ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dziękujemy wszystkim członkom naszych laboratoriów za pomocne uwagi i dyskusje związane z tą pracą. Dziękujemy również i wyrażamy uznanie Centrum Fenogenomiki za całą pomoc i ekspertyzę związaną z pracą z myszami w Instytucie Badań Lunenfeld-Tanenbaum (LTRI) w Toronto, Kanada. To badanie było wspierane przez grant projektowy z Canadian Institutes of Health Research (PJT462506) i grant Terry Fox Research Institute Program Projects na rzecz D.S. (TFRI Project #1107) dla D.S. oraz przez Nicol Family Foundation. E.R.L. był wspierany przez Canadian Cancer Society Research Training Award i Frank Fletcher Memorial Fund. K.N.A. był wspierany przez H.L. Holmes Postdoctoral Award i granty 1318698 i 26089 od Cancer Research Society. J.N. był wspierany przez stypendium Canadian Institutes of Health Research Canada Graduate Scholarship – Master’s i Nagrodę Doktorską Canadian Institutes of Health Research (#193389). Y.L był wspierany przez stypendium Canadian Institutes of Health Research Research Excellence, Diversity, and Independence (#ED6-190718).

Wszystkie procedury na zwierzętach były wykonywane zgodnie z wytycznymi kanadyjskiej Rady ds. Opieki nad Zwierzętami i zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami Centrum Fenogenomiki (protokół 26-0272H).
1. Klonyzacja bibliotek CRISPR
UWAGA: Ta sekcja opisuje skupione klonowanie bibliotek CRISPR knockout i CRISPR activation z oligonukleotydów syntetyzowanych w macierzy do wirusów lentycznych. Rutynowo generujemy biblioteki zawierające do 4000 gRNA, które mogą być badane z pokryciem 400x-1000x w 8-20 myszy. Liczbę gRNA i pokrycie można dostosować według potrzeb, co wpłynie na liczbę myszy wymaganą do utrzymania mocy statystycznej. Zalecamy utrzymanie minimalnego pokrycia 400x, które może być wystarczające dla silnych fenotypów zysk funkcji.
<ol>
	<li>Projektowanie bibliotek Guide RNA
	<ol>
		<li>Skompiluj listę wszystkich genów myszy do przebadania w ramach pojedynczego eksperymentu do dalszego projektowania bibliotek CRISPR, utrzymując osobne listy celów dla bibliotek CRISPR knockout (CRISPR-KO) i CRISPR activation (CRISPR-A). 
		UWAGA: Biblioteki CRISPR-KO i CRISPR-A są generowane osobno i mogą być łączone na etapie transdukcji wirusowej w celu jednoczesnego badania.</li>
		<li>Dla bibliotek CRISPR-KO, wybierz od czterech do pięciu pojedynczych guide RNA (sgRNA) na gen używając algorytmów przewidywania wysokiej oceny takich jak CRISPick62,63, CHOPCHOP64, czy VBC Score65. 
		UWAGA: VBC Score zapewnia bardzo wysoką skuteczność i aktywność na docelowych genach66. Niezależnie od narzędzia, preferuj guide z wysoką przewidywaną aktywnością na docelowych genach, minimalnym potencjałem off-target oraz kierowaniem się na egzony kodujące.</li>
		<li>Dla bibliotek CRISPR-A, wybierz osiem do dziesięciu guide na gen używając CRISPick62,63 czy CHOPCHOP64. Dla narzędzi, które pozwalają na określenie długości guide przez użytkownika (takich jak CHOPCHOP), ustaw długość guide na 14 bp przed wygenerowaniem guide. Jeśli używasz narzędzia, które generuje tylko guide 20 bp, przekształć te sekwencje na martwe guide RNA (dgRNA) zachowując 14 bp sekwencji bezpośrednio 5’ od motywu protospacer, którego docelowym obszarem są regiony promotorowe genów. 
		UWAGA: dgRNA to skrócone sekwencje guide zaprojektowane w celu umożliwienia CRISPR-based aktywacji transkrypcyjnej na około 50-85% skuteczności pełnych długości sgRNA55 bez indukowania kleizenia DNA59,60,61.</li>
		<li>Skup wszystkie sgRNA lub dgRNA odpowiadające pojedynczemu eksperymentowi na osobne listy, aby umożliwić jednolite klonowanie, produkcję wirusów i in vivo badanie. 
		UWAGA: sgRNA i dgRNA, które mają być badane razem, zostaną skupiony po produkcji wirusowej.</li>
		<li>Generuj skupione biblioteki kontroli negatywnej dla skupisk CRISPR-KO i CRISPR-A, włączając nie-docelowe55,67 i nie-genowe sekwencje gRNA68, jak opisano wcześniej, aby kontrolować efekty tła niezależne od zakłócenia lub aktywacji genu. 
		​UWAGA: W razie potrzeby można stworzyć oddzielne biblioteki nie-docelowych i nie-genowych gRNA, aby utworzyć dwie niezależne biblioteki kontroli negatywnej.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Projektowanie puli oligonukleotydów i amplifikacja
	<ol>
		<li>Zaprojektuj skupione oligonukleotydy tak, aby każdy gRNA zawierał sekwencję docelującą, zakończenia enzymu restrykcyjnego kompatybilne z docelowym podłożem wirusa lentycznego oraz sekwencje pierwszeństwa specyficzne dla biblioteki, aby umożliwić selektywną amplifikację z kompleksowego skupienia oligonukleotydów (Rysunek 1, Tabela 1).</li>
		<li>Przypisz unikalną parę pierwszeństw do każdej biblioteki gRNA, aby pozwolić na niezależną amplifikację poszczególnych bibliotek z wspólnego skupienia oligonukleotydów. Unikalne pary pierwszeństw są wymienione w Tabeli 1.</li>
		<li>Zamów skupione biblioteki oligonukleotydów z komercyjnej platformy syntezy matrycowej, upewniając się, że wszystkie gRNA są reprezentowane równocześnie w każdej puli.</li>
		<li>Amplifykacja poszczególnych bibliotek gRNA z pokrojonej puli oligonukleotydów za pomocą pierwszeństw specyficznych dla biblioteki w następującym mieszaniu reakcji. Reakcja może być zmodyfikowana, aby odpowiadać zaleceniom składowym określonej polimerazy. Przygotuj trzy reakcje z pokrojoną pulą oligonukleotydów i jedną reakcję kontrolną bez szablonu. 
		4 ng Pokrojonego szablonu oligonukleotydów 
		2,5 μL 10 μM Pierwszeństwo specyficzne dla pierwszeństwa 
		2,5 μL 10 μM Pierwszeństwo specyficzne dla pierwszeństwa odwrotnego 
		10 μL 5x

D.S. jest konsultantem i założycielem ViVerita Therapeutics, a jego laboratorium sponsorowało umowy badawcze i umowy o świadczenie usług z ViVerita Therapeutics.

Kluczową kwestią dla zbiorczych badań CRISPR in vivo jest osiągnięcie wystarczającego pokrycia biblioteki, zachowując jednocześnie rozrzedzone, pojedyncze transdukcje komórek w celu zachowania rozdzielczości klonalnej2. W gruczołach sutkowych myszy kompartyment nabłonkowy szacunkowo składa się z około 3,5 × 105 komórek na gruczoł36. Przy średniej skuteczności transdukcji lentiwirusowej na poziomie 15%, która minimalizuje częstotliwość wielokrotnych infek...

Badania funkcjonalnej genomiki zapewniają potężną ramę do badania funkcji genów w skali1. Rozwój technologii edytacji genów CRISPR-Cas umożliwił systematyczne zakłócanie setek do tysięcy genów równolegle, a przesiewowe badania oparte na CRISPR w liniach komórek ssaków stały się filarem współczesnych badań nad biologią nowotworów2. Te in vitro podejścia zidentyfikowały geny niezbędne3, supresory nowotworowe4 oraz interakcje syntetycznie śmiertelne5 w różnorodnych kontekstach nowotworów. Jednak jednym z głównych ograniczeń jest niemożność uchwycenia złożonych biologicznych cech guzów in vivo, w tym interakcji z układem odpornościowym i stromą, gradientów składników odżywczych oraz struktury tkankowej w mikrośrodowisku2. Zgodnie z tym ograniczeniem, ostatnie badania wykazały, że wiele bona fide genów sterujących nowotworami nie wywiera mierzalnych efektów in vitro, zwłaszcza jeśli ich funkcja zależy od bodźców mikrośrodowiskowych, których brakuje w hodowli komórkowej6,7,8,9,10.
Grucz ssaków dostarcza unikalnie korzystnego kontekstu tkankowego do przesiewów funkcjonalnej genomiki in vivo. Komórki nabłonkowe gruczołu mlekowego są wysoce regeneracyjne, przechodzą kolejne rundy klonalnej ekspansji podczas cyklu estrusowego i są zorganizowane w rozgałęzioną sieć przewodów, która może być łatwo uzyskany i genetycznie manipulowany11,12,13. Te cechy wspierają dziesięciolecia mozaikowych analiz genetycznych i eksperymentów śledzenia linii i ustanawiają gruczoł mlekowy jako użyteczny system do badania funkcji genów intrinsycznych dla komórek i zależnych od mikrośrodowiska podczas homeostazy tkankowej i choroby14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32,33. Co ważne, zakłócenia genetyczne mogą być ograniczone do nabłonkowego przedziału, umożliwiając bezpośrednie badanie nabłonkowych czynników transformacji, konkurencji komórkowej, wierności linii i progresji nowotworów w całym tkankowym kontekście.
Mimo że opracowano kilka strategii dostarczania zakłóceń genetycznych bezpośrednio do dorosłego gruczołu mlekowego in situ, pozostają znaczne trudności techniczne dla zastosowań wysokowydajnych. Dostarczanie adenowirusem rekombinazy Cre było szeroko stosowane do indukcji somatycznej rekombinacji warunkowych alleli w dorosłym gruczole mlecznym34,35,36,37, oferując wydajny sposób manipulacji funkcją genów bez złożonego hodowlano-genetycznego hodowania wymaganego dla tradycyjnych genetycznie zmodyfikowanych modeli myszy (GEMM). Podczas gdy adenowirus wysokiej titry może również dostarczyć komponenty CRISPR-Cas9 do komórek tkankowych, te wektory nie integrują się z genomem gospodarza38,39,40,41,42,43,44,45,46,47,48,49. To poważnie ogranicza skalę przesiewów do ~10–55 genów, ponieważ każde miejsce docelowe gRNA musi być sekwencjonowane indywidualnie za pomocą sond inwersji molekularnej38,39,40,41,42,43,44,45,46,47. Co więcej, obecnie stosowane metody dostarczania dokanałowego umożliwiają bezpośredni dostęp do dokanałowego układu gruczołu mlekowego, ale wymagają albo inwazyjnej ekspozycji chirurgicznej gruczołu mlekowego5

<table><tbody><tr><td>0.45 micron filter</td><td>Sigma</td><td>S2HVU02RE</td><td></td></tr><tr><td>12k or 92k oligo chip</td><td>Customarray Inc. (Genscript)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>15 cm cell culture plates</td><td>Corning</td><td>CLS353004</td><td></td></tr><tr><td>293FT</td><td>Invitrogen</td><td>R70007</td><td></td></tr><tr><td>293NT</td><td>Systems Biosciences</td><td>LV900A-1</td><td></td></tr><tr><td>Alkaline phosphatase</td><td>NEB</td><td>M0290L</td><td></td></tr><tr><td>Amplicillin</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1760-25</td><td></td></tr><tr><td>ATP</td><td>NEB</td><td>9804S</td><td></td></tr><tr><td>ATP</td><td>NEB</td><td>P0756S</td><td></td></tr><tr><td>Cutsmart buffer</td><td>NEB</td><td>B6004S</td><td></td></tr><tr><td>Deep sequencing (Next-Seq or Hi-Seq)</td><td>Illumina</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DNAesy Blood and Tissue DNA extraction kit</td><td>Qiagen</td><td>69506</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&rsquo;s modified Eagle medium</td><td>Wisent</td><td>319-015-CL</td><td></td></tr><tr><td>Endura electrocompetent cells</td><td>Lucigen</td><td>60242-1</td><td></td></tr><tr><td>EpiCult-B Mouse Medium Kit</td><td>Stemcell Technologies</td><td>05610</td><td></td></tr><tr><td>Esp3I</td><td>NEB</td><td>R0734L</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Wisent</td><td>090-150</td><td></td></tr><tr><td>Gel DNA-cleanup kit</td><td>Zymo Research</td><td>D4008</td><td></td></tr><tr><td>Gene Pulser/MicroPulser Electroporation Cuvettes</td><td>BioRad</td><td>1652089</td><td></td></tr><tr><td>Gentle Collagenase/Hyaluronidase</td><td>Stemcell Technologies</td><td>7919</td><td></td></tr><tr><td>H11-Cas9</td><td>Jackson Labratories</td><td>JAX#028239</td><td></td></tr><tr><td>High-Speed Centrifuge</td><td>Beckman Coulter</td><td>MLS-50</td><td></td></tr><tr><td>Kim-wipe</td><td>Kimberly-Clark</td><td>34155</td><td></td></tr><tr><td>LB Agar</td><td>Wisent Technologies</td><td>800-011-LG</td><td></td></tr><tr><td>Micropipette puller</td><td>Sutter Instrument</td><td>P97</td><td></td></tr><tr><td>Mini-prep plasmid Kit</td><td>Frogga Bio</td><td>PDH300</td><td></td></tr><tr><td>NEBuffer 3.1 (Buffer for BsmBI)</td><td>NEB</td><td>R0580L</td><td></td></tr><tr><td>Oligo Clean and Concentrator</td><td>Zymo Research</td><td>D4061</td><td></td></tr><tr><td>Oligo cleanup kit</td><td>Zymo research</td><td>D4060</td><td></td></tr><tr><td>PAGE purified illumina sequencing primer</td><td>IDT DNA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PCR Micropipettes</td><td>Drummond</td><td>5-000-1001-X10</td><td></td></tr><tr><td>PEI (polyethyleneimine)</td><td>Sigma</td><td>408727-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin and Streptinomycin</td><td>Wisent</td><td>450-201-EL</td><td></td></tr><tr><td>pLKO-Cre</td><td>Addgene</td><td>158032</td><td></td></tr><tr><td>pMD2.G</td><td>Addgene</td><td>12259</td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-Lysine</td><td>Sigma</td><td>P2636-100MG</td><td></td></tr><tr><td>psPAX2</td><td>Addgene</td><td>12260</td><td></td></tr><tr><td>pXPR502-PPH-Cre</td><td>Addgene</td><td>256776</td><td></td></tr><tr><td>Q5 Polymerase 2x Master mix</td><td>NEB</td><td>M0494L</td><td></td></tr><tr><td>Qubit Fluorometric Quantification</td><td>Invitrogen</td><td>Q33327</td><td></td></tr><tr><td>R26-LSL-Cas9-EGFP</td><td>Jackson Labratories</td><td>JAX#024857</td><td></td></tr><tr><td>R26-LSL-TdTomato mice</td><td>Jackson Labratories</td><td>JAX#007909</td><td></td></tr><tr><td>SapI</td><td>NEB</td><td>R0569L</td><td></td></tr><tr><td>T4 DNA ligase</td><td>NEB</td><td>M0202L</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-centrifuge tubes</td><td>Beckman Coulter</td><td>344058</td><td></td></tr><tr><td>Vacuum Filter Units</td><td>Fisher Scientific</td><td>SCHVU02RE</td><td></td></tr></tbody></table>

równoległe in vivo badanie wyłączania i aktywacji genów w gruczołach piersiowych myszy

Parallel In Vivo Screening of Gene Knockout and Activation in the Mouse Mammary Gland

Ekrany genetyki przesunięte są rutynowo stosowane do zakłócania tysięcy elementów genetycznych w sposób zgrupowany w celu stworzenia dużych map związku genotyp-fenotyp. Chociaż często przeprowadzane są w systemach kultury komórkowej, rosnące dowody potwierdzają, że ekrany in vivo mają moc ujawnienia nowej biologii, której nie można odtworzyć in vitro. Jednak szerokie zastosowanie tego podejścia było ograniczone przez dwa główne wyzwania: dominujący skutek na zakłóceniach utraty funkcji zamiast aktywacji genów oraz znaczne trudności techniczne z dostarczeniem złożonych bibliotek genetycznych do określonych tkanek in vivo. Aby przezwyciężyć te wyzwania, opisujemy prostą i wszechstronną strategię iniekcji do przewodów, która umożliwia wydajne i szybkie przesiewowe badania genomowe w gruczołach piersiowych myszy poprzez generowanie dziesiątek tysięcy osobnych klonów nabłonkowych. Ponadto dostarczamy wszystkich szczegółów niezbędnych do generowania bibliotek, iniekcji do przewodów, rozwikływania ekranów i analizy bibliotek CRISPR-Knockout i Aktywacji dla kompleksowych ekranów in vivo. Korzystając z tych narzędzi, które nazwano CRISPR-KOALA (Test Związany z Knockoutem i Aktywacją), zidentyfikowaliśmy nowe supresory nowotworowe i onkogeny w genomie kodującym i niekodującym w zgrupowanych bibliotekach wahających się od 46 lokacji do piątej części genomu. Co ważne, to podejście i analiza mogą być zastosowane do innych narządów w celu badania funkcji biologicznych dowolnego genu podczas homeostazy lub choroby.

W niniejszej pracy przedstawiamy protokół dla pulowej analizy przesiewowej CRISPR in vivo w gruczole piersiowym myszy. Pipeline ten może być wykorzystywany kompleksowo do projektowania i amplifikacji pulowych bibliotek gRNA z macierzy oligonukleotydowych, klonowania bibliotek gRNA do wektorów lentiwirusowych, produkcji lentiwirusów o wysokim mianie, przeprowadzania wewnątrzprzewodowej dostawy pulowych bibliotek lentiwirusowych do dorosłego gruczołu piersiowego oraz odzyskiwania gRNA w celu dekonwolucji reprezent...

Ten protokół opisuje skalowalne podejście do wewnątrzkanalikowego przesiewania CRISPR, umożliwiające równoległe in vivo badania nad wyłączeniem genów i aktywacją w gruczołach piersiowych myszy.

Równoległe in vivo badanie wyłączania i aktywacji genów w gruczołach piersiowych myszy

Forward genetics screens are routinely employed to perturb thousands of genetic elements in a pooled fashion with the goal of producing large-scale ...

parallel-vivo-screening-gene-knockout-activation-mouse-mammary

Research

JoVE Journal

Genetics

Genetyka

Równoległe in vivo badanie knockoutu i aktywacji genów w gruczołach sutkowych myszy

Ta metoda opisuje sposób preparowania oraz oceny rozwoju i funkcji gruczołów mlekowych u myszy. Wycięte gruczoły mlekowe oceniane są pod kątem stopnia rozwoju za pomocą metody całego preparatu (whole mount), natomiast wydzielanie mleka jest oceniane przy użyciu testu skurczu komórek mioepitelialnych indukowanego oksytocyną.

Ocena rozwoju i funkcji gruczołu mlekowego w modelach mysich

Obrazowanie poklatkowe służy do oceny zachowania pierwotnych komórek nabłonka sutka preneoplastycznego pochodzących z genetycznie modyfikowanych mysich modeli ryzyka raka piersi w celu określenia, czy istnieją korelacje między określonymi parametrami behawioralnymi a odrębnymi zmianami genetycznymi.

Obrazowanie poklatkowe pierwotnych przednowotworowych komórek nabłonka sutka pochodzących z genetycznie zmodyfikowanych mysich modeli raka piersi

Opisano protokół nieinwazyjnego wewnątrzprzewodowego dostarczania wodnych odczynników do gruczołu sutkowego myszy. Metoda wykorzystuje miejscowe wstrzyknięcie do sutków gruczołów sutkowych, celując konkretnie w przewody sutkowe. Technika ta można dostosować do różnych związków, w tym siRNA, chemioterapeutyków i małych cząsteczek.

Wstrzyknięcie doprzewodowe w celu miejscowego dostarczania leku do mysiego gruczołu sutkowego

Aktywacja utajonych mutacji z adenowirusem-Cre w systemie przewodowym sutka powoduje klinicznie istotny przerzutowy rak piersi. Włączenie promotora YFP umożliwia śledzenie dystalnych komórek nowotworowych z przerzutami. Model ten jest przydatny do badania utajonych przerzutów, odporności przeciwnowotworowej oraz do projektowania nowych immunoterapii w leczeniu raka piersi.

Inicjacja przerzutowego raka piersi poprzez celowanie w nabłonek przewodowy za pomocą Adenovirus-Cre: nowy transgeniczny mysi model raka piersi

Rak jest złożoną chorobą, na którą wpływ ma tkanka otaczająca guz, a także lokalne mediatory pro- i przeciwzapalne. Dlatego ortotropowe modele iniekcyjne, a nie modele podskórne, mogą być przydatne do badania progresji raka w sposób, który lepiej naśladuje ludzką patologię.

Ortotopowe wstrzyknięcie komórek raka piersi do poduszeczki tłuszczowej sutka myszy w celu zbadania wzrostu guza.

Tutaj opisujemy standardowy protokół wykrywania aktywności β-galaktozydazy we wczesnych zarodkach całych myszy oraz metodę sekcji parafiny i przeciwbarwienia. Jest to łatwa i szybka procedura monitorowania ekspresji genów podczas rozwoju, która może być również stosowana do skrawków tkanek, narządów lub hodowanych komórek.

Śledzenie ekspresji genów poprzez wykrywanie aktywności β-galaktozydazy w całych zarodkach myszy

Celem tego protokołu jest opisanie nowego podejścia do modelowania raka piersi opartego na doprzewodowym wstrzykiwaniu adenowirusa z ekspresją Cre do mysich gruczołów sutkowych. Takie podejście pozwala na manipulowanie zdarzeniami onkogennymi zarówno w zależności od typu komórki, jak i narządu, w sposób kontrolowany czasowo.

Modelowanie raka piersi poprzez doprzewodowe wstrzyknięcie adenowirusa z ekspresją Cre do mysiego gruczołu sutkowego

Modele ksenoprzeszczepów pochodzących od pacjentów (PDX) oraz genetycznie modyfikowane modele myszy do przeszczepu wiernie odwzorowują ludzką chorobę i są preferowanymi modelami do podstawowych i translacyjnych badań nad rakiem piersi. W tym miejscu opisano metodę ortotopowego przeszczepiania fragmentów guza piersi do poduszeczki tłuszczowej sutka w celu zbadania biologii guza i oceny odpowiedzi na lek.

Ortotopowe przeszczepy guzów piersi jako modele przedkliniczne raka piersi

Ten protokół opisuje nowatorskie okno obrazowania sutka z wymienną pokrywą (R.MIW). Mikroskopia przyżyciowa po wszczepieniu R.MIW pozwala na podłużne i wielodniowe obrazowanie zdrowego i chorego gruczołu sutkowego z rozdzielczością komórkową na różnych etapach rozwoju.

Podłużna mikroskopia przyżyciowa z wykorzystaniem okienka do obrazowania sutkowego z wymienną pokrywą

Niniejszy protokół opisuje łatwą technikę obrazowania gruczołu sutkowego myszy w okresie laktacji za pomocą skaningu laserowego, mikroskopii konfokalnej i wielofotonowej.

Mikroskopia subkomórkowa przyżyciowych gruczołu sutkowego

Obecny protokół opisuje doprzewodową iniekcję wektorów wirusowych przez smoczek w celu dostarczenia interesujących genów do komórek nabłonka sutka.

In vivo (in vivo) Dostarczanie genów do komórek nabłonka sutka myszy poprzez wstrzyknięcie doprzewodowe sutka

Mount Sinai Hospital.  Ten protokół opisuje skalowalne podejście do intraduktalnego badania CRISPR, umożliwiające równoległe in vivo badania nokautów genów i aktywacji w gruczołach piersiowych myszy.

Równoległe in vivo badanie wyłączania i aktywacji genów w gruczołach piersiowych myszy

Przeglądaj więcej filmów