieci limfatycznej pozaczaszkowej uważa się za podobną do tych limfatycznych obwodowych w całym ciele, podczas gdy układ limfatyczny wewnątrzczaszkowy wykazuje unikalne cechy anatomiczne i funkcjonalne (patrz Rysunek 1 dla szczegółowego schematycznego przedstawienia w modelach szczurów)4,5. Chociaż typowe LV są nieobecne w parenchymie mózgu, funkcje limfatyczne są pośredniczone przez wyspecjalizowany, zależny od gleja układ transportu limfatycznego (glimfatyczny), który ułatwia wymianę płynu mózgowo-rdzeniowego (CSF) z płynem śródmiąższowym (ISF)6. Podczas gdy układ glymfatyczny umożliwia mieszanie ISF w parenchymie mózgu z płynem mózgowym, LV oponowego, okołonaczyniowego i nosowogardłowego transportują substancje rozpuszczone z płynu mózgowo-płynowego z jamy czaszkowej. Konkretnie, szlak limfatyczny mózgowo-rdzeniowy kieruje płyn mózgowo-rdzeniowy z przestrzeni podpajęczynuszowej do LV oponowych, łącząc dynamikę płynów wewnątrzczaszkowych z obwodowym czyszczeniem limfatycznym7. Równolegle szlaki okołowo-nerwowe umożliwiają wypływ płynu mózgowo-rdzeniowego i powiązanych substancji rozpuszczonych wzdłuż osłonek nerwów czaszkowych i rdzeniowych, najbardziej przez nerwy węchowe do splotu chłonnego nosowo-gardłowego 5,8. Równoczesne badania tych systemów utrzymują homeostazę płynów w mózgu 6,7,8. Najnowsze osiągnięcia w zrozumieniu układu limfatycznego drenującego OUN dostarczyły nowych informacji na temat fizjologii i patofizjologii mózgu. Te odkrycia mogą oferować nowe możliwości interwencji terapeutycznej w chorobach OUN9.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/70217/70217fig1.jpg" /> 
Rysunek 1: Schematyczne przedstawienie szlaków oczyszczania limfatycznego OUN. Szlaki te składają się z (A) szlaku glymfatycznego przez przestrzenie okołonaczyniowe; (B) szlak limfatyczny nosowogardłowy oraz (C) LV oponkowe (LV). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/70217/70217fig1large.jpg" target="_blank">Proszę kliknąć tutaj, aby zobaczyć większą wersję tego rysunku.</a>
Sieci limfatyczne odprowadzające odwady z głowy i OUN zbiegają się do przewodów limfatycznych szyjnych znajdujących się w szyi, gdzie limfa jest filtrowana przez węzły chłonne szyjne, zanim wejdzie do krążenia ogólnoustrojowego. Węzły chłonne szyjne dzielą się na powierzchowne (sCLN) i głębokie węzły chłonne szyjne (dCLN) zgodnie z ich anatomicznym położeniem w obrębie szyi. Zmiany w składzie płynu limfatycznego w przewodach limfatycznych szyjnych uważa się za odzwierciedlenie podstawowych zmienności patofizjologicznych w mózgu, przy czym choroba Alzheimera (AD), choroba Parkinsona (PD), uraz mózgu pourazowy (TBI) oraz poudarowe zaburzenia poznawcze (PSCI) są przykładami reprezentatywnymi 9,10,11,12,13 . Warto zauważyć, że w przypadku AD upośledzony drenaż białek amyloid-β (Aβ) i fosforylowanych białek tau (P-tau) przez te szlaki limfatyczne został uznany za czynnik przyczyniający się do postępu choroby 9,10,14. Poprzez bezpośrednie połączenie przewodów limfatycznych z sąsiednimi żyłami w celu przekierowania drenażu limfatycznego, badanie jest stosowane zarówno u zwierząt, jak i ludzi jako strategia terapeutyczna mająca na celu zwiększenie wypływu limfatycznego z OUN, co ułatwia oczyszczanie Aβ z mózgu i potencjalnie opóźnia postęp AD 6,15,16. Znaczenie tego szlaku ilustrują dodatkowo obserwacje u myszy poddanych chirurgicznemu usunięciu węzłów chłonnych szyjki (limfadenektomia), co skutkowało zmniejszoną czystością limfatyczną szyjki macicy. Upośledzona klirenacja prowadzi do toksycznego nagromadzenia Aβ i P-tau, a następnie aktywacji szlaków sygnalizacji kinaz patologicznej. Zmiany te wiążą się z postępującym pogorszeniem się tauopatii podobnej do AD oraz zwiększonym ryzykiem zachowań podobnych do lęku i depresji14,16. Ponadto badania oparte na OUN sugerują, że guzy OUN, takie jak chłoniaki mózgu, mogą fizycznie blokować oczyszczanie limfatyczne przez głębokie przewody cerwiowe szyjne, jednocześnie podwyższając stężenia onkoproteiny w CSF 9,17,18. Dowody z badań zapalnych ośrodkowego układu nerwowego wskazują również, że komórki pochodzące z opon mózgowych mogą migrować przez oponowe LV do węzłów chłonnych szyjnych 8,19. Komórki te składają się głównie z limfocytów, z mniejszymi populacjami komórek dendrytycznych, makrofagów i komórek śródbłonka 19,20. Podczas stanu zapalnego lub po urazie lub operacji OUN, transport limfatycznych komórek odpornościowych jest wyraźnie zwiększony, a towarzyszy mu podwyższony poziom biomarkerów immunologicznych, takich jak cytokiny, chemokiny i inne mediatory zapalne21.
Oprócz swoich funkcji patofizjologicznych, sieć limfatyczna szyjki macicy jest coraz częściej uznawana za ważny kanał do użycia leków. Wcześniejsze badania na zwierzętach wykazały, że kilka preparatów przeznaczonych do podawania OUN może przejść oczyszczanie z mózgu przez przewody chłonne szyjki i węzły chłonne (w różnym stopniu), czego przykładem są środki na bazie nanocząsteczek podawane wewnątrz mózgu (np. lamotrygina, talazoparib) oraz leki biologiczne (np. przeciwciała monoklonalne, białka znacznicze radioaktywnie)22,23,24,25. U ludzi badania obrazowe MRI wykazały, że niektóre cząsteczki, takie jak gadobutrol, przechodzą aktywny transport z układu glymfatycznego do przewodów limfatycznych szyjnych26.
Jak wspomniano wcześniej, węzły chłonne szyjne, zarówno sCLN, jak i dCLN, odprowadzają odprowadzanie chłonności z różnych obszarów głowy; jednak konkretne obszary czaszki drenowane przez każdy węzeł pozostają niejasne27,28. Nakładające się obszary drenażowe, zmienność anatomiczna między osobami oraz potencjalne różnice strukturalne międzygatunkowe dodatkowo komplikują opis wzorców drenianu limfatycznego szyjki macicy zarówno u zwierząt, jak i ludzi29. W złożonej sieci limfatycznej szyjki szyjnej zidentyfikowano głębokie przewody wyprowadzające szyjne jako główne drogi odpływu płynu mózgowo-rdzeniowego, położone poniżej LV nosowogardła i oponowych8. W porównaniu z powierzchownymi przewodami limfatycznymi szyjki, które tworzą drobne i zmienne sieci w tkance podskórnej i znacznie różnią się rozmiarem oraz rozgałęzieniem między poszczególnymi szczurami, głęboki przewod limfatyczny szyjny zapewnia bardziej dostępną i praktyczną drogę do zbierania limfy pochodzącej z OUN w modelach małych zwierząt20,30. Obecny protokół koncentruje się zatem na ustanowieniu wiarygodnej metody pobierania chłonności z głębokiego przewodu limfatycznego szyjnego.
Tylko ograniczona liczba badań przeprowadzonych w ostatniej dekadzie opisywała zbieranie płynów chłonnych szyjki macicy w celu badania chorób OUN lub analizy dystrybucji leków. Poprzednie badanie opisywało pomiar stężeń leków w limfie szyjnej szyjki przez płukanie lub wyciskanie płynu z izolowanych przekrojów tkanek (takich jak te sąsiadujące z pojedynczym dCLN)31. Jednak eksperymentalne protokoły dotyczące ciągłego pobierania limfy z przewodów limfatycznych szyjnych u małych zwierząt laboratoryjnych, zwłaszcza szczurów, pozostają niedopracowane. Protokół ten ustanawia łatwo dostępną i powtarzalną metodę kanulacji przewodu chłonnego szyjki szyjnej, umożliwiając ciągłe zbieranie chłonów oraz badanie transportu limfatycznego OUN, odpowiedzi immunologicznej i farmakokinetyki. Jej kluczową zaletą jest możliwość ilościowego określania przepływu i składu limfy w określonych przedziałach czasowych, co umożliwia ilościowe pomiary leków, lipidów, kwasów tłuszczowych i składników komórkowych. Model ten w szczególności obejmuje procesy transportu limfatycznego, które nie są odpowiednio reprezentowane przez metody pobierania próbek osocza/CSF lub techniki obrazowania, oferując nowatorskie wglądy w rozmieszczenie leków w OUN, transport lipidów i składników odżywczych oraz sygnalizację immunologiczną20.

<table><tbody><tr><td>Igła 30 gauge</td><td>Yushou Health</td><td></td><td>Używany do łączenia bliższego końca kaniuli (0503) ze strzykawką heparynową</td></tr><tr><td>Dozownik znieczulenia z waporyzatorem</td><td>Firma Instrumentów YYUN</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tępe kleszcze</td><td>Nauki o życiu z napędem na tylne koła</td><td>F22002-10&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Patyki watowe</td><td>Qingdao Shultz Biotechnology</td><td>MQ-02</td><td>Używane do tymczasowego utrzymywania tkanki mięśniowej na miejscu</td></tr><tr><td>Podgrzewana podkładka chirurgiczna</td><td>Shanghai Yiheng Instruments</td><td></td><td>Wymiar 15 i razy; 20 cm</td></tr><tr><td>Heparyna sodowa</td><td>Technologia biochemiczna Szanghajskiego Aladyna</td><td>H123383</td><td>Przed użyciem wymagane rozcieńczenie</td></tr><tr><td>Strzykawka insulinowa (1 mL)</td><td>Yushou Health</td><td>U100-1ML</td><td>Stosowany wyłącznie do wstępnego powlekania heparyny</td></tr><tr><td>Roztwór izofluranu do inhalacji</td><td>Nauki o życiu z napędem na tylne koła</td><td>R510-22-10</td><td>Stosowany do znieczulenia przez waporyzator</td></tr><tr><td>Markery</td><td>Każda marka</td><td>Nie ma</td><td></td></tr><tr><td>Rurka mikrowirówki (1,5 mL)</td><td>Eksperymentalny sprzęt Nantong Hairui</td><td>HR10003</td><td>Wykorzystywany do pobierania limfy</td></tr><tr><td>Mikronożyczki</td><td>Nauki o życiu z napędem na tylne koła</td><td>GD234BA0007925</td><td></td></tr><tr><td>Nylonowe szwy chirurgiczne & nbsp;</td><td>Shanghai Yiheng Instruments</td><td>4-0 35CM</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta (regulowana objętościowo, zakres pomiarowy od 5 do 50 i mu; L)</td><td>Dragon Laboratory Instruments Limited</td><td>7030301006</td><td>Używany wyłącznie do pomiaru kleju tkankowego</td></tr><tr><td>Porady do pipetek&nbsp;</td><td>Biosharp Nauki o życiu</td><td>BS-10-T</td><td>Używany wyłącznie do przenoszenia kleju tkankowego, bez wymaganej konkretnej objętości</td></tr><tr><td>Kanulala polihylenowa (PE) 0,5 mm średnica średnicy, 0,3 mm średnica (0503)</td><td>AniLab Instrumenty Naukowe (Ningbo)</td><td>PE-0503</td><td></td></tr><tr><td>Kanyula poliehylenowa (PE) 0,6 mm średnica średnicy, 0,5 mm średnica (0605)</td><td>AniLab Instrumenty Naukowe (Ningbo)</td><td>PE-0605</td><td></td></tr><tr><td>Żyletki</td><td>Gillette Shanghai</td><td>Q31/0115000301C004</td><td>Używany wyłącznie do golenia futra</td></tr><tr><td>Gumka gumowa</td><td>Każda marka</td><td>Nie ma</td><td>Wykorzystywane do unieruchamiania przednich kończyn szczurów</td></tr><tr><td>Władca</td><td>Każda marka</td><td>Nie ma</td><td></td></tr><tr><td>Ostrza szcapel (#23)</td><td>Nauki o życiu z napędem na tylne koła</td><td>S31010-01</td><td></td></tr><tr><td>Roztwór chlorku sodu (0,9%) do infuzji</td><td>Shijiazhuang Nr 4 Pharmaceutical</td><td>H20066533 (numer zatwierdzenia)</td><td>Używany wyłącznie do płukania futra</td></tr><tr><td>Szczury Sprague-Dawley</td><td>Laboratorium Rzeki Życiowej w Pekinie – Technologia Zwierząt</td><td>101</td><td>Waga od 220 do 250 gramów, bez wymagań wiekowych</td></tr><tr><td>Światło chirurgiczne</td><td>Beijing Heo Bio-Tech</td><td>XHA011-1</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop chirurgiczny</td><td>Technologia Optoelektroniczna Shanghai Cewei</td><td>SMZ755T</td><td>Mikroskop rozcinający bez mechanicznej sceny może być wyposażony w wysuwaną podstawkę</td></tr><tr><td>Klej tkankowy</td><td>3M Vetbond</td><td>1469SB</td><td>Główny składnik cyjanoakrylan&nbsp;</td></tr><tr><td>Ekspander tkankowy (Colibri)</td><td>Nauki o życiu z napędem na tylne koła</td><td>R22029-04</td><td>Zakres rozszerzalności 20 mm/4 cm</td></tr></tbody></table>

model szczura z kanulacją przewodu limfatycznego szyjnego do oceny transportu limfatycznego z głowy i mózgu

Cervical Lymph Duct-Cannulated Rat Model for Assessing Lymphatic Transport from the Head and Brain

Limfa przepływa z ośrodkowego układu nerwowego (OUN) przez szereg naczyń limfatycznych (LV) i węzłów chłonnych, które łączą się w przewodach limfatycznych szyjnych. Oprócz utrzymania równowagi płynów, te przewody limfatyczne odgrywają kluczową rolę w transportowaniu szerokiego spektrum substancji, w tym endogennych metabolitów, cząsteczek sygnałowych, komórek odpornościowych oraz leków małych i makromolekularnych. Jest to kluczowe dla homeostazy fizjologicznej i funkcji odpornościowej zarówno wewnątrzczaszkowej (np. mózg), jak i pozaczaszkowej (np. jamy nosowej i jamy ustnej). Upośledzony drenaż limfatyczny z mózgu coraz częściej wiąże się z różnymi zaburzeniami neurologicznymi i neurodegeneracyjnymi. Kanylacja przewódów limfatycznych szyjnych umożliwia zbieranie krwi odprowadzającej odpływ z głowy i mózgu, umożliwiając pomiar stężenia i szybkości transportu różnych substancji przez układ limfatyczny. Zmiany tych czynników w odpowiedzi na różne wyzwania (np. leki, stres, trauma) i choroby (np. udar, infekcje, choroba Alzheimera) również mogą być określane. Tutaj opisujemy znieczulony, głęboko sterylizowany model szczura z głębokim przewodem chłonnym szyjnym, który umożliwia pobieranie chłonności przez kilka godzin po operacji. Metoda ta może być łączona z technologiami obrazowania i multiomiki do pomiaru szerokiego zakresu parametrów zainteresowanych limfą. Ułatwia to podstawowe badania fizjologiczne i patofizjologiczne regionu głowy i szyi, a także badania farmakokinetyczne i farmakodynamiczne leków, szczególnie w leczeniu chorób OUN.

Reprezentatywny zbiór danych godzinowych przepływów limfy (mL/h) uzyskano za pomocą modelu kanilowości limfy szyjnej (patrz Rysunek 7 dla odpowiedniego wykresu). W tym eksperymencie z udziałem trzech (n = 3) szczurów limfa była zbierana nieprzerwanie do rurek mikrowirówkowych, które były wymieniane co godzinę przez okres 6 godzin.
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/70217/70217fig7.jpg" /> 
<strong class...

Ten eksperymentalny protokół demonstruje głęboki model szczura z kaniulowaniem przewodów wędrowych szyjnych, który umożliwia bezpośrednią i ilościową ocenę drenażu limfatycznego z okolic głowy. Model umożliwia szczegółową analizę substancji rozpuszczonych pochodzących z ośrodkowego układu nerwowego (OUN), populacji komórek odpornościowych oraz dystrybucję i oczyszczanie terapii ukierunkowanych na OUN.

Model szczura z kanulacją przewodu limfatycznego szyjnego do oceny transportu limfatycznego z głowy i mózgu

Lymph flows from the central nervous system (CNS) via a series of lymphatic vessels (LVs) and lymph nodes that converge at the cervical lymph ducts. In ...

Nasz projekt bada, jak limfatyczne mózgu łączą się z chorobami OUN, takimi jak Alzheimer, udar czy neurozapalenie, poprzez identyfikację substancji odprowadzających odtok z mózgu. Istniejące metody nie posiadały protokołu ani niezawodnego podejścia do teoretycznego próbkowania i ilościowego określenia wypływu limfatycznego pochodzącego z CNS, co jest możliwe dzięki temu protokołowi. Na początek wstępnie załaduj około 0,7 mililitra rozcieńczonego roztworu antykoagulanta do sterylnej strzykawki insulinowej o pojemności 1 mililitra z igłą 30-gauge, aby pokryć wewnętrzną powierzchnię kaniuli polietylenowej.Przechowuj wcześniej załadowaną strzykawkę w sterylnych warunkach do czasu użycia. Do przygotowania kanil użyj rur o średnicy zewnętrznej 0,5 milimetra i 0,3 milimetra dla obu sekcji końcowych oraz rurek o średnicy zewnętrznej 0,6 milimetra i 0,5 milimetra dla części środkowej. Za pomocą nożyczek przytnij segmenty kaniuli na długości dwóch centymetrów dla części bliższej łączącej się z igłą strzykawki, 40 centymetrów dla środkowej części oraz ośmiu centymetrów dla części dystalnej przeznaczonej do kanilowania.Złóż kaniulę w konfiguracji głowa do ogona. Następnie wycinam i fazuj dalsz

cervical-lymph-duct-cannulated-rat-model-for-assessing-lymphatic

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Ten film demonstruje technikę kanniulacji krezkowego przewodu chłonnego u szczurów. Metoda ta umożliwia bezpośredni dostęp do całej objętości składników obecnych w płynie limfatycznym.

Kaniulacja krezki limfatycznej w modelu szczura w celu pobrania płynu limfatycznego

Ten film pokazuje kaniulację śróddwunastnicy na modelu szczurzym. Po znieczuleniu szczura lokalizuje się dwunastnicę i tworzy się małe nakłucie. Kaniula w kształcie litery J ze ściętą końcówką jest ostrożnie wprowadzana i zabezpieczana, a nacięcie jest zamykane. Kaniulowany model szczura umożliwia infuzję dojelitową do badań immunopatologicznych.

Kaniulacja śróddwunastnicza w modelu szczurzym do badań immunopatologicznych

W tym filmie pokazujemy zabieg chirurgiczny kaniulacji lewej tętnicy szyjnej na modelu szczurzym.

Kaniulacja tętnicy szyjnej w modelu szczurzym

Tutaj opisujemy technikę kannuacji krezkowego przewodu chłonnego u szczurów, która umożliwia ilościowe określenie transportu lipidów i leków przez układ limfatyczny po porodzie jelitowym. Technika ta może być dostosowana do oceny stężenia limfy krezkowej i/lub transportu płynu, komórek odpornościowych, peptydów, białek i cząsteczek lipofilowych.

Model szczura kaniulowanego kaniulowanego w krezkowym przewodzie chłonnym: zastosowanie do oceny transportu leków limfatycznych w jelitach

Tutaj opisujemy protokół wykonywania kaniulacji cisterna magna (CMc), minimalnie inwazyjnego sposobu dostarczania znaczników, substratów i cząsteczek sygnałowych do płynu mózgowo-rdzeniowego (CSF). W połączeniu z różnymi metodami obrazowania, CMc umożliwia ocenę dynamiki układu limfatycznego i płynu mózgowo-rdzeniowego, a także dostarczanie różnych związków do mózgu.

Implantacja kaniuli do Cisterna Magna gryzoni

Tutaj opisujemy dokładną metodę pobierania limfocytów przewodu piersiowego i obserwacji migracji limfocytów tropikalnych jelitowych w plamach Peyera szczura przez 3 godziny za pomocą fotografii poklatkowej. Ta technika może wyjaśnić, w jaki sposób dynamika limfocytów wpływa na stan zapalny.

Obserwacja mikroskopowa dynamiki limfocytów w szczurzych łatach Peyera

Przedstawiamy tutaj protokół jasno definiujący kroki anastomozy głębokiego węzła chłonnego szyjnego lub jego naczynia aferentnego z tylną żyłą twarzową u szczura, aby zminimalizować wpływ innych zmiennych i ujednolicić prowadzenie badań chirurgicznych.

Protokoły chirurgiczne głębokiej anastomozy szyjnej szyjnej w modelu szczura: anastomozy węzłów chłonnych i naczyń chłonnych

Ten protokół eksperymentalny opisuje model szczura z kanalikiem limfatycznym wątroby, który umożliwia bezpośrednią i ilościową ocenę limfatycznego i naczyniowego drenażu wątroby. Model pozwala na jednoczesne pobieranie limfy wątrobowej i krwi ogólnoustrojowej w celu zbadania transportu, metabolizmu i sygnalizacji odpornościowej wątroby, wspierając badania farmakokinetyki leków i biologii specyficznej dla wątroby.

Kompleksowy model szczura do oceny dróg transportu wątrobowego poprzez jednoczesne pobieranie próbek limfatycznych i krwionośnych

Przedstawiono technikę wykonywania mikroskopii intravitalnej węzła chłonnego (LN) pachwinowego. Technika ta umożliwia badanie mikrokrążenia i struktury węzła chłonnego w czasie rzeczywistym, in vivo, zarówno w stanie homeostazy, jak i podczas infekcji. Metoda ta może zostać dostosowana do badań nad migracją komórek oraz do analizy innych lokalizacji węzłów chłonnych.

Mikroskopia wewnątrzżyciowa węzła chłonnego pachwinowego

Ostatnie postępy w mikroskopii dwufotonowej umożliwiły obrazowanie in situ żywych tkanek w modelach zwierzęcych w czasie rzeczywistym, co zwiększyło nasze możliwości badania zachowania komórek zarówno w warunkach fizjologicznych, jak i patologicznych. W niniejszym materiale przedstawiamy przygotowania niezbędne do przeprowadzenia obrazowania przyżyciowego węzła chłonnego podkolanowego myszy.

Obrazowanie intravitalne węzła chłonnego podkolanowego myszy

Poznaj metodę kanulacji głębokiego przewodu limfatycznego szyjnego u szczurów do zbierania limfy z ośrodkowego układu nerwowego. Technika umożliwia pomiar przepływu limfy i analizę substancji pochodzących z mózgu.

Model szczura z kanulacją przewodu limfatycznego szyjnego do oceny transportu limfatycznego z głowy i mózgu

Przeglądaj więcej filmów