ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

To dzieło było wspierane przez fundusze Tiroler Wissenschaftsfonds (ZAP746010, F.33287/10- 2021, F.50279/7-2024).

Protokół ten został zoptymalizowany na potrzeby badań nad pierwotnymi ludzkimi melanocytami noworodkowym (HNM) w celu zbadania mechanizmów przedwczesnego starzenia indukowanego stresem przez tBHP (Rysunek 1). Melanocyty pochodzą z noworodkowego obrzezania kaukaskiej skóry (lekka pigmentacja fototypu) i są uzyskiwane z komercyjnego źródła. Zgodnie z dokumentacją dostawcy, tkanki ludzkie są pobierane od darczyńców, którzy są w pełni poinformowani i wyrazili zgodę, zgodnie z obowiązującymi ramami etycznymi i prawnymi, w tym Deklaracją Helsińską i stosownymi przepisami dotyczącymi ochrony danych. Komórki były dostarczane w formie anonimowej. Żadna dodatkowa zgoda etyczna nie była wymagana do ich zastosowania w tym badaniu. Wszystkie eksperymenty były przeprowadzane przy użyciu tej samej linii melanocytów, aby zapewnić spójność. Należy pamiętać, że przy użyciu różnych pierwotnych linii komórkowych, warunki hodowli, a także stężenia i procedury obsługi, mogą wymagać dalszej korekty.
1. Przygotowania
UWAGA: Aby rozpocząć leczenie tBHP, melanocyty należy rozmrozić co najmniej na trzy dni przed rozpoczęciem, aby zapewnić wystarczającą regenerację i stopień konfluencji. Faza leczenia trwa 4 dni, przy czym dzień wysiewu jest dzień 0. Szczegóły wszystkich materiałów użytych w tym badaniu są podane w Tabeli Materiałów.
<ol>
	<li>Aby przygotować medium hodowlane, połącz melanocytowe medium podstawowe z odpowiednimi czynnikami wzrostu. Przed dodaniem zawartości do medium zapalić pokrywkę każdej fiolki, aby zminimalizować skażenie. Dodaj 1% (v/v) PenStrep do przygotowanego medium i przechowuj w temperaturze 4 °C do momentu użycia.</li>
	<li>Przed wysiewem przygotuj roztwór inhibitora trypsyny, rozcieńczając inhibitor trypsyny sojowej w DPBS. Przefiltruj roztwór przez membranę 0,22 μm, porcjuj i przechowuj w temperaturze -20 °C. Po rozmrożeniu można go stosować przez maksymalnie 10 dni.</li>
</ol>
2. Rozmrażanie komórek (Dzień -3)
OSTROŻNIE: Wszystkie materiały stykające się z ludzkimi komórkami należy uważać za biologicznie zanieczyszczone i używać zgodnie z wytycznymi bezpieczeństwa biologicznego instytucjonalnego. Aby ocenić starzenie, stosujemy uzupełniające testy oceniające zatrzymanie wzrostu, aktywność SA-β-gal i dodatkowe markery molekularne. Przedstawiamy tu protokoły tych testów i oczekiwane wyniki podczas pracy z tymi wskaźnikami starzenia.
<ol>
	<li>Zapompnij 20 mL buforu fosforanowego Dulbecco (klasa kultury komórkowej) do 50 mL stożkowego pojemnika w temperaturze pokojowej. Utrzymuj fiolkę zawierającą komórki na lodzie do momentu rozmrożenia.</li>
	<li>Zapal pokrywkę przed otwarciem fiolki zawierającej komórki, odkręć i zapal ponownie boki, aby zapobiec potencjalnemu skażeniu.</li>
	<li>Przenieś 500 μL DPBS do fiolki zawierającej komórki. Delikatnie rozmroź komórki pipetując w górę i w dół, a następnie przenieś całą zawartość do pojemnika.</li>
	<li>Wiruj przez 5 min w temperaturze pokojowej przy 100 x g. Powstały pellet powinien mieć kolor beżowy do brązowego (lub ciemniejszy, w zależności od etniczności dawcy).</li>
	<li>Przygotuj kolbę T75 z 14 mL melanocytowego medium.</li>
	<li>Zapal szklaną pipetkę Pasteur (zapalać za każdym razem, gdy obsługuje się melanocyty), ostrożnie zasysaj DPBS i zawieś pellet w 1 mL medium.</li>
	<li>Przenieś do wcześniej przygotowanej kolby.</li>
	<li>Inkubatoruj w temperaturze 37 °C, 5% CO2 i obserwuj codziennie pod mikroskopem. Zmieniaj medium co najmniej co 48 godzin. 
	​UWAGA: Każda krioprzechowalnicza fiolka zawiera około 1 x 106 pierwotnych ludzkich melanocytów. Wszystkie eksperymenty były przeprowadzane przy użyciu komórek w przesiąku 9.</li>
</ol>
3. Wysiew komórek (Dzień 0)
<ol>
	<li>Upewnij się, że stopień konfluencji komórek wynosi 80–90% w dniu wysiewu.</li>
	<li>Zasysaj medium z kolby i przemyj dwukrotnie DPBS.</li>
	<li>Odłącz komórki dodając 2 mL roztworu trypsyny-EDTA i inkubacją przez 5 min w temperaturze 37 °C, 5% CO2.</li>
	<li>Delikatnie stuknij kolbę i obserwuj pod mikroskopem, aby potwierdzić całkowite oderwanie komórek (jeśli konieczne, inkubować dłużej).</li>
	<li>Zatrzymaj reakcję dodając 1,5-krotną objętość inhibitora trypsyny.</li>
	<li>Przenieś zawiesinę komórek do 15 mL stożkowego pojemnika i rozcieńcz DPBS do końcowej objętości 10 mL.</li>
	<li>Wiruj zawiesinę komórek przez 5 min przy 100 x g.</li>
	<li>Zasysaj nadstan i zawieś ponownie w pożądanej objętości w medium.</li>
	<li>Dla płytek leczonych tBHP wysiej 6 x 105 komórek na 10 cm potrawkę. Dla płytek kontrolnych wysiew 4 x 105 komórek na płytkę. 
	UWAGA: Dla płytek lecz

<ol>
	<li>Hussein, R. S., Bin Dayel, S., Abahussein, O., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influences+on+skin+and+intrinsic+aging:+biological,+environmental,+and+therapeutic+insight.">Influences on skin and intrinsic aging: biological, environmental, and therapeutic insight.</a> J Cosmet Dermatol. 24, e16688 (2025).</li><li>Dorf, N., Maciejczyk, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+senescence-from+basic+research+to+clinical+practice.">Skin senescence-from basic research to clinical practice.</a> Front Med (Lausanne). 11, 1484345 (2024).</li><li>Grenier, A., Morissette, M. C., Rochette, P. J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+combination+of+cigarette+smoke+and+solar+rays+causes+effects+similar+to+skin+aging+in+a+bilayer+skin+model.">The combination of cigarette smoke and solar rays causes effects similar to skin aging in a bilayer skin model.</a> Sci Rep. 13, 17969 (2023).</li><li>Varani, J., Dame, M. K., Rittie, L., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+collagen+production+in+chronologically+aged+skin:+roles+of+age-dependent+alteration+in+fibroblast+function+and+defective+mechanical+stimulation.">Decreased collagen production in chronologically aged skin: roles of age-dependent alteration in fibroblast function and defective mechanical stimulation.</a> Am J Pathol. 168, 1861-1868 (2006).</li><li>Zhang, S., Duan, E. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fighting+against+skin+aging:+the+way+from+bench+to+bedside.">Fighting against skin aging: the way from bench to bedside.</a> Cell Transplant. 27, 729-738 (2018).</li><li>Hussen, N. H. a., Abdulla, S. K., Ali, N. M., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+antioxidants+in+skin+aging+and+the+molecular+mechanism+of+ROS:+a+comprehensive+review.">Role of antioxidants in skin aging and the molecular mechanism of ROS: a comprehensive review.</a> Aspects Mol Med. 5, 100063 (2025).</li><li>Addor, F. A. S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+photoaging:+additional+factors+involved+in+the+process+of+skin+aging.">Beyond photoaging: additional factors involved in the process of skin aging.</a> Clin Cosmet Investig Dermatol. 11, 437-443 (2018).</li><li>Mucha, M., Skrzydlewska, E., GÄ™gotek, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+protection+against+oxidative+stress+in+human+skin+melanocytes.">Natural protection against oxidative stress in human skin melanocytes.</a> Commun Biol. 8, 1283 (2025).</li><li>Hughes, B. K., Bishop, C. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+understanding+of+the+role+of+senescent+melanocytes+in+skin+ageing.">Current understanding of the role of senescent melanocytes in skin ageing.</a> Biomedicines. 10, 3111 (2022).</li><li>Kami&#324;ski, K., Kazimierczak, U., Kolenda, T. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+in+melanogenesis+and+melanoma+development.">Oxidative stress in melanogenesis and melanoma development.</a> Contemp Oncol (Pozn). 26, 1-7 (2022).</li><li>Jim&#233;nez-Cervantes, C., Mart&#237;nez-Esparza, M., P&#233;rez, C., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+melanogenesis+in+response+to+oxidative+stress:+transient+downregulation+of+melanocyte+differentiation+markers+and+possible+involvement+of+microphthalmia+transcription+factor.">Inhibition of melanogenesis in response to oxidative stress: transient downregulation of melanocyte differentiation markers and possible involvement of microphthalmia transcription factor.</a> J Cell Sci. 114, 2335-2344 (2001).</li><li>Da&#324;czak-Pazdrowska, A., Gornowicz-Porowska, J., Pola&#324;ska, A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+senescence+in+skin-related+research:+targeted+signaling+pathways+and+naturally+occurring+therapeutic+agents.">Cellular senescence in skin-related research: targeted signaling pathways and naturally occurring therapeutic agents.</a> Aging Cell. 22, e13845 (2023).</li><li>Green, K. J., Pokorny, J., Jarrell, B. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dangerous+liaisons:+loss+of+keratinocyte+control+over+melanocytes+in+melanomagenesis.">Dangerous liaisons: loss of keratinocyte control over melanocytes in melanomagenesis.</a> Bioessays. 46, e2400135 (2024).</li><li>Ali, L., Al Niaimi, F. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+melasma+explained.">Pathogenesis of melasma explained.</a> Int J Dermatol. 64, 1201-1212 (2025).</li><li>Low, E., Alimohammadiha, G., Smith, L. A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+good+is+the+evidence+that+cellular+senescence+causes+skin+ageing.">How good is the evidence that cellular senescence causes skin ageing.</a> Ageing Res Rev. 71, 101456 (2021).</li><li>Chin, T., Lee, X. E., Ng, P. Y., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+cellular+senescence+in+skin+aging+and+age-related+skin+pathologies.">The role of cellular senescence in skin aging and age-related skin pathologies.</a> Front Physiol. 14, 1297637 (2023).</li><li>Gerasymchuk, M., Robinson, G. I., Kovalchuk, O., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+of+the+senescence-associated+phenotype+in+human+skin+fibroblasts.">Modeling of the senescence-associated phenotype in human skin fibroblasts.</a> Int J Mol Sci. 23, 7124 (2022).</li><li>Zimmermann, T., Pommer, M., Kluge, V., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+cellular+senescence+in+human+primary+melanocytes+and+malignant+melanoma+cells+in+vitro.">Detection of cellular senescence in human primary melanocytes and malignant melanoma cells in vitro.</a> Cells. 11, 1489 (2022).</li><li>Tang, J., Li, Q., Cheng, B., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+culture+of+human+face+skin+melanocytes+for+the+study+of+hyperpigmentation.">Primary culture of human face skin melanocytes for the study of hyperpigmentation.</a> Cytotechnology. 66, 891-898 (2014).</li><li>Ku&#269;era, O., Endlicher, R., Rou&#353;ar, T., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+tert-butyl+hydroperoxide-induced+oxidative+stress+on+lean+and+steatotic+rat+hepatocytes+in+vitro.">The effect of tert-butyl hydroperoxide-induced oxidative stress on lean and steatotic rat hepatocytes in vitro.</a> Oxid Med Cell Longev. 2014, 752506 (2014).</li><li>Wedel, S., Martic, I., Hrapovic, N., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=tBHP+treatment+as+a+model+for+cellular+senescence+and+pollution-induced+skin+aging.">tBHP treatment as a model for cellular senescence and pollution-induced skin aging.</a> Mech Ageing Dev. 190, 111318 (2020).</li><li>Rabin, D. M., Rabin, R. L., Blenkinsop, T. A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+oxidative+stress+upregulates+drusen-related+protein+expression+in+adult+human+RPE+stem+cell-derived+RPE+cells:+a+novel+culture+model+for+dry+AMD.">Chronic oxidative stress upregulates drusen-related protein expression in adult human RPE stem cell-derived RPE cells: a novel culture model for dry AMD.</a> Aging (Albany NY). 5, 51-66 (2013).</li><li>Shakel, Z., Costa Lima, S. A., Reis, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+to+make+human+skin+models+based+on+cellular+senescence+for+ageing+research.">Strategies to make human skin models based on cellular senescence for ageing research.</a> Ageing Res Rev. 100, 102430 (2024).</li><li>Mort, R. L., Jackson, I. J., Patton, E. E. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+melanocyte+lineage+in+development+and+disease.">The melanocyte lineage in development and disease.</a> Development. 142, 620-632 (2015).</li><li>Goff, P. S., Castle, J. T., Kohli, J. S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+culture,+and+transfection+of+melanocytes.">Isolation, culture, and transfection of melanocytes.</a> Curr Protoc. 3, e774 (2023).</li><li>Martic, I., Wedel, S., Jansen-DÃ¼rr, P., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+model+to+investigate+UVB-induced+cellular+senescence+and+pigmentation+in+melanocytes.">A new model to investigate UVB-induced cellular senescence and pigmentation in melanocytes.</a> Mech Ageing Dev. 190, 111322 (2020).</li><li>Victorelli, S., Lagnado, A., Halim, J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senescent+human+melanocytes+drive+skin+ageing+via+paracrine+telomere+dysfunction.">Senescent human melanocytes drive skin ageing via paracrine telomere dysfunction.</a> EMBO J. 38, e101982 (2019).</li><li>Zhang, H., Davies, K. J. A., Forman, H. J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+response+and+Nrf2+signaling+in+aging.">Oxidative stress response and Nrf2 signaling in aging.</a> Free Radic Biol Med. 88, 314-336 (2015).</li><li>Birch, J., Gil, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senescence+and+the+SASP:+many+therapeutic+avenues.">Senescence and the SASP: many therapeutic avenues.</a> Genes Dev. 34, 1565-1576 (2020).</li><li>Kang, H. Y., Ortonne, J. P. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+should+be+considered+in+treatment+of+melasma.">What should be considered in treatment of melasma.</a> Ann Dermatol. 22, 373-378 (2010).</li><li>Davalli, P., Mitic, T., Caporali, A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ROS,+cell+senescence,+and+novel+molecular+mechanisms+in+aging+and+age-related+diseases.">ROS, cell senescence, and novel molecular mechanisms in aging and age-related diseases.</a> Oxid Med Cell Longev. 2016, 3565127 (2016).</li><li>Almeida, F. V., Douglass, S. M., Fane, M. E., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bad+company:+microenvironmentally+mediated+resistance+to+targeted+therapy+in+melanoma.">Bad company: microenvironmentally mediated resistance to targeted therapy in melanoma.</a> Pigment Cell Melanoma Res. 32, 237-247 (2019).</li><li>Brenner, M., Hearing, V. J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+protective+role+of+melanin+against+UV+damage+in+human+skin.">The protective role of melanin against UV damage in human skin.</a> Photochem Photobiol. 84, 539-549 (2008).</li><li>L&#243;pez-Ot&#237;n, C., Blasco, M. A., Partridge, L., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hallmarks+of+aging.">The hallmarks of aging.</a> Cell. 153, 1194-1217 (2013).</li><li>Videira, I. F., Moura, D. F., Magina, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+regulating+melanogenesis.">Mechanisms regulating melanogenesis.</a> An Bras Dermatol. 88, 76-83 (2013).</li><li>Ratz-&#321;yko, A., Arct, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resveratrol+as+an+active+ingredient+for+cosmetic+and+dermatological+applications:+a+review.">Resveratrol as an active ingredient for cosmetic and dermatological applications: a review.</a> J Cosmet Laser Ther. 21, 84-90 (2019).</li><li>Xu, M., Pirtskhalava, T., Farr, J. N., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senolytics+improve+physical+function+and+increase+lifespan+in+old+age.">Senolytics improve physical function and increase lifespan in old age.</a> Nat Med. 24, 1246-1256 (2018).</li><li>Ogrodnik, M., Evans, S. A., Fielder, E., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-body+senescent+cell+clearance+alleviates+age-related+brain+inflammation+and+cognitive+impairment+in+mice.">Whole-body senescent cell clearance alleviates age-related brain inflammation and cognitive impairment in mice.</a> Aging Cell. 20, e13296 (2021).</li><li>Hernandez-Segura, A., de Jong, T. V., Melov, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unmasking+transcriptional+heterogeneity+in+senescent+cells.">Unmasking transcriptional heterogeneity in senescent cells.</a> Curr Biol. 27, 2652-2660.e4 (2017).</li></ol>

Autorzy deklarują brak konkurencyjnych interesów finansowych. Lieve Declercq jest związany z Proya Europe; jednak firma nie miała wpływu na projekt badania, zbieranie danych, analizę, interpretację ani decyzję opublikowania. Autorzy deklarują również, że narzędzia sztucznej inteligencji (AI) zostały użyte wyłącznie do wsparcia w edycji językowej i doskonaleniu tekstu. Wszystkie treści naukowe, projekt eksperymentu i interpretacja danych zostały opracowane i zweryfikowane przez autorów.

Ten protokół ustanawia standaryzowany podchod do indukowania przedwczesnego starzenia wywołanego stresem (SIPS) w ludzkich neonatalnych melanocytach za pomocą tBHP, oferując solidny model do badania starzenia się specyficznie dla tego typu komórek. Konsekwentne zmiany w proliferacji, morfologii, aktywności SA-β-gal, markerach uszkodzenia DNA oraz składnikach SASP wspierają indukowany fenotyp. Koncentrując się na melanocytach, komórkach, które pozostają niedostatecznie zbadane w badaniach nad starzeniem, mimo ich kluczowy...

Starzenie się skóry składa się z dwóch różnych czynników: starzenie się intrinsyczne i ekstrinsyczne1,2. Starzenie się intrinsyczne jest spowodowane naturalnymi procesami chronologicznymi i czynnikami genetycznymi, podczas gdy starzenie się ekstrinsyczne wynika z kumulacji stresu środowiskowego, głównie promieniowania ultrafioletowego, ale także zanieczyszczenia powietrza, dymu tytoniowego i czynników chemicznych, które przyspieszają proces starzenia się poza normalnymi wskaźnikami chronologicznymi3,4. Ekspozycja na czynniki środowiskowe wywołuje stres oksydacyjny, który przekracza obronę komórkową przeciwutleniaczy, powodując uszkodzenie DNA, utlenianie białek i peroksydacje lipidów. Te zmiany molekularne wywołują trwałe reakcje na uszkodzenie DNA i dysfunkcję komórkową, co ostatecznie prowadzi do przedwczesnego starzenia się5,6. Ten stres-indukowany proces starzenia się przyczynia się do klinicznych objawów starzenia się skóry, w tym zmarszczek, nierównomiernej pigmentacji, zmniejszonej elastyczności i upośledzonej funkcji barierowej7.
Melanocyty znajdują się w warstwie podstawnej naskórka i pełnią funkcję głównej obrony skóry przed uszkodzeniami wywołanymi promieniowaniem UV poprzez syntezę melaniny i jej przenoszenie do otaczających keratynocytów. Paradoksalnie, ta rola ochronna sprawia, że są one szczególnie podatne na stres oksydacyjny i przedwczesne starzenie się podczas starzenia się ekstrinsycznego8,9. Sam proces melanogenezy wytwarza znaczne ilości reaktywnych form tlenu jako produkty uboczne reakcji katalitycznych tyrozynazy, tworząc wrodzone obciążenie oksydacyjne, które jest dodatkowo wzmacniane przez czynniki środowiskowe, takie jak promieniowanie UV i zanieczyszczenie10,11. W rezultacie przewlekły stres środowiskowy może powodować uszkodzenia oksydacyjne, dysfunkcję mitochondriów i ostatecznie starzenie się komórek12. Pomimo ich znaczenia, pozostają kluczowe pytania dotyczące ścieżek molekularnych rządzących starzeniem się melanocytów i jak stres oksydacyjny inicjuje ten proces. Co więcej, wpływ starzejących się melanocytów na otaczające mikrośrodowisko skóry jako czynnik napędzający zmiany związane z wiekiem, szczególnie poprzez uwalnianie czynników SASP, pozostaje niedostatecznie zrozumiany13,14.
Mimo że melanocyty są szczególnie podatne na stres oksydacyjny–indukowaną senescencję, modele eksperymentalne do badania tego procesu są nadal ograniczone15,16. Większość badań nad starzeniem się opiera się nadal na modelach starzenia się indukowanego replikacją lub stresem w fibroblastach, ale te podejścia nie uwzględniają odrębnej biologii melanocytów ani ich potencjału wpływu na starzenie się skóry poprzez komunikację z sąsiednimi komórkami i ich własnym profilem SASP17. Ta luka podkreśla potrzebę modeli senescencji specyficznych dla melanocytów, które dokładniej odzwierciedlają ich fizjologiczne reakcje na stresory środowiskowe18,19 oraz ich wkład w starzenie się ludzkiej skóry.
Mimo dostępności podejść do starzenia się indukowanego stresem, ich wdrożenie w pierwotnych ludzkich melanocytach jest nadal technicznie trudne i często wiąże się z znaczną zmiennością. Melanocyty są szczególnie wrażliwe na stres oksydacyjny, co powoduje wąskie okno eksperymentalne między skuteczną indukcją starzenia się a nadmierną cytotoksycznością. Ponadto różnice zależne od dawcy w preparatach komórek pierwotnych dodatkowo przyczyniają się do niekonsekwentnych wyników w badaniach. Te wyzwania są często niedostatecznie zgłaszane, a protokoły często nie są wystarczająco standaryzowane, co ogranicza ich powtarzalność. Obecny protokół radzi sobie z tą luką, dostarczając zoptymalizowanego i powtarzalnego schematu leczenia, zdefiniowanego harmonogramu dawkowania i standaryzowanych wyników do niezawodnej indukcji i oceny starzenia się w pierwotnych ludzkich melanocytach.
Tert-butylohydroperoksyd (tBHP) jest dobrze scharakteryzowanym induktorem stresu oksydacyjnego, który promuje starzenie się poprzez wytwarzanie reaktywnych form tlenu i wyczerpywanie obrony przeciwutleniającej komórek. Jest szeroko stosowany do indukowania starzenia się w fibroblastach skóry, gdzie wywołuje charakterystyczne markery starzenia się, zachowując jednocześnie żywotność komórek20,21. Ponieważ tBHP wytwarza trwały stres oksydacyjny poprzez zdefiniowane ścieżki biochemiczne, oferuje powtarzalny i dostępny system do badania starzenia się indukowanego stresem oksydacyjnym oraz do badania mechanizmów molekularnych łączących uszkodzenia oksydacyjne z procesami starzenia się22,23. W przeciwieństwie do modeli opartych na UV, tBHP jest szczególnie

<table><tbody><tr><td>0.22 &micro;m membrane filter</td><td>Merck&nbsp;</td><td>SLGVR33RS</td><td></td></tr><tr><td>1 M citric acid&nbsp;</td><td>Merck&nbsp;</td><td>K91567844</td><td>przygotować w aq. dest.</td></tr><tr><td>1 M MgCl2</td><td>Merck</td><td>A649033</td><td>przygotować w aq. dest.</td></tr><tr><td>1 M Na2HPO4</td><td>Merck</td><td>K56036736</td><td>przygotować w aq. dest.</td></tr><tr><td>10 M NaOH</td><td>Lab Honeywell</td><td>30620</td><td>przygotować w aq. dest.</td></tr><tr><td>37% formaldehyde</td><td>Sigma</td><td>252549</td><td></td></tr><tr><td>4% paraformaldehyde</td><td>CarlRoth</td><td>0335.3</td><td></td></tr><tr><td>5 M Sodium Chloride&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>S3014</td><td>przygotować w aq. dest.</td></tr><tr><td>50% glutaraldehyde</td><td>Sigma</td><td>G6403</td><td></td></tr><tr><td>5-Brom-4-Chlor-3-indolyl-&beta;-D-Galactopyranosid (X-Gal)</td><td>Sigma</td><td>B9146</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor-conjugated secondary antibody 2 mg/mL</td><td>Invitrogen</td><td>A11008</td><td></td></tr><tr><td>BSA (bovine serum albumin)</td><td>Sigma</td><td>A7030</td><td></td></tr><tr><td>Chemiluminescent substrate</td><td>Sigma</td><td>WBKLS0500</td><td></td></tr><tr><td>Costar CellLifter&nbsp;</td><td>Corning</td><td>3008</td><td></td></tr><tr><td>Coverslips for cell culture/microscopy</td><td>Epredia</td><td>CB00200RA120MNZ0</td><td></td></tr><tr><td>DermaLife Basal Medium</td><td>CellSystems</td><td>LM-0004</td><td></td></tr><tr><td>DermaLife M Melanocyte Kit&nbsp;</td><td>CellSystems</td><td>LS-1041</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphate Buffered Saline&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>Human neonatal melanocytes</td><td>CellSystems</td><td>FC-0023</td><td></td></tr><tr><td>LaminB1 antibody (rabbit)</td><td>Abcam</td><td>AB16048</td><td>Rozcieńczenie 1:1000 w 5% BSA</td></tr><tr><td>Mounting medium containing DAPI</td><td>Abcam</td><td>AB104139</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin solution&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>Polyacrylamide gradient gels</td><td>Bio-Rad</td><td>456-8095</td><td></td></tr><tr><td>Poly-D-Lysine, 0.1 mg/mL&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>A38904-01</td><td></td></tr><tr><td>Potassium ferricyanide</td><td>Sigma</td><td>P8131</td><td></td></tr><tr><td>Potassium ferrocyanide</td><td>Sigma</td><td>P-9387</td><td></td></tr><tr><td>pRB antibody (rabbit)</td><td>CellSignalling</td><td>93085</td><td>Rozcieńczenie 1:1000 w 5% BSA</td></tr><tr><td>Protease inhibitor cocktail</td><td>self prepared</td><td>N/A</td><td>500 mM NaF; 2 &micro;g/ml Aprotinin; 1 mM PMSF; 1 mM activated Na-Orthovanadate</td></tr><tr><td>RIPA buffer&nbsp;</td><td>self prepared</td><td>N/A</td><td>zawierający: 50 mM Tris-HCl; 1% NP-40; 0.5% Na-deoxycholate; 0.1% SDS; 150 mM NaCl; 2 mM EDTA</td></tr><tr><td>RLT buffer</td><td>Qiagen</td><td>1015762</td><td>Included in RNeasy Mini Kit&nbsp;</td></tr><tr><td>RNeasy Mini Kit</td><td>Qiagen</td><td>74106</td><td></td></tr><tr><td>Skim milk powder (for 5% milk in TBS-T)</td><td>Sigma</td><td>70166</td><td></td></tr><tr><td>Sodium citrate (for 0.1% solution)</td><td>Sigma</td><td>S4641</td><td></td></tr><tr><td>Soybean trypsin inhibitor, 0.5 mg/mL&nbsp;</td><td>Thermofisher</td><td>17075-029</td><td></td></tr><tr><td>tert-Butyl hydroperoxide (tBHP)</td><td>Sigma</td><td>458139</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100 (for 0.3% solution)</td><td>Sigma</td><td>T9284</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA solution</td><td>Sigma</td><td>T3924</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-mercaptoethanol</td><td>CarlRoth</td><td>4227.3</td><td></td></tr><tr><td>&gamma;H2AX antibody (rabbit)</td><td>CellSignalling</td><td>2577S</td><td>Rozcieńczenie 1:200&nbsp;</td></tr></tbody></table>

znormalizowany protokół wywoływania starzenia się przedwczesnego wywołanego stresem w pierwotnych ludzkich melanocytach z użyciem hydronadtlenku tert-butylu

A Standardized Protocol for Inducing Stress-Induced Premature Senescence in Primary Human Melanocytes Using Tert-butyl Hydroperoxide

Czynniki stresujące środowiskowe, w tym promieniowanie UV, zanieczyszczenie powietrza lub dym tytoniowy, powodują zewnętrzne starzenie się skóry. Ekspozycja na te czynniki starzenia zewnętrznego sprzyja akumulacji senescencyjnych komórek, co przyczynia się do powstawania zmarszczek i zaburzeń barwienia. Melanocyty, które zapewniają pierwotną ochronę przed UV, wykazują zmniejszoną aktywność wraz z wiekiem. Senescencyjne melanocyty gromadzą się w starszej skórze i przyczyniają się do jej starzenia się; Jednakże, jest niewiele modeli do badania senescencji melanocytów, a niniejsza praca ma na celu opracowanie modelu możliwego do powtórzenia dla dalszych badań. W niniejszym badaniu przedstawiamy model senescencji ludzkich neonatalnych melanocytów (HNM) za pomocą tert-butylohydroperoksysdu (tBHP), dobrze scharakteryzowanego induktora stresu oksydacyjnego. tBHP zakłóca homeostazę redoks poprzez wyczerpanie obrony antyoksydacyjnej komórek i promowanie nadprodukcji rodników, co skutkuje uszkodzeniem DNA i białek. Charakteryzujemy fenotyp senescencji melanocytów leczonych tBHP poprzez analizę ustalonych markerów senescencji, w tym ograniczonego potencjału wzrostu, zmian morfologicznych i aktywności SA-β-Galaktozydazy. Ten model zapewnia cenną narzędzie do badania senescencji przedwczesnej indukowanej stresem w melanocytach, oferując wgląd w ich rolę w zewnętrznym starzeniu się skóry i zaburzeniach barwienia.

Opracowanie tBHP indukuje zahamowanie wzrostu w noworodkowych melanocytach ludzkich. 
Traktowanie tBHP hamuje proliferację melanocytów w porównaniu z nieleczonymi kontrolami (n = 3) (Rycina 2A). Do 9. dnia leczone komórki osiągają jedynie 1,4 cPDL, podczas gdy kontrole osiągają 3,1 cPDL. Rozbieżność ta zwiększa się z czasem; leczone melanocyty zbliżają się do plateau na poziomie 1,9 cPDL do 15. dnia, podczas gdy kontrole nadal namnażają się, osiągając prawie 5,1 cPDL. Trw...

Zstandaryzowany protokół indukowania przedwczesnego starzenia się w HNM z użyciem tBHP, zstandaryzowane protokoły do analizy kluczowych markerów starzenia się, w tym zatrzymania wzrostu, aktywności SA-β-galaktozydazy i czynników SASP.

Znormalizowany protokół wywoływania starzenia się przedwczesnego wywołanego stresem w pierwotnych ludzkich melanocytach z użyciem hydronadtlenku tert-butylu

Environmental stressors, including UV radiation, air pollution, or cigarette smoke, drive extrinsic skin aging. Exposure to these extrinsic aging factors ...

Nasze badania koncentrują się na badaniu fenotypu starzenia się melanocytów oraz jego wpływu na egzogenne starzenie się skóry. Ustanowione modele starzenia wykorzystują fibroblasty i nie oddają biologii specyficznej dla melanocytów. Niniejszy protokół indukuje stres oksydacyjny za pomocą tBHP w pierwotnych ludzkich melanocytach.Na początek należy zebrać wymagane odczynniki. Po rozmrożeniu melanocytów i pozostawieniu ich na trzy dni w celu regeneracji, należy upewnić się, że w dniu wysiewu komórki osiągnęły 80 do 90% konfluencji. Odessać pożywkę z kolby.Przemyj komórki dwukrotnie DPBS. Dodaj dwa mililitry roztworu trypsyny z EDTA, aby odkleić komórki. Umieść kolbę w inkubatorze na pięć minut w temperaturze 37 °C przy 5% carbon dioxide.Delikatnie opukać kolbę. Następnie pod mikroskopem zaobserwować komórki, aby potwierdzić ich całkowite odklejenie. Dodać inhibitor trypsyny w ilości 1,5 razy większej niż objętość zawiesiny, aby zatrzymać reakcję.Przenieś zawiesinę komórkową do 15-mililitrowej probówki stożkowej. Rozcieńcz zawiesinę za pomocą DPBS do końcowej objętości 10 mililitrów. Wirowarkuj zawiesinę komórkową przy względnej sile odśrodkowej 100 przez pięć minut.Odssać nadsącz i zawiesić osad komórkowy w pożywce do pożądanej objętości. Wysiać 600 000 komórek na szalkę 10 cm dla płytek traktowanych hydroperoksydem tert-butylu (tBHP). Wysiać 400 000 komórek na płytkę dla płytek kontrolnych.Przygotować 10 mM roztwór roboczy z roztworu zapasowego tBHP, używając DPBS lub pożywki. Do komórek dodać 100 µM tBHP na jedną godzinę podczas każdej serii zabiegów. Poruszać płytką w przód i w tył, aby równomiernie rozprowadzić tBHP w pożywce.Umieść komórki w inkubatorze dokładnie na jedną godzinę w temperaturze 37°C przy 5% dwutlenku węgla. Odessaj medium, aby zakończyć traktowanie tBHP. Przemyj płytki dwukrotnie podgrzanym do 37°C DPBS.Do płytek dodać odpowiednią objętość świeżej pożywki. Płytki umieścić w inkubatorze i pozostawić komórki do regeneracji na co najmniej cztery godziny przed kolejną terapią. Powtórzyć procedurę terapii w późniejszym czasie tego samego dnia w celu przeprowadzenia drugiej terapii.Kontynuuj schemat leczenia do czwartego dnia, a następnie utrzymuj komórki w hodowli do dziewiątego dnia, aby ocenić markery starzenia. Policz komórki traktowane tBHP oraz komórki kontrolne. Przesiej je z tą samą gęstością początkową, a jeśli z płytek z komórkami traktowanymi tBHP uzyskano mniej niż 600 000 komórek, przesiej wszystkie zebrane komórki.Policz komórki w czwartym, dziewiątym i piętnastym dniu hodowli. W dziewiątym dniu przemyj komórki dwukrotnie PBS. Utrwal komórki, używając 2% formaldehydu i 0,4% glutaraldehydu.Utrwalone komórki przemyć dwukrotnie PBS. Inkubować utrwalone komórki w roztworze barwiącym o pH 6. Przykryć płytkę, aby chronić ją przed światłem, a następnie inkubować przez 18 godzin w temperaturze 37 stopni Celsjusza bez dostępu dwutlenku węgla.Przemyj komórki dwukrotnie PBS. Za pomocą mikroskopii świetlnej wykonaj obrazowanie i policz liczbę komórek zabarwionych na niebiesko. Wynik podziel przez całkowitą liczbę komórek w tym samym polu widzenia.Wyniki należy wyrazić jako procent komórek pozytywnych. Po indukcji stresu oksydacyjnego traktowanie tBHP znacząco zredukowało proliferację melanocytów w porównaniu z grupami kontrolnymi. Traktowane komórki osiągnęły do dziewiątego dnia jedynie 1,4 skumulowanych podwojeń populacji, czyli cPDL, podczas gdy grupy kontrolne osiągnęły 3,1 cPDL.Do 15. dnia komórki traktowane osiągnęły plateau na poziomie 1,9 cPDL, podczas gdy komórki kontrolne namnożyły się do 5,1 cPDL. Melanocyty traktowane tBHP wykazały zwiększoną powierzchnię komórki w porównaniu z kontrolą we wszystkich mierzonych punktach czasowych, a powiększenie postępowało aż do 15. dnia, co jest zgodne z powiększoną i spłaszczoną morfologią komórek senescentnych. Melanocyty traktowane tBHP wykazały wzrost aktywności beta-galaktozydazy związanej z senescencją, czyli aktywności SA-beta-galaktozydazy, z 32% komórek pozytywnych w porównaniu z 3% w grupie kontrolnej.Wzrost dodatniego wyniku badania na obecność SA-beta-galaktozydazy był zgodny z fenotypem starzenia się. Analiza immunofluorescencyjna wykazała zwiększone poziomy gamma-H2AX w melanocytach traktowanych tBHP w porównaniu z grupą kontrolną. Komórki traktowane wykazywały silniejszy sygnał gamma-H2AX niż grupa kontrolna.Analiza ilościową polimerazy łańcuchowej w czasie rzeczywistym wykazała zwiększoną ekspresję czynników fenotypu sekrecyjnego związanego ze starzeniem, przy czym największy wzrost odnotowano dla interleukiny-8. Interleukina-6 oraz metaloproteinaza macierzy-1 wykazały umiarkowane wzrosty. Analiza Western blot potwierdziła indukcję starzenia.Poziom laminy B1 uległ znacznemu obniżeniu w melanocytach traktowanych tBHP w porównaniu z grupą kontrolną. Poziomy fosforylowanego białka retinoblastoma były niższe w melanocytach traktowanych tBHP w porównaniu z grupą kontrolną. Traktowanie tBHP zwiększyło ekspresję transkrypcyjną p16 oraz p21 w melanocytach.Model ten pozwala badaczom na analizę wpływu starzejących się melanocytów na pigmentację oraz ich komunikację z otaczającymi komórkami za pośrednictwem czynników zapalnych SASP. Wyzwaniem w tym protokole jest precyzyjne przestrzeganie ram czasowych. tBHP należy aplikować dwa razy dziennie w odstępach co najmniej czterech godzin.Zgodnie z tym protokołem starzenie komórkowe można scharakteryzować, wykorzystując barwienie na beta-galaktozydazę związaną ze starzeniem, immunofluorescencję, RT-qPCR oraz Western blotting w celu analizy uznanych markerów starzenia.

a-standardized-protocol-for-inducing-stress-induced-premature

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Ten film opisuje metodę pomiaru wrażliwości na promieniowanie UV w humanizowanym modelu myszy - modelu myszy, który naśladuje ludzką skórę. Określamy minimalną dawkę rumieniową (MED) promieniowania UV, które może powodować rumień lub obrzęk skóry. Metoda może pomóc w ustaleniu skuteczności leków stosowanych w celu zmniejszenia wrażliwości na promieniowanie UV.

Test minimalnej dawki rumieniowej: metoda pomiaru wrażliwości na promieniowanie UV w modelach mysich

Melanina naskórkowa jest indukowana przez miejscowe stosowanie forskoliny w mysim modelu człowieka o jasnej karnacji, wrażliwego na promieniowanie UV.    Farmakologiczna manipulacja poziomami cAMP w skórze i ciemnienie naskórka silnie chronią przed stanem zapalnym o podłożu UV (oparzenia słoneczne), mierzonym za pomocą testu minimalnej dawki rumieniowej (MED).

Farmakologiczna indukcja melaniny naskórka i ochrona przed oparzeniami słonecznymi w humanizowanym modelu myszy

Ta praca opisuje protokół różnicowania in vitro do produkcji pigmentowanych, dojrzałych melanocytów z ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych za pomocą grzebienia nerwowego i etapu pośredniego melanoblastu przy użyciu 25-dniowego protokołu bez karmienia.

Bezkarmowe pozyskiwanie melanocytów z ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych

Tutaj omawiamy szereg protokołów do indukcji i walidacji starzenia się komórek w hodowanych komórkach. Skupiamy się na różnych bodźcach wywołujących starzenie i opisujemy kwantyfikację powszechnych markerów związanych ze starzeniem się. Przedstawiamy szczegóły techniczne na przykładzie fibroblastów, ale protokoły można dostosować do różnych modeli komórkowych.

Indukcja i walidacja starzenia się komórek w pierwotnych komórkach ludzkich

Poniższa procedura opisuje metodę przestrzennej i czasowej kontroli inicjacji guza melanocytowego w skórze grzbietowej myszy, przy użyciu genetycznie zmodyfikowanego modelu myszy. Protokół ten opisuje makroskopową i mikroskopową inicjację czerniaka skóry.

Przestrzenna i czasowa kontrola inicjacji czerniaka myszy ze zmutowanych komórek macierzystych melanocytów

Celem tego protokołu jest wywołanie przejściowej produkcji in vivo nieśmiertelnych poziomów reaktywnych form tlenu (ROS) w skórze myszy, co dodatkowo promuje reakcje fizjologiczne w tkance.

Stymulacja nisz komórek macierzystych i regeneracji tkanek w skórze myszy za pomocą przełączanej fotogeneracji reaktywnych form tlenu in situ zależnej od protoporfiryny IX

Ten artykuł informuje, że dodanie Y-27632 do podłoża TIVA może znacznie zwiększyć wydajność melanocytów z tkanek skóry dorosłych.

Y-27632 Wzbogaca wydajność ludzkich melanocytów z tkanek skóry dorosłych

Przedstawiamy protokół rozwoju i wykorzystania modelu stresu oksydacyjnego poprzez traktowanie komórek nabłonka barwnikowego siatkówki za pomocąH2O2, analizując morfologię komórek, żywotność, gęstość, glutation i poziom UCP-2. Jest to użyteczny model do badania działania przeciwutleniającego białek wydzielanych przez komórki transpozonowe w celu leczenia zwyrodnienia neuroretinalnego.

Indukcja i analiza stresu oksydacyjnego w komórkach nabłonka ludzkiej siatkówki transposkanych transpozonem

Tutaj opisujemy zoptymalizowany system bezpośredniego przeprogramowania melanocytów oraz wysoce wydajny, skoncentrowany system pakowania wirusów, który zapewnia płynne bezpośrednie przeprogramowanie.

Bezpośrednie przeprogramowanie mysich fibroblastów w melanocyty

Ta metoda bada, jak senny fibroblast skóry wpływa na zdrowe. Starzenie jest indukowane poprzez ekspozycję na UVB, a uodparniony medium jest stosowany na normalne fibroblasty. Pomaga to ocenić aktywne biologicznie związki, które mają na celu zmienioną komunikację między komórkami w starzeniu się skóry.

Nowela połączenia przeciwutleniaczy do przywrócenia zdrowej komunikacji międzykomórkowej w modelu in vitro przy użyciu pożywki warunkowej z komórek starzejących się

Universität Innsbruck.  A standardized protocol for inducing premature senescence in HNM using tBHP, standardized protocols for analyzing key senescence markers, including growth arrest, SA-β-galactosidase activity, and SASP factors.

Znormalizowany protokół wywoływania starzenia się przedwczesnego wywołanego stresem w pierwotnych ludzkich melanocytach z użyciem hydronadtlenku tert-butylu

Przeglądaj więcej filmów