Name: Model urazu hipoksji i reoxygenacji u samoorganizujących się ludzkich kardioidów (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-03-17T12:35:00.000+00:00
Duration: 10 min 41 s
Description: Odkryj modelowanie urazu hipoksji i reoxygenacji w samoorganizujących się ludzkich kardioidach pochodzących z iPSC. Ta metoda umożliwia badanie odpowiedzi na uszkodzenie kardiomiocytów i testowanie terapii regeneracyjnych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Prace te są wspierane przez R01 HL157277 (RK), AHA 24PRE1186062 (LP), F30 HL175908-01 (LP) oraz program szkoleniowy dla naukowców medycznych Duke University T32 5T32GM145449-03 (LP).

<ol><li>Bozkurt, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+failure+epidemiology+and+outcomes+statistics%3A+A+report+of+the+Heart+Failure+Society+of+America%5BTitle%5D)+AND+%22J+Card+Fail%22%5BJournal%5D)">Heart failure epidemiology and outcomes statistics: A report of the Heart Failure Society of America.</a> J Card Fail. 29 (10), 1412-1451 (2023).</li>
<li>Groenewegen, A., Rutten, F. H., Mosterd, A., Hoes, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Heart+Fail%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of heart failure.</a> Eur J Heart Fail. 22 (8), 1342-1356 (2020).</li>
<li>Ss, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2025+heart+disease+and+stroke+statistics%3A+A+report+of+us+and+global+data+from+the+american+heart+association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">2025 heart disease and stroke statistics: A report of us and global data from the american heart association.</a> Circulation. 151 (8), e41-e660 (2025).</li>
<li>Sebastião, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioreactor-based+3d+human+myocardial+ischemia%2Freperfusion+in+vitro+model%3A+A+novel+tool+to+unveil+key+paracrine+factors+upon+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Bioreactor-based 3d human myocardial ischemia/reperfusion in vitro model: A novel tool to unveil key paracrine factors upon acute myocardial infarction.</a> Transl Res. 215, 57-74 (2020).</li>
<li>Chen, T., Vunjak-Novakovic, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+tissue-engineered+model+of+myocardial+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+A%22%5BJournal%5D)">Human tissue-engineered model of myocardial ischemia-reperfusion injury.</a> Tissue Eng Part A. 25 (9-10), 711-724 (2019).</li>
<li>Frangogiannis, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+animal+model+studies+are+lost+in+translation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cardiovasc+Aging%22%5BJournal%5D)">Why animal model studies are lost in translation.</a> J Cardiovasc Aging. 2 (2), 22(2022).</li>
<li>Forrest, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Torcetrapib-induced+blood+pressure+elevation+is+independent+of+cetp+inhibition+and+is+accompanied+by+increased+circulating+levels+of+aldosterone%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Torcetrapib-induced blood pressure elevation is independent of cetp inhibition and is accompanied by increased circulating levels of aldosterone.</a> Br J Pharmacol. 154 (7), 1465-1473 (2008).</li>
<li>Barter, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+torcetrapib+in+patients+at+high+risk+for+coronary+events%5BTitle%5D)+AND+%22New+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Effects of torcetrapib in patients at high risk for coronary events.</a> New Engl J Med. 357 (21), 2109-2122 (2007).</li>
<li>Wilensky, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+lipoprotein-associated+phospholipase+a2+reduces+complex+coronary+atherosclerotic+plaque+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Inhibition of lipoprotein-associated phospholipase a2 reduces complex coronary atherosclerotic plaque development.</a> Nat Med. 14 (10), 1059-1066 (2008).</li>
<li>Investigators, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Darapladib+for+preventing+ischemic+events+in+stable+coronary+heart+disease%5BTitle%5D)+AND+%22New+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Darapladib for preventing ischemic events in stable coronary heart disease.</a> New Engl J Med. 370 (18), 1702-1711 (2014).</li>
<li>Debenedittis, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coupled+myovascular+expansion+directs+cardiac+growth+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Coupled myovascular expansion directs cardiac growth and regeneration.</a> Development. 149 (18), dev200654(2022).</li>
<li>Hojo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+vascular+endothelial+growth+factor+in+patients+with+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+College+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Expression of vascular endothelial growth factor in patients with acute myocardial infarction.</a> J Am College Cardiol. 35 (4), 968-973 (2000).</li>
<li>Lodrini, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+cardiac+injury+using+human+cardiac+slices+to+test+therapeutic+approaches+for+cardiac+regeneration+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Heart+J%22%5BJournal%5D)">Modeling cardiac injury using human cardiac slices to test therapeutic approaches for cardiac regeneration and repair.</a> Eur Heart J. 44 (Supplement_2), ehad655.730(2023).</li>
<li>Arstall, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+ventricular+myocytes+in+vitro+exhibit+both+early+and+delayed+preconditioning+responses+to+simulated+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Human ventricular myocytes in vitro exhibit both early and delayed preconditioning responses to simulated ischemia.</a> J Mol Cell Cardiol. 30 (5), 1019-1025 (1998).</li>
<li>Chen, I. Y., Matsa, E., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induced+pluripotent+stem+cells%3A+At+the+heart+of+cardiovascular+precision+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Induced pluripotent stem cells: At the heart of cardiovascular precision medicine.</a> Nat Rev. Cardiol. 13 (6), 333-349 (2016).</li>
<li>Narsinh, N., Narsinh, K. H., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+human+induced+pluripotent+stem+cells+for+cardiovascular+disease+modeling%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Derivation of human induced pluripotent stem cells for cardiovascular disease modeling.</a> Circ Res. 108 (9), 1146-1156 (2011).</li>
<li>Lundy, S. D., Zhu, W. Z., Regnier, M., Laflamme, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+functional+maturation+of+cardiomyocytes+derived+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Structural and functional maturation of cardiomyocytes derived from human pluripotent stem cells.</a> Stem Cells Dev. 22 (14), 1991-2002 (2013).</li>
<li>Lyra-Leite, D. M., Fonoudi, H., Gharib, M., Burridge, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+updated+protocol+for+the+cost-effective+and+weekend-free+culture+of+human+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">An updated protocol for the cost-effective and weekend-free culture of human induced pluripotent stem cells.</a> STAR Protoc. 2 (1), 100213(2021).</li>
<li>Lyra-Leite, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+protocols+for+human+ipsc+culture%2C+cardiac+differentiation%2C+subtype-specification%2C+maturation%2C+and+direct+reprogramming%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">A review of protocols for human ipsc culture, cardiac differentiation, subtype-specification, maturation, and direct reprogramming.</a> STAR Protoc. 3 (3), 101560(2022).</li>
<li>Hofbauer, P., Jahnel, S. M., Mendjan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+models+of+the+human+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">In vitro models of the human heart.</a> Development. 148 (16), dev199672(2021).</li>
<li>Shadrin, I. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiopatch+platform+enables+maturation+and+scale-up+of+human+pluripotent+stem+cell-derived+engineered+heart+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Cardiopatch platform enables maturation and scale-up of human pluripotent stem cell-derived engineered heart tissues.</a> Nat Commun. 8 (1), 1825(2017).</li>
<li>Baar, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-organization+of+rat+cardiac+cells+into+contractile+3-d+cardiac+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Faseb+J%22%5BJournal%5D)">Self-organization of rat cardiac cells into contractile 3-d cardiac tissue.</a> Faseb J. 19 (2), 275-277 (2005).</li>
<li>Ronaldson-Bouchard, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+maturation+of+human+cardiac+tissue+grown+from+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Advanced maturation of human cardiac tissue grown from pluripotent stem cells.</a> Nature. 556 (7700), 239-243 (2018).</li>
<li>Kahn-Krell, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+three-dimensional+culture+system+for+generating+cardiac+spheroids+composed+of+cardiomyocytes%2C+endothelial+cells%2C+smooth-muscle+cells%2C+and+cardiac+fibroblasts+derived+from+human+induced-pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A three-dimensional culture system for generating cardiac spheroids composed of cardiomyocytes, endothelial cells, smooth-muscle cells, and cardiac fibroblasts derived from human induced-pluripotent stem cells.</a> Front Bioeng Biotechnol. 10, 908848(2022).</li>
<li>Lewis-Israeli, Y. R., Volmert, B. D., Gabalski, M. A., Huang, A. R., Aguirre, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generating+self-assembling+human+heart+organoids+derived+from+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Generating self-assembling human heart organoids derived from pluripotent stem cells.</a> J Vis Exp. (175), e63097(2021).</li>
<li>Lewis-Israeli, Y. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+human+heart+organoids+for+the+modeling+of+cardiac+development+and+congenital+heart+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Self-assembling human heart organoids for the modeling of cardiac development and congenital heart disease.</a> Nat Commun. 12 (1), 5142(2021).</li>
<li>Jackman, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+cardiac+tissue+patch+maintains+structural+and+electrical+properties+after+epicardial+implantation%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Engineered cardiac tissue patch maintains structural and electrical properties after epicardial implantation.</a> Biomaterials. 159, 48-58 (2018).</li>
<li>Deluca, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+cardiac+tissues+as+a+platform+for+crispr-based+mitogen+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Healthc+Mater%22%5BJournal%5D)">Engineered cardiac tissues as a platform for crispr-based mitogen discovery.</a> Adv Healthc Mater. 14 (1), e2402201(2025).</li>
<li>Hofbauer, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardioids+reveal+self-organizing+principles+of+human+cardiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Cardioids reveal self-organizing principles of human cardiogenesis.</a> Cell. 184 (12), 3299-3317.e22 (2021).</li>
<li>Schmidt, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-chamber+cardioids+unravel+human+heart+development+and+cardiac+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Biorxiv%22%5BJournal%5D)">Multi-chamber cardioids unravel human heart development and cardiac defects.</a> Biorxiv. , (2022).</li>
<li>Hoang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+spatial-organized+cardiac+organoids+for+developmental+toxicity+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Engineering spatial-organized cardiac organoids for developmental toxicity testing.</a> Stem Cell Rep. 16 (5), 1228-1244 (2021).</li>
<li>Richards, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+cardiac+organoids+for+the+modelling+of+myocardial+infarction+and+drug+cardiotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Human cardiac organoids for the modelling of myocardial infarction and drug cardiotoxicity.</a> Nat Biomed Eng. 4 (4), 446-462 (2020).</li>
<li>Abdallah, H., Toomey, K., O'riordan, A. C., Davidson, A., Marks, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Familial+occurrence+of+discrete+subaortic+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Familial occurrence of discrete subaortic membrane.</a> Pediatr Cardiol. 15 (4), 198-200 (1994).</li>
<li>Lin, H., McBride, K. L., Garg, V., Zhao, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decoding+genetics+of+congenital+heart+disease+using+patient-derived+induced+pluripotent+stem+cells+%28iPSCs%29%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Decoding genetics of congenital heart disease using patient-derived induced pluripotent stem cells (iPSCs).</a> Front Cell Dev Biol. 9, 630069(2021).</li>
<li>Keung, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+cardiac+ventricular-like+organoid+chambers+and+tissue+strips+from+pluripotent+stem+cells+as+a+two-tiered+assay+for+inotropic+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Pharmacol+Ther%22%5BJournal%5D)">Human cardiac ventricular-like organoid chambers and tissue strips from pluripotent stem cells as a two-tiered assay for inotropic responses.</a> Clin Pharmacol Ther. 106 (2), 402-414 (2019).</li>
<li>Kupfer, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+expansion%2C+differentiation%2C+and+electromechanical+coupling+of+human+cardiac+muscle+in+a+3d+bioprinted%2C+chambered+organoid%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">In situ expansion, differentiation, and electromechanical coupling of human cardiac muscle in a 3d bioprinted, chambered organoid.</a> Circ Res. 127 (2), 207-224 (2020).</li>
<li>Marini, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+culture+of+patient-derived+cardiac+organoids+recapitulated+duchenne+muscular+dystrophy+cardiomyopathy+and+disease+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Long-term culture of patient-derived cardiac organoids recapitulated duchenne muscular dystrophy cardiomyopathy and disease progression.</a> Front Cell Dev Biol. 10, 878311(2022).</li>
<li>Mills, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+screening+in+human+psc-cardiac+organoids+identifies+pro-proliferative+compounds+acting+via+the+mevalonate+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Drug screening in human psc-cardiac organoids identifies pro-proliferative compounds acting via the mevalonate pathway.</a> Cell Stem Cell. 24 (6), 895-907.e6 (2019).</li>
<li>Mills, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+screening+in+human+cardiac+organoids+reveals+a+metabolic+mechanism+for+cardiomyocyte+cell+cycle+arrest%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Functional screening in human cardiac organoids reveals a metabolic mechanism for cardiomyocyte cell cycle arrest.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 114 (40), E8372-E8381 (2017).</li>
<li>Karpurapu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+learning+resolves+myocardial+dynamics+in+the+failing+human+heart%5BTitle%5D)+AND+%22JACC+Basic+Transl+Sci%22%5BJournal%5D)">Deep learning resolves myocardial dynamics in the failing human heart.</a> JACC Basic Transl Sci. 9 (5), 674-686 (2024).</li>
<li>Pasqualin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spiky%3A+An+imagej+plugin+for+data+analysis+of+functional+cardiac+and+cardiomyocyte+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Imaging%22%5BJournal%5D)">Spiky: An imagej plugin for data analysis of functional cardiac and cardiomyocyte studies.</a> J Imaging. 8 (4), 95(2022).</li>
<li>Kuppe, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+multi-omic+map+of+human+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Spatial multi-omic map of human myocardial infarction.</a> Nature. 608, 7924(2022).</li>
<li>Karra, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vegfaa+instructs+cardiac+muscle+hyperplasia+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Vegfaa instructs cardiac muscle hyperplasia in adult zebrafish.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 115 (35), 8805-8810 (2018).</li>
<li>Ab, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+are+required+for+neonatal+heart+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+CliniInvest%22%5BJournal%5D)">Macrophages are required for neonatal heart regeneration.</a> J CliniInvest. 124 (3), 1382-1392 (2014).</li>
<li>Lai, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reciprocal+analyses+in+zebrafish+and+medaka+reveal+that+harnessing+the+immune+response+promotes+cardiac+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Reciprocal analyses in zebrafish and medaka reveal that harnessing the immune response promotes cardiac regeneration.</a> Elife. 6, e25605(2017).</li>
</ol>

Przedstawiono tutaj krok po kroku protokół generowania i uszkadzania samoorganizujących się hCOs z H/R. Choroby niedokrwienne serca charakteryzują się remodelacją patofizjologiczną, w tym śmiercią kardiomiocytów, przebudową włóknistą, zaburzeniami elektrycznymi oraz spadkiem funkcji. Te zaburzenia obserwuje się w modelu hCO, w tym wzrost CM TUNEL+ , wzrost uwalniania LDH, zwiększenie powierzchni tkanek Vimentin+ oraz zmiany w obsłudze wapnia prowadzące do utraty synchronizacji funkcjonalnej. Co ważn...

Choroba niedokrwienna serca jest główną przyczyną zachorowalności i śmiertelności na całym świecie, dotykając co najmniej 20,5 miliona osób tylko w Stanach Zjednoczonych 1,2,3. Bez odpowiedniej perfuzji przedłużona hipoksja prowadzi do śmierci kardiomiocytów (CM) i dysfunkcji mięśnia sercowego. Niedokrwienie mięśnia sercowego jest przede wszystkim leczone rewaskularizacją poprzez interwencję przezskórną, terapię trombolitową lub przeszczep pomostowania tętnic wieńcowych. Jednak rewaskularyzacja to miecz obosieczny i może powodować dodatkowe uszkodzenia poprzez uwalnianie reaktywnego tlenu 4,5. Chociaż strategie reperfuzji okazały się niezwykle skuteczne, metody ograniczające utratę CM podczas niedokrwiennych infarktów lub po reperfuzji były bardziej trudne do uchwycenia. Chociaż wiele prób ratowania tkanek zawałowych okazuje się skutecznych w modelach zwierzęcych reperfuzji niedokrwiennej, te same terapie w dużej mierze nie przyniosły znaczących korzyści w badaniach na ludziach, co rodzi potrzebę stosowania modeli ludzkich do oceny terapii oszczędzających lub uzupełniających CM 6,7,8,9,10,11,12.
Platformy ludzkie wykorzystywane do modelowania urazów serca obejmują tkanki pierwotne oraz systemy pochodzące z ludzkich pluripotentnych komórek macierzystych (hiPSC)13,14. Ponieważ tkanki pierwotne są ograniczone dostępnością próbek, systemy hiPSC stały się dominującą platformą ludzką do modelowania chorób serca, z wyraźnymi zaletami w postaci genetycznej podatności i skalowalności 15,16,17,18,19. Tradycyjne kultury kardiomiocytów pochodzących od hiPSC (hiPSC-CM) 2D są ograniczone przez niedojrzałość powstałych CM, brak złożonej architektury tkanek oraz niemożność odtworzenia pełnej różnorodności komórkowej obecnej w ludzkim sercu15,20. Aby zniwelować te niedociągnięcia, coraz częściej stosuje się inżynieryjne tkanki serca 3D (EHT) 20,21,22,23,24,25,26. Podejścia EHT obejmują mieszanie predyferencowanych komórek serca w sferoidy24 lub zasiewanie zróżnicowanych komórek serca do rusztowań lub form 21,22,27. Chociaż EHT lepiej modelują heterotypowe interakcje komórkowe i mają stosunkowo większą dojrzałość niż kultury 2D, wymagania dotyczące niestandardowych rusztowań lub bioreaktorów do tworzenia i utrzymania EHT obecnie ograniczają ich skalowalnośćna 21,27,28.
Samoorganizujące się organoidy sercowe (hCO), czyli kardioidy, to nowy i potężny system modelowy in vitro dla człowieka 20,25,26,29. HCoS mają kilka zalet. Po pierwsze, mogą obejmować wiele typów komórek, w tym komórki śródbłonka, fibroblasty i komórki naepisercyjne, bez potrzeby stosowania wielu specjalistycznych protokołów różnicowania 26,29,30. Po drugie, większość ich różnicowania odbywa się w hodowli zawiesin 3D, eliminując wymagania dotyczące specjalistycznych form lub matrycy tkankowej 25,26,29,30. Wreszcie, hCOs mają stereotypową morfologię sferyczną z centralną jamą, co umożliwia analizy morfologiczne. Dzięki temu hCOs mają skalowalność podobną do systemów hodowli 2D, zachowując jednocześnie część złożoności tkankowej EHT. hCOs były wykorzystywane do testów toksyczności leków, modelowania chorób specyficznych dla pacjenta oraz do modelowania aspektów rozwoju serca20,26,30,31,32,33,34,35,36,37,38,39. Choć obiecujące, hCOs mają kilka ograniczeń w porównaniu do EHT, w tym brak możliwości bezpośredniego pomiaru siły wyjściowej. Ponadto w opisanych modelach hCO nie ma rodzimej populacji komórek odpornościowych, choć możliwe jest zapełnienie hCOs makrofagami. Niemniej jednak hCOs to rozwijający się i szybko ewoluujący system modeli ludzkich 20,26,30,31,32,333,34,35,36,37,38,39.
Do tej pory modelowanie urazów serca z użyciem hCOs było ograniczone. Opisano model kriourazów, ale urazy są bardzo zmienne, a konieczność indywidualnego uszkodzenia hCOs ogranicza skalowalność29. Niniejszy manuskrypt opisuje przyjazny dla użytkownika protokół generowania i uszkadzania samosamodzielnie składających się hCOs z urazami spowodowanymi niedotlenieniem i reoxygenacją (H/R). W porównaniu z innymi protokołami generowania hCO, ten protokół wykorzystuje uproszczone medium różnicowania i zawiera strategię różnicowania mezodermy 2D-3D, opisaną przez Hofbauera i in.29. Protokół dotyczący urazu H/R można wykonać w dowolnym momencie po rozpoczęciu bicia hCO, co zazwyczaj następuje około dnia różnicowania 8 (D8) do D11. Czas trwania H/R można stopniowo zmierzać od 6 do 24 godzin, aby osiągnąć pożądany poziom urazu, od minimalnej do niemal całkowitej utraty CM. Dodatkowo, hCOs stereotypowo rozwijają kolagenowe jądro z komórkami Vimentin+ po urazie H/R, które również skaluje się w zależności od czasu trwania H/R. Ten wysokoprzepustowy, skalowalny model hCO urazu H/R potencjalnie odpowiada na potrzebę rozwoju i testowania nowych metod terapeutycznych wspierających regenerację lub regenerację CM po urazie.

<table><tbody><tr><td>Roztwór akcutazy</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6964-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Przeciwciało przeciwsercowe przeciwko troponinie T</td><td>Abcam</td><td>EPR20266</td><td></td></tr><tr><td>Suplement B-27 (50X), bez surowicy</td><td>Gibco</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>Suplement B-27, bez insuliny</td><td>Gibco</td><td>A1895602</td><td></td></tr><tr><td>BioTek Synergy Neo2 Czytnik Płyt</td><td>BioTek</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cal-520, AM</td><td>AAT Bioquest</td><td>21131</td><td></td></tr><tr><td>CardioCount V1</td><td>Laboratorium Karra</td><td>PMID: 38984052</td><td></td></tr><tr><td>Linia komórkowa (Homo sapiens, samiec) - Linia iPSC DU11</td><td>Rdzeń komórek macierzystych Uniwersytetu Duke</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Szkiełka mikroskopu naładowanego, białe szkło</td><td>VWR</td><td>89500-496</td><td></td></tr><tr><td>CHIR 99021</td><td>Tocris</td><td>4423</td><td></td></tr><tr><td>CloneR</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>5888</td><td></td></tr><tr><td>Corning 96-dołkowy przezroczysty mikropłytki ultra o niskim przyczepieniu</td><td>Fisher</td><td>7007</td><td></td></tr><tr><td>Jednorazowe zbiorniki pipetowania</td><td>VWR</td><td>89094-678</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12, HEPES</td><td>Gibco</td><td>11330057</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop fluorescencyjny EVOS</td><td>EVOS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Matryca bazalnej błony Geltrex o obniżonym współczynniku wzrostu (Domain-Membrane Mine), wolna od LDEV, kwalifikowana dla komórek macientycznych</td><td>Gibco</td><td>A1413302</td><td></td></tr><tr><td>Aktywność człowieka – białko rekombinowane</td><td>PEPROTECH INC/Life Technologies</td><td>120-14E-50UG</td><td></td></tr><tr><td>IWP-2</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>72124</td><td></td></tr><tr><td>Kwas L-askorbinowy (krystaliczny/certyfikowany ACS)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A61-100</td><td></td></tr><tr><td>Mysz anty-Vimentin</td><td>DSHB</td><td>AMF-17b</td><td></td></tr><tr><td>mTeSR Plus</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>100-0276</td><td></td></tr><tr><td>Wielowarstwowe płytki hodowli komórkowej itd.; 12 studni</td><td>VWR</td><td>10062-894</td><td></td></tr><tr><td>Pluronic F-127</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2443</td><td></td></tr><tr><td>ReLeSR</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>100-0483</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 Medium</td><td>Gibco</td><td>11875119</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 Medium, bez fenolu czerwonego</td><td>Gibco</td><td>11835-030</td><td></td></tr><tr><td>Thiazovivin</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>72254</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek O.C.T. Compound</td><td>SAKURA FINETEK USA INC (VWR)</td><td>25608-930</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop konfokalny Zeiss Obracający Dysk</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

model urazu hipoksji i reoxygenacji u samoorganizujących się ludzkich kardioidów

A Hypoxia-Reoxygenation Injury Model in Self-Assembling Human Cardioids

Bez szybkiej rewaskularizacji choroba niedokrwienna serca prowadzi do nieodwracalnej utraty kardiomiocytów, powstawania blizn oraz obniżenia funkcji serca. Możliwość modelowania urazów spowodowanych niedotlenieniem i reoxygenacją oraz ocena potencjalnych interwencji terapeutycznych w tkankach ludzkich jest niezaspokojoną potrzebą. Ludzkie organoidy sercowe (hCO) to nowy system modelowy, ale rozpoczęcie pracy z hCOs może być trudne ze względu na ich niewielki rozmiar, wymagania dotyczące hodowli zawiesin oraz zmienność efektywności różnicowania. Ten protokół oferuje przyjazny dla użytkownika przewodnik po generowaniu i utrzymywaniu samodzielnie składających się hCOs pochodzących z ludzkiego iPSC; metody przetwarzania i analizy histologicznej hCO; oraz podejście do urazu hCom poprzez niedotlenienie i reoxygenację, które naśladuje włóknienie i apoptozę obserwowane przy ludzkiej niedokrwieniu/reperfuzji. Protokół ten dostarcza wskazówek dotyczących stosowania hCOs jako uzupełnienia modeli zwierzęcych urazów niedokrwieniowo-reperfuzyjnych i może być wykorzystywany do identyfikacji oraz testowania czynników mogących przyspieszyć regenerację mięśnia sercowego u człowieka.

Stosowanie powyższego protokołu powinno dać dobrze uformowane hCO, które zaczynają bić między dniami różnicowania 7-12 (D7-12). Gdy hCOs dojrzewają po 25. dniu, spontaniczne skurcze mogą przestać być widoczne bez elektrycznego stymulowania. Uraz H/R może być wykonywany w dowolnym momencie po tym, jak hCOs zaczną bić – zazwyczaj wykonujemy urazy u 15-dniowych (D15) hCOs lub późniejszych.
Potwierdzenie urazu Podobnie jak zawał mięśnia sercowego u ludzi, uszkodzenie H/R u os...

Samoorganizujące się ludzkie organoidy sercowe (hCO) to nowy system modelowania rozwoju i chorób serca u człowieka. Tutaj przedstawiono metodologię generowania i urazu hCOs przy użyciu hipoksji i reoxygenacji oraz szczegóły oczekiwanych wyników histologicznych i funkcjonalnych po urazie.

Model urazu hipoksji i reoxygenacji u samoorganizujących się ludzkich kardioidów

Without rapid revascularization, ischemic heart disease leads to irreversible loss of cardiomyocytes, scar formation, and decreased cardiac function. The ...

Nasze badania koncentrują się na poszukiwaniu nowych sposobów wspomagania regeneracji serca po urazie. W tym celu generujemy samoorganizujące się organoidy sercowe i przeprowadzamy badania hipoksji i reoxygenacji. Protokół ten może być stosowany do badania reakcji na urazy, interwencji terapeutycznych wspierających regenerację oraz może być wykorzystywany do modelowania chorób specyficznych dla pacjenta.Na początek należy aspirować ośrodek specyficzny dla mezodermy serca D1 i dodać wystarczającą ilość roztworu odłączającego komórki, aby całkowicie pokryć pluripotentne komórki międzydermy sercowej pochodzące z komórek macierzystych pochodzące z człowieka. Następnie umieść talerz w inkubatorze w temperaturze 37 stopni Celsjusza na pięć minut. Za pomocą pipety dodaj równą objętość ośrodka międzydermy serca D2 do każdego dołka i delikatnie pipetuj w górę i w dół, aby uwolnić przylegające komórki, następnie przenieś zawiesinę komórkową do stożkowej rurki o pojemności 15 mililitrów.Za pomocą wirówki rozpuszczaj ogniwa w temperaturze 300G przez trzy minuty w temperaturze pokojowej. Ponownie zawiesij pellet w jednym mililitrze pożywki specyfikacyjnej D2 dla mezodermy sercowej zawierającej pięć mikromolów IWP-2 oraz 50 mikrogramów kwasu askorbinowego na mililitr w RB minus. Wymieszaj 10 mikrolitrów trypan blue z 10 mikrolitrami zawiesiny komórkowej w mikrorurce.Policz komórki preferowaną metodą liczenia, a następnie rozcieńcz je do stężenia 100 000 komórek na mililitr w podłożu D2 do mezodermy serca, uzupełnionym o dwa mikromolowe tiazoviwiny. Przenieś zawiesinę ogniwa do odpowiednio dopasowanego zbiornika odczynnikowego. Następnie, używając pipety wielokanałowej, podaję 100 mikrolitrów do każdego dołka płytki z ultra-niskim mocowaniem na 96 dołków, aby uzyskać końcowe stężenie 10 000 komórek na otwór.Obracaj płytę w temperaturze 500G przez pięć minut w temperaturze pokojowej, aby wywołać powstawanie organoidów serca u człowieka w hodowli zawiesiny. Obserwuj powstawanie dużego, dobrze ograniczonego pelletu komórkowego w każdej dołce. Jeśli granulek nie jest ograniczony, powtórz wirowanie.Po 24 godzinach przygotuj 10 mililitrów podłoża D3 zawierającego pięć mikromolowych IWP-2 oraz 50 mikrogramów kwasu askorbinowego na mililitr w RB minus na płytkę. Używając pipety wielokanałowej, dodaj 100 mikrolitrów medium D3 do każdej dołki, nie usuwając żadnych istniejących nośników. Następnego dnia usuń 100 mikrolitrów podłoża D3 z każdego dołku.Aby zminimalizować ryzyko aspiracji, przechyl płytkę pod kątem 45 stopni i trzymaj pipetę wielokanałową pod kątem 90 stopni względem ścianki płyty. Umieść pipetę mocno na ścianie wejścia i powoli ją zasysaj. Po usunięciu podłoża należy zastąpić go 100 mikrolitrami ośrodka D4 zawierającego pięć mikromolów IWP-2 w RB minus.Używając pipety o pojemności 1 000 mikrolitrów z odciętą końcówką, przenieś ludzkie organoidy sercowe do rurki mikrowirówki o pojemności 1,7 mililitra. Pozwól organoidom opaść na dno rurki i delikatnie usuń nadmiar materiału. Dodaj sól fizjologiczną z buforem fosforanowym do przemycia organoidów raz.Poczekaj kilka sekund, aż opadną, i delikatnie usuń nadmiar PBS. Następnie dodaj 4% paradehydu formalnego, aby utrwalić organoidy, i umieść rurkę w temperaturze pokojowej na 30 minut, aby umożliwić utrwalenie. Następnie przenieś pożądaną liczbę organoidów stałych do rurki mikrowirówki o pojemności 1,7 mililitra.Usuń roztwór utrwalający i przepłucz organoidy PBS zawierającym 0,1% Tween 20. Przygotuj pierwotny roztwór przeciwciał, rozcieńczając go do pożądanego stężenia w roztworze barwiącym. Za pomocą pipety dodaj od 50 do 100 mikrolitrów pierwotnego roztworu przeciwciał do każdej rurki mikrowirówki, zapewniając pełne pokrytie organoidów.Po inkubacji i kolejnych płukaniach inkubuj próbkę z przeciwciałem wtórnym rozcieńczonym w roztworze barwniczym przez 24 godziny w temperaturze czterech stopni Celsjusza na platformie do wstrząsania. Po inkubacji wykonaj płukania zgodnie z opisaną wcześniejszą metodą. Następnie, używając wyciętego końcówki pipety, przenieś organoidy na dodatnio naładowany szklany szkiełek.Delikatnie usuń nadmiar PBS Tween 20 i dodaj kilka kropli materiału montażowego, aby zakryć organoidy. Ostrożnie załóż na organoidy pokrywkę, aby je spłaszczyć. Następnie przeszedł do wykonania mikroskopii fluorescencyjnej.Po wybudowaniu utrwalonych organoidów przez noc w 30% sacharozy przy czterech stopniach Celsjusza, przełóż je do plastikowej formy i dodaj do formy niewielką kroplę związku o optimalnej temperaturze cięcia, tylko tyle, by zakryć organoidy. Używając cienkiej pęsety lub końcówki pipety, delikatnie przestaw organoidy w masie tak, aby nie były zlepione i nie oddalały się od krawędzi formy. Umieść organoidy jak najbliżej dna formy, aby zmaksymalizować ich liczbę obecnych w pojedynczej kriosekcji.Włóż formę do chłodziarki styropianowej zawierającej warstwę suchego lodu, aby zamrozić początkową warstwę związku o wysokiej temperaturze cięcia. Poczekaj kilka minut, aż masa stwardnieje, a potem przenieś formę na blat. Dodaj dodatkową masę do optymalizacji temperatury cięcia, aż forma zostanie wypełniona.Pozwól pierwszej warstwie całkowicie się roztopić, zanim ponownie przetasz formę do suchego lodu, aby całkowicie zamroziła. Po zamrożeniu przechowuj formy w temperaturze minus 80 stopni Celsjusza lub przechodź do kriosekcji, aby uzyskać sześciomikrometrowe przekroje. Za pomocą pipety przenieś pięć mililitrów ośrodka do niedołków na 96-dołkowy ludzki organ organoidowy serca do kolby do hodowli komórek.Umieść kolbę w komorze hipoksji i przepłucz komorę gazem beztlenowym składającym się z 5% dwutlenku węgla i 95% azotu przez trzy minuty. Umieść komorę w inkubatorze w temperaturze 37 stopni Celsjusza na co najmniej godzinę przed zainicjowaniem hipoksji. Za pomocą pipety wielokanałowej usuń około 150 mikrolitrów medium ze wszystkich dołków płytki organoidalnej serca człowieka.Następnie, używając pipety o pojemności 200 mikrolitrów, ostrożnie usuń pozostałe medium z każdego dołka, nie naruszając organoidów. Dodaj 50 mikrolitrów podłoża hipoksyjnego do każdego dołku. Umieść płytkę organoidalną serca człowieka w komorze hipoksji.I przepłukać komorę gazem beztlenowym składającym się z 5% dwutlenku węgla i 95% azotu przez trzy minuty. Umieść komorę hipoksji w inkubatorze w temperaturze 37 stopni Celsjusza na sześć godzin. Aby rozpocząć ponowne natlenienie, usuń ludzkie organoidy sercowe z komory hipoksji.Za pomocą pipety wielokanałowej dodaj do każdego dołku 150 mikrolitrów wcześniej podgrzanego RB+medium. Na koniec umieść płytkę w inkubatorze w temperaturze 37 stopni Celsjusza i pozwól na co najmniej trzy godziny na ponowne natlenienie przed przeprowadzeniem dalszych testów. Po sześciu godzinach hipoksji i 24 godzinach reperfuzji aktywność dehydrogenazy mleczanowej z zewnątrzkomórkowych komórek mleczanowych została istotnie zwiększona u uszkodzonych organoidów serca w porównaniu do osób kontrolnych bez uszkodzeń.Organoidy sercowe leczone hipoksją wykazywały jądra kardiomiocytów TUNEL-dodatnie, a odsetek jąder kardiomiocytów TUNEL-dodatnich był istotnie wyższy u uszkodzonych organoidów w porównaniu do osób kontrolnych. Zaobserwowano zależny od czasu wzrost powstawania blizn wraz ze wydłużającym się czasem niedotlenienia przed ponownym natlenieniem powietrza. Po 24 godzinach po reperfuzji 69% nieuszkodzonych ludzkich organoidów sercowych biło, podczas gdy żaden z uszkodzonych organoidów nie bił.Nieuszkodzone ludzkie organoidy sercowe wykazywały zsynchronizowane przejściowe zjawiska wapnia w pięciu obszarach zainteresowania, z pikami występującymi jednocześnie i o podobnych przebiegach fal. Uszkodzone ludzkie organoidy sercowe nie wykazywały skoordynowanych skurczów, lecz nieregularne, spontaniczne przejściowe jawności wapnia w obszarach zainteresowania. Protokół ten pozwala naukowcom naśladować zawał mięśnia sercowego w ludzkich organoidach sercowych pochodzących z iPSC.Największym wyzwaniem technicznym w zapewnieniu powtarzalnych uszkodzeń jest całkowite usunięcie istniejących mediów. Nasze przyszłe badania mają na celu identyfikację czynników, które mogą wspierać regenerację tkanek w ludzkich modelach organoidów sercowych.

a-hypoxia-reoxygenation-injury-model-self-assembling-human

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Ten manuskrypt opisuje tworzenie zdefiniowanych tkanek serca za pomocą ekspresji markerów powierzchniowych i sortowania komórek. Zdefiniowane tkanki mogą być następnie wykorzystane w bioreaktorze wielotkankowym do zbadania mechanizmów terapii komórkami serca w celu zapewnienia funkcjonalnego, a jednocześnie kontrolowanego systemu modelowego ludzkiego serca.

Budowa zdefiniowanych tkanek serca zaprojektowanych przez człowieka w celu zbadania mechanizmów terapii komórkami serca

Tutaj prezentujemy protokół opisujący prosty model pomostowania krążeniowo-oddechowego bez transfuzji lub środków inotropowych u szczura. Model ten pozwala na badanie długoterminowych wielonarządowych następstw krążenia pozaustrojowego.

Regeneracyjny model krążenia pozaustrojowego bez transfuzji lub środków inotropowych u szczurów

Prezentujemy model choroby niedokrwiennej serca za pomocą kardiomiocytów pochodzących z ludzkich indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych, wraz z metodą ilościowej oceny uszkodzeń tkanek spowodowanych niedokrwieniem. Model ten może stanowić użyteczną platformę do badań przesiewowych leków i dalszych badań nad chorobą niedokrwienną serca.

Model choroby niedokrwiennej serca i porównanie wideo skurczu kardiomiocytów przy użyciu kardiomiocytów pochodzących z hiPSC

Różne efekty różnych stopni hipotermii na ochronę mięśnia sercowego nie zostały dokładnie ocenione. Celem niniejszego badania było ilościowe określenie poziomów śmierci komórek po różnych metodach leczenia hipotermii w modelu opartym na ludzkich kardiomiocytach, kładąc podwaliny pod przyszłe dogłębne badania molekularne.

Ocena in vitro ochrony mięśnia sercowego po wstępnym kondycjonowaniu hipotermicznym w modelu ludzkich miocytów serca

Celem tego protokołu jest wyjaśnienie i zademonstrowanie rozwoju trójwymiarowego (3D) modelu mikroprzepływowego wysoce wyrównanej tkanki serca ludzkiego, składającej się z kardiomiocytów pochodzących z komórek macierzystych hodowanych wspólnie z fibroblastami serca (CF) w biomimetycznym hydrożelu na bazie kolagenu, do zastosowań w inżynierii tkankowej serca, badaniach przesiewowych leków i modelowaniu chorób.

Opracowywanie zorganizowanej w 3D ludzkiej tkanki serca w ramach platformy mikroprzepływowej

Dystans przestrzenny jest kluczowym parametrem w ocenie uszkodzenia spowodowanego niedotlenieniem/reoksygenacją w modelu kokulturowym oddzielnych warstw komórek śródbłonka i kardiomiocytów, sugerując po raz pierwszy, że optymalizacja środowiska przestrzennego wspólnej hodowli jest konieczna, aby zapewnić korzystny model in vitro do testowania roli komórek śródbłonka w ochronie kardiomiocytów.

Opracowanie modelu kohodowli komórek w celu naśladowania niedokrwienia/reperfuzji serca in vitro

Tutaj opisujemy protokół do efektywnego tworzenia istotnych dla rozwoju organoidów ludzkiego serca (hHO) przy użyciu ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych poprzez samoorganizację. Protokół opiera się na sekwencyjnej aktywacji sygnałów rozwojowych i wytwarza wysoce złożone, funkcjonalnie istotne tkanki ludzkiego serca.

Generowanie samoorganizujących się organoidów ludzkiego serca pochodzących z pluripotencjalnych komórek macierzystych

Trójwymiarowe tkanki serca bioinżynieryjne wykorzystujące kardiomiocyty pochodzące z komórek macierzystych okazały się obiecującymi modelami do badania zdrowego i chorego ludzkiego mięśnia sercowego in vitro, jednocześnie podsumowując kluczowe aspekty rodzimej niszy sercowej. Manuskrypt ten opisuje protokół wytwarzania i analizy zmodyfikowanych tkanek serca o wysokiej zawartości wygenerowanych z ludzkich pluripotencjalnych kardiomiocytów pochodzących z komórek macierzystych.

Projektowanie bioreaktora w celu usprawnienia pozyskiwania danych i modelowania przepustowości zmodyfikowanych tkanek serca

Tutaj opisujemy protokół in vitro modelujący niedotlenienie/uszkodzenia reoxygenacji w wysokometabolicznych komórkach nabłonka rurkowo-rurkowego. Model ten został zaprojektowany tak, aby wywołać uszkodzenia wywołane stresem metabolicznym, które można zmierzyć poprzez ekspresję markerów uszkodzenia kanałów bliższych oraz ocenę funkcji oddechowej mitochondriów.

Modelowanie niedotlenienia/uszkodzeń reoxygenacji w bliższych komórkach nabłonka rurkowego

Opisano model kontuzji ciężkiego uszkodzenia rdzenia kręgowego. Opisano szczegółowe etapy przedoperacyjne, operacyjne i pooperacyjne w celu uzyskania spójnego modelu.

Model stłuczenia ciężkiego uszkodzenia rdzenia kręgowego u szczurów

Odkryj modelowanie urazu hipoksji i reoxygenacji w samoorganizujących się ludzkich kardioidach pochodzących z iPSC. Ta metoda umożliwia badanie odpowiedzi na uszkodzenie kardiomiocytów i testowanie terapii regeneracyjnych.

Model urazu hipoksji i reoxygenacji u samoorganizujących się ludzkich kardioidów

Przeglądaj więcej filmów