Name: Wykrywanie hormonów płciowych w błonie łzowej człowieka za pomocą enzymatycznych testów immunopochłaniających (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-12T14:15:00.000+00:00
Duration: 5 min 57 s
Description: Poznaj metodę wykrywania hormonów płciowych w błonie łzowej człowieka za pomocą dostosowanych testów ELISA. Ta technika umożliwia pomiar 17β-estradiolu i testosteronu z małych próbek łez zebranych mikrokapilarami.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

To prace były częściowo wspierane przez NIH K23 EY027845 oraz grant na wsparcie badań wydziałowych programu IU Faculty Research Support Program.

To badania zostały zatwierdzone przez Indiana University Institutional Review Board (IRB#1908362633), a pisemna zgoda świadoma została uzyskana od wszystkich uczestników przed pobraniem próbki.
1. Pobieranie łez
<ol>
	<li>Przygotowanie
	<ol>
		<li>Określ objętość łez do pobrania, mając na uwadze, że 2 repliki są potrzebne dla statystycznej wiarygodności wyników ELISA.</li>
		<li>Przygotuj mikroprobówkę 1,5 ml do przechowywania łez.</li>
		<li>Wybierz odpowiednie mikroprobówki do pobierania łez. Zaleca się zacząć od 3,33 µL lub 5 µL i przejść na mniejszy rozmiar, jeśli pobierane są łzy z niższej objętości na powierzchni oka.</li>
		<li>Przygotuj gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gumowy gum

NP: Żadne ujawnienia.
AAT: Alcon (finansowanie badań), Abbvie (doradztwo), Lumenis (prelegent), i Tarsus (prelegent). Brak konfliktu interesów w odniesieniu do przedstawionej tu pracy.

Zbieranie i analiza łez umożliwiają łatwy dostęp do naukowej oceny zdrowia powierzchni oka oraz identyfikacji potencjalnych biomarkerów10,22. Nasz protokół opisuje pomyślne dostosowanie powszechnie stosowanych metod ELISA do analizy próbek płynu łzowego pod kątem hormonów płciowych. Opracowaliśmy tę metodę, aby przeciwdziałać głównej ograniczenia analizy łez, czyli stosunkowo małej objętości dostępnych łez. Poprzez optymalizację przepływu pracy, aby sprostać tym ...

Warstwa łzowa pełni istotne role w ochronie, odżywianiu i smarowaniu powierzchni oka1. Ma grubość około 2–5,5 µm i objętość 3–10 µL, a jej tempo wymiany wynosi 1–2 µL na minutę w zdrowym oku2,3. Gruczoły łzowe wydziela komponent wodny łez, bogaty w wodę, elektrolity, białka i czynniki przeciwdrobnoustrojowe, podczas gdy gruczoły Meiboma wytwarzają lipidy, które spowalniają parowanie warstwy łzowej, a komórki kubełkowe spojówek uwalniają muczyny, które wspierają smarowanie powierzchni oka4. Produkcja łez odbywa się na dwa główne sposoby: 1) sekrecja bazalna, która utrzymuje stabilną warstwę łzową na zdrowej powierzchni oka, oraz 2) sekrecja odruchowa, która jest wyzwalana przez bodźce takie jak podrażnienie, emocje lub jasne światła. Różnica biochemiczna między nimi może ostatecznie wpłynąć na metodę stosowaną do pobierania łez w celu analizy5,6. Łzy bazalne ogólnie zawierają wyższe stężenia białek i lipidów, które wspierają stabilność warstwy łzowej i zdrowie rogówki, podczas gdy łzy odruchowe mają tendencję do wyższej objętości wodnej i są bardziej rozcieńczone, aby spłukać substancje drażniące i chronić powierzchnię oka7,8,9.
Ponieważ łzy pełnią funkcję modulacji stanu zapalnego, obrony przed patogenami i dostarczania składników odżywczych do bezzaczepkowej rogówki1, stały się punktem centralnym badań nad biomarkerami10. Łzy zapewniają minimalnie inwazyjną i stosunkowo niedrogą alternatywę dla pobierania próbek krwi w celu monitorowania zmian fizjologicznych, szczególnie tych występujących w pobliżu miejsca choroby8. Aby dokładnie uchwycić te dane, konieczne jest odpowiednie pobieranie próbek10. Szklane mikrokapilary są szeroko stosowane do pobierania łez bazalnych, ponieważ pozwalają na pobieranie przy minimalnym podrażnieniu i rozcieńczeniu łez5. Ta metoda minimalizuje ryzyko wywołania odruchu łzawienia, który może zmienić skład łez9,11, poprzez staranne ustawienie kapilary, aby uniknąć kontaktu z spojówką rogówkową i marginesem powieki. Korzystając z tego podejścia, naukowcy mogą uzyskać nieskrępowane łzy bazalne, które odzwierciedlają fizjologiczny stan powierzchni oka. Zapewnia to, że próbka pozostaje niezawodnym medium do ilościowego określania wrażliwych analitów, takich jak hormony płciowe10,12. Jednak ograniczona objętość uzyskanych próbek stanowi wyzwanie analityczne dla dalszych oznaczeń biochemicznych. Pobieranie łez bazalnych za pomocą mikrokapil dostarcza zazwyczaj kilka mikrolilitrów na próbkę, co ogranicza zgodność ze standardowymi testami.
Ludzka powierzchnia oka jest coraz częściej rozpoznawana jako tkanką docelową dla hormonów płciowych13,14. Dowodem na to są wykryte transkrypty mRNA receptorów androgenowych (AR), estrogenowych (ER) i progesteronu (PR) w komórkach gruczołowych gruczołów łzowych i Meiboma, a także w komórkach nabłonkowych rogówki, spojówkę i komórkach kubełkowych spojówkę15. Ponadto w tych tkankach zidentyfikowano mRNA kodujące enzymy steroidogenne, co sugeruje zdolność do lokalnego przekształcania prekursorów steroidów w biologicznie czynne hormony płciowe16. Wskazuje to na potencjał in situ syntezy hormonów na powierzchni oka i wznosi krytyczne pytanie, czy te hormony są wydzielane do warstwy łzowej na wykrywalnym poziomie.
Obecne dowody sugerują, że hormony płciowe są integralnym elementem utrzymania homeostazy powierzchni oka, choć dokładne mechanizmy molekularne są nadal przedmiotem badań13,14. Androgeny, takie jak testosteron, wydają się stymulować wydzielanie lipidów i hamować stany zapalne; w konsekwencji, niedobór androgenów jest powszechnie uznany za czynnik wysuszającego suchego oka13,14,17. Natomiast rola estrogenów jest bardziej złożona i zależna od kontekstu13,14,18. Chociaż współuczestniczą w modulowaniu składu i objętości łez, wahania estrogenów, takie jak te występujące podczas menopauzy, ciąży lub stosowania doustnych środków antykoncepcyjnych, są często związane z osłabioną sekrecją wodną, zmniejszoną stabilnością warstwy łzowej i stanem zapalnym powierzchni oka19,20. W rezultacie osoby doświadczające tych zaburzeń hormonalnych reprezentują populację o podwyższonym ryzyku rozwoju suchego oka

<table><tbody><tr><td>17 beta Estradiol ELISA Kit</td><td>Abcam</td><td>ab108667</td><td></td></tr><tr><td>Aluminium foil</td><td>Reynolds Wrap</td><td>10900000154</td><td>Każda dostępna folia aluminiowa do kuchni, aby chronić odczynniki przed światłem</td></tr><tr><td>Microcapillary tube 3.33 &mu;L</td><td>Drummond</td><td>1-000-0033</td><td>Zawierają gumową kulkę do transferu płynu</td></tr><tr><td>Microcapillary tube 5 &mu;L</td><td>Drummond</td><td>1-000-0050</td><td>Zawierają gumową kulkę do transferu płynu</td></tr><tr><td>Microcentrifuge device</td><td>Benchmark Scientific</td><td>C1012</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifuge tube 1.5 mL</td><td>Fisher</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>Microplate reader</td><td>Promega</td><td>GM3000</td><td></td></tr><tr><td>Orbital microplate shaker</td><td>Labnet International Inc.</td><td>S2030-1000-B</td><td></td></tr><tr><td>Język komputerowy R</td><td>Posit Software, PBC (formerly RStudio Inc.)</td><td>R wersja 4.5.1</td><td>Pobierz język R przed Rstudio przez https://cran.r-project.org/</td></tr><tr><td>Oprogramowanie RStudio</td><td>Posit Software, PBC (formerly RStudio Inc.)</td><td>RStudio 2023.06.1 Build 524 "Mountain Hydrangea"</td><td>https://posit.co/downloads/</td></tr><tr><td>Pakiety R "drc", "ggplot2", "patchwork", "ggpp", "dplyr", "readr", "tidyr", "writexl"</td><td>Posit Software, PBC (formerly RStudio Inc.)</td><td></td><td>Zainstaluj pakiet w Rstudio</td></tr><tr><td>Testosterone Control kit</td><td>R&amp;D Parameter</td><td>QC165</td><td>Sprzedane oddzielnie od zestawu ELISA (KGE010)</td></tr><tr><td>Testosterone ELISA kit</td><td>R&amp;D Parameter</td><td>KGE010</td><td></td></tr></tbody></table>

wykrywanie hormonów płciowych w błonie łzowej człowieka za pomocą enzymatycznych testów immunopochłaniających

Sex Hormone Detection In Human Tear Film Using Enzyme-Linked Immunosorbent Assays

Film łzowy jest złożoną, wielowarstwową substancją płynną, niezbędną do utrzymania zdrowia powierzchni oka, jasności widzenia oraz ochrony przed patogenami i czynnikami stresującymi środowiskowe. Składając się głównie z lipidów, płynu wodnego, rozpuszczalnych białek i mukoprotein, służy nie tylko smarowaniu i ochronie oka, ale także jako cenne medium diagnostyczne w przypadku zaburzeń powierzchni oka, takich jak choroba suchego oka (DED). Hormony płciowe, w tym androgeny i estrogeny, wpływają na skład filmu łzowego, ale pomiar tych hormonów w płynie łzowym jest ograniczony przez małą objętość próbki i wyzwania techniczne. Protokół ten opisuje krok po kroku metodę adaptacji komercyjnie dostępnych zestawów ELISA (enzymaticzny test immunopochłanianiowy) do wykrywania i ilościowego oznaczania 17β-estradiolu i testosteronu w łzach podskórnych pobieranych za pomocą mikrokapillarkowych rurek. Przepływ pracy obejmuje zoptymalizowane strategie pobierania próbek, rozcieńczania i przygotowywania testu, aby umożliwić analizę próbek łez o małej objętości. Protokół pokazuje wykonalność i powtarzalność wykrywania hormonów w płynie łzowym przy użyciu przystosowanych metod ELISA. Wyniki reprezentatywne są pochodne od zbiorczych próbek pilotażowych i mają na celu zilustrowanie wydajności testu, a nie różnic biologicznych. Takie podejście może wspierać przyszłe badania badające płyn łzowy jako matrycę do pomiaru hormonów w badaniach nad powierzchnią oka.

Pilot Tear Film Study
W badaniu tym wzięło udział łącznie 20 kobiet (45–63 lata). Klasyfikacja DED opierała się na objawach i co najmniej jednym klinicznym objawie DED. W szczególności wszystkie uczestniczki z DED miały wynik Ocular Surface Disease Index (OSDI) > 12 i co najmniej jedno oko z czasem rozpadu łez fluoresceinowych (TBUT) < 5 s lub wynikiem punktowym barwienia rogówki fluoresceiną (CFSS) > 3 (skala NEI25). Osoby zaklasyfikowane jako non-DED ...

Ten protokół opisuje zoptymalizowaną metodę enzymatycznego testu immunopochłaniania (ELISA) do wykrywania i ilościowego oznaczania 17β-estradiolu i testosteronu w ludzkiej cieczy łzowej pobranej za pomocą mikrokapillark. Takie podejście umożliwia minimalnie inwazyjne pomiary stężenia hormonów w łzach.

Wykrywanie hormonów płciowych w błonie łzowej człowieka za pomocą enzymatycznych testów immunopochłaniających

The tear film is a complex, multi-layered fluid essential for maintaining ocular surface health, visual clarity, and protection against pathogens and ...

Nasze badania koncentrują się na zdrowiu kobiet w chorobach powierzchni oka, adaptacji ELISA do ilościowego oznaczania hormonów płciowych w podskórnym płynie łzowym. Tradycyjne ELISA wymagają dużych objętości próbek, co sprawia, że analiza płynu łzowego jest trudna. Ten protokół umożliwia ilościowe oznaczanie hormonów lub białek z ograniczonych próbek łez.Rozpocznij od uzyskania odpowiednich mikrokapillarkowych rurek do pobierania łez i 1,5-mililitrowej rurkę do mikrowirówki do przechowywania błony łzowej. Aby pobrać podskórne łzy, poinstruuj uczestnika, aby spojrzał prosto przed siebie lub lekko w górę. Następnie delikatnie umieść otwór mikrokapillarkowej rurki w błonie łzowej w pobliżu kąta bocznego, unikając kontaktu z powieką i spojówką, aby zminimalizować odruchowe łzawienie.Napchnij rurkę łzami aż będzie pełna. Zamknij otwór na gumowej kulce do ściskania. Włóż mikrokapillarkową rurkę do kulki i umieść otwarty koniec w rurce do mikrowirówki.Delikatnie ściśnij kulę, aby uwolnić łzy do rurki mikrowirówkowej. Zamknij korek rurki mikrowirówkowej, aby zapobiec odparowaniu. Obracaj rurkę z prędkością 2000 G przez trzy do pięciu sekund, aby zebrać próbkę na dole.Następnie przechowuj próbkę w temperaturze 80 stopni Celsjusza, aby zachować stabilność analitu przed analizą. Uzyskaj wszystkie wymagane odczynniki i materiały i pozwól im osiągnąć temperaturę pokojową. Rozdziel tylko wymagane ilości gotowych do użycia standardów i kontroli, aby zminimalizować skażenie i wielokrotne zmiany temperatury.Przygotuj sześć standardowych roztworów oznaczonych jako zero do pięciu. Uwzględnij jedną kontrolną próbkę dostarczoną z zestawem. Przechowuj mrożone próbki na lodzie w celu rozmrożenia.Wiruj próbki w rurce, aby upewnić się, że próbki są na dnie rurki. Przed pipetowaniem do dołeczków wymieszaj wszystkie standardy, kontrole i próbki, aby zapewnić jednorodne rozmieszczenie. Dodaj 20 mikrolitrów każdego standardu.Dodaj kontrolę i próbkę do dołeczków. Dodaj 160 mikrolitrów 17 beta estradiolu HRP koniugatu do testowanych dołeczków. Następnie przykryj płytkę folią aluminiową lub użyj dostarczonej folii pokrywowej z zestawu i inkubować w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez dwie godziny.Tymczasem przygotuj bufor do mycia z 10X roztworu do mycia. Po inkubacji usuń folię aluminiową z płytki i wyssaj płyn z dołeczków. Myj każdy dołeczek trzy razy buforem do mycia przez co najmniej pięć sekund każdy.Dodaj 100 mikrolitrów roztworu substratu TMB do wszystkich dołeczków. Przykryj całą płytkę folią aluminiową i inkubować w temperaturze pokojowej przez 30 minut. Po inkubacji dodaj 100 mikrolitrów roztworu zatrzymania do dołeczków i obserwuj zmianę koloru odczynnika z niebieskiego na żółty.Następnie delikatnie potrząśnij płytką mikroplaterową. Zmierz absorpcję na długości fali 450 nanometrów w ciągu 30 minut od dodania roztworu zatrzymania. Następnie oblicz stężenie 17 beta estradiolu przy użyciu odpowiednich narzędzi.W obecnym badaniu uwzględniono 20 kobiet w wieku od 43 do 66 lat z chorobą suchego oka lub DED oraz bez niej. Średnie stężenia 17 beta estradiolu w błonie łzowej u starszych kobiet bez DED wynosiły około 66,59 picogramów na mililitr i 47,07 picogramów na mililitr u starszych kobiet z DED. Współczynnik zmienności procentowej dla pomiarów estradiolu wynosił 1,0% dla próbek bez DED i 6,65% dla próbek z DED, co potwierdza reprodukcyjność badania.Ten protokół pozwala naukowcom na mierzenie stężeń hormonów płciowych za pomocą ELISA i podskórnego płynu łzowego pobranego za pomocą mikrokapillarkowych rurek. Błona łzowa zapewnia nieinwazyjne, biologicznie bogate źródło biomarkerów do badań nad powierzchnią oka. Jednak głównym wyzwaniem w analizie łez jest ograniczony objętość łez, który można zebrać, co często wymaga pobierania próbek w wielu wizytach, co w sposób naturalny wprowadza zmienność biologiczną, którą należy pamiętać przy wykonywaniu tego rodzaju pracy.Przyszłe badania mogą wykorzystywać ten protokół do zbadania, jak poziomy hormonów w łzach koreluje z chorobami lub nawet monitorowania skuteczności leczenia.

sex-hormone-detection-human-tear-film-using-enzyme-linked

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Ten film ilustruje test multipleksowy oparty na koralikach do analizy cytokin w ludzkich łzach. Metoda ta pozwala na jednoczesną analizę wielu cytokin z jednej próbki, zapewniając zwiększoną czułość do badania odpowiedzi immunologicznych w różnych stanach patofizjologicznych.

Test oparty na kulkach multipleksowych do analizy cytokin w próbkach ludzkich łez

Przedstawiono protokół ekstrakcji i wstępnego zatężania estradiolu z próbek wody za pomocą zautomatyzowanego i zminiaturyzowanego systemu.

Prosta metoda automatycznej ekstrakcji próbek wody do fazy stałej do analizy immunologicznej małych zanieczyszczeń

Aktywność nadnerczy może być oceniona u koniowatych poprzez analizę kału pod kątem metabolitów kortykosteronu. Metoda ta oferuje nieinwazyjną opcję oceny długoterminowych wzorców zarówno u koni domowych, jak i wolno żyjących. Protokół ten opisuje zaangażowany test immunologiczny sprzężony z enzymem i związaną z nim walidację biochemiczną.

Analiza glikokortykosteroidów w kale: nieinwazyjne monitorowanie nadnerczy u koniowatych

Proponowana praca ocenia potencjał diagnostyczny testów bezpośredniego i wzmocnionego powierzchniowego rezonansu plazmonów (SPRi), szczególnie do wykrywania rekombinowanego ludzkiego hormonu wzrostu w wzbogaconej ludzkiej surowicy, poprzez bezpośrednie porównanie wyników SPRi z dostępnym na rynku zestawem do testów immunoenzymatycznych (ELISA).

Analiza porównawcza ludzkiego hormonu wzrostu w surowicy przy użyciu testów SPRi, Nano-SPRi i ELISA

Analiza cytokin filmu łzowego pomaga w badaniu różnych chorób oczu. Testy multipleksowe oparte na kulkach są proste i czułe oraz umożliwiają testowanie wielu celów w próbkach o małych objętościach. W tym miejscu opisujemy protokół profilowania cytokin filmu łzowego za pomocą testu multipleksowego opartego na kulkach.

Test multipleksowy oparty na kulkach do analizy profili cytokin łzowych

Ten protokół opisuje metodę pobierania próbek łez za pomocą pasków Schirmera oraz zintegrowany ilościowy przepływ pracy do odkrywania nieinwazyjnych biomarkerów białka łez. Proces przygotowania próbki do wychwytywania zawiesiny umożliwia szybkie i niezawodne przygotowanie próbki do rozdarcia oraz analizę spektrometryczną mas, co skutkuje wyższą wydajnością odzyskiwania peptydów i identyfikacją białek niż standardowe procedury w roztworze.

Przygotowanie próbki zatrzymującej zawiesinę białek do proteomiki łez metodą chromatografii cieczowej i tandemowej spektrometrii mas

W tym artykule opisano protokół pobierania i wykrywania miR-15a z łez jako nowego narzędzia diagnostycznego retinopatii cukrzycowej.

MiR-15a pochodzący z łez egzosomowy jako nowe narzędzie diagnostyczne retinopatii cukrzycowej

Identyfikacja biomarkerów RNA i białek z łez w modelach mysich jest bardzo obiecująca dla wczesnej diagnostyki różnych chorób. Manuskrypt ten zawiera kompleksowy protokół optymalizacji skuteczności i efektywności izolacji mRNA i białek z łez myszy.

Optymalizacja zbierania łez u myszy do analizy mRNA i białek

Prezentujemy zwalidowany test ELISA z użyciem nowych przeciwciał monoklonalnych anty-HER2. Test ten umożliwia precyzyjne określenie ilościowe związanego z komórkami i uwolnionego białka HER2 z komórek hodowanych in vitro i innych próbek, w tym krwi i tkanek.

Zwalidowany test immunochemiczny do kompleksowego określenia receptora ludzkiego naskórkowego czynnika wzrostu 2 uwalnianego z komórek i związanego z komórkami

Protokół ten opisuje unikalny protokół kliniczny pobierania próbek ludzkiego płynu łezowego za pomocą czerwonych nici fenolowych oraz workflow oparty na chromatografii cieczowej i spektrometrii mas tandemowej (LC-MS/MS) w celu odkrycia profilu lipidomicznego łz. Prosta metoda bifazowej separacji metyloter-butyloeteru (MTBE)/metanolu umożliwia szybką ekstrakcję lipidów łzowych z wysoką odbudową i odkryciem biomarkerów łz.

Procedura pobierania próbek oparta na niciach fenolowych czerwonych dla lipidomiki nieukierunkowanego płynu łzowego w odkrywaniu biomarkerów

Poznaj metodę wykrywania hormonów płciowych w błonie łzowej człowieka za pomocą dostosowanych testów ELISA. Ta technika umożliwia pomiar 17β-estradiolu i testosteronu z małych próbek łez zebranych mikrokapilarami.

Wykrywanie hormonów płciowych w błonie łzowej człowieka za pomocą enzymatycznych testów immunopochłaniających

Przeglądaj więcej filmów