Name: Przygotowanie i frakcjonowanie ekstraktów z jaj Xenopus laevis (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-27T12:38:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: Naucz się przygotowywać i frakcjonować ekstrakty z jaj Xenopus laevis do rekonstrukcji procesów komórkowych. Ta metoda pozwala uzyskać frakcje cytoplazmatyczne i błonowe do analizy biochemicznej.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Pełny protokół tekstowy dla tej metody eksperymentalnej jest dostępny w <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb1110/current/abstract ]">Current Protocols in Cell Biology</a>.

Autorzy nie zgłaszają żadnych konfliktów interesów.

przygotowanie i frakcjonowanie ekstraktów z jaj xenopus laevis

Preparation and Fractionation of Xenopus laevis Egg Extracts

Surowe i frakcjonowane ekstrakty z jaj *Xenopus* mogą służyć jako źródło składników do rekonstrukcji procesów komórkowych na potrzeby analiz morfologicznych i biochemicznych. Do przygotowania ekstraktu surowego stosuje się lizę jaj oraz wirowanie różnicowe, a następnie wykorzystuje się go do otrzymania ekstraktów frakcjonowanych oraz preparatów lekkich błon.

Surowe i frakcjonowane ekstrakty z jaj Xenopus mogą służyć do pozyskiwania składników niezbędnych do rekonstrukcji procesów komórkowych w celu analizy morfologicznej i biochemicznej. Do przygotowania surowego ekstraktu wykorzystuje się lizę jaj oraz wirowanie różnicowe, który z kolei służy do sporządzenia ekstraktów frakcjonowanych oraz preparatów lekkich błon.

Przygotowanie i frakcjonowanie ekstraktów z jaj Xenopus laevis

Surowe i frakcjonowane ekstrakty z jaj Xenopus mogą służyć jako źródło składników do rekonstytucji procesów komórkowych w celu przeprowadzenia analiz morfologicznych i biochemicznych...

W poprzednim filmie pokazaliśmy, jak pozyskiwać i usuwać otoczkę galaretową z jaj mature XUS labis. Surowe ekstrakty z tych jaj stanowią użyteczne źródło materiału cytoplazmatycznego i organelli do rekonstrukcji zdarzeń komórkowych in vitro, takich jak składanie jądra, import białek jądrowych oraz replikacja DNA. Witajcie, nazywam się Marie Cross i jestem doktorantką w laboratorium dr Maureen Power w Katedrze Biologii Komórki na Uniwersytecie Emory w Atlancie w stanie Georgia.Dzisiaj pokażemy Państwu, jak frakcjonować ekstrakt z jaj na rozpuszczalne frakcje cytoplazmatyczne oraz frakcje lekkich błon. Procedura ta obejmuje następujące etapy: lizę jaj, pobranie surowych ekstraktów, frakcjonowanie surowych ekstraktów z jaj, a następnie pobranie ekstraktu cytoplazmatycznego oraz frakcji lekkich błon z ekstraktu z jaj. Zacznijmy zatem.Zacznijmy od lizy jaj i pobrania ekstraktów nieoczyszczonych przed lizą jaj. Pipetę transferową należy przygotować, łamiąc pipetę Pasteura, a następnie ostrożnie wkładając przełamany koniec do gruszki do pipet. Przenieś jaja do 15 mil polipropylenowej probówki.Aby uniknąć lizy jaj, należy użyć pipety o szerokim wylocie. Następnie wirować jaja przez 30 seku

preparation-and-fractionation-of-xenopus-laevis-egg-extracts

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Jaja Xenopus laevis w stanie nienaruszonym, lizowanym i/lub frakcjonowanym są przydatne w szerokim zakresie eksperymentów. Niniejszy protokół przedstawia sposób indukowania składania jaj, ich zbierania i usuwania otoczki galaretowatej, a także sortowania jaj w celu usunięcia osobników uszkodzonych.

Pozyskiwanie komórek jajowych od samic Xenopus laevis

Montaż otoczki jądrowej jest kluczowym etapem cyklu podziału komórkowego; proces ten można zreplikować in vitro, łącząc chromatynę plemników Xenopus, cytosol oraz lekkie frakcje błonowe. Powstają w pełni uformowane jądra, zawierające otoczki jądrowe z kompleksami porów, a tak zrekonstytuowane jądra są zdolne do przeprowadzania prawidłowych procesów jądrowych.

Montaż jądra in vitro z wykorzystaniem frakcjonowanych ekstraktów z jaj Xenopus

Xenopus embrionalne nabłonki stanowią idealny system modelowy do badania zachowań komórkowych, takich jak rozwój polaryzacji i zmiana kształtu podczas morfogenezy nabłonkowej. Tradycyjna histologia utrwalonych próbek jest coraz częściej uzupełniana przez konfokalne obrazowanie żywych komórek. W niniejszej pracy prezentujemy metody izolacji tkanek żaby oraz wizualizacji żywych komórek nabłonkowych i ich cytoszkieletu z wykorzystaniem konfokalnej mikroskopii żywych komórek.

Obrazowanie żywych komórek i analiza ilościowa embrionalnych komórek nabłonkowych u Xenopus laevis

Niniejszy protokół wideo prezentuje metodę generowania transgenicznych Xenopus laevis poprzez wprowadzanie transgenów do jąder plemników, a następnie transplantację jąder do niezapłodnionych komórek jajowych.

Produkcja transgenicznych Xenopus laevis poprzez integrację za pośrednictwem enzymów restrykcyjnych i transplantację jąder

Xenopus ekstrakt z jaj jest przydatnym systemem modelowym do badania punktu kontrolnego uszkodzeń DNA. Niniejszy protokół dotyczy przygotowania ekstraktów z jaj Xenopus oraz odczynników indukujących punkt kontrolny uszkodzeń DNA. Techniki te można zaadaptować do różnych metod wywołania uszkodzeń DNA w badaniach nad sygnałowaniem punktu kontrolnego uszkodzeń DNA.

Badanie punktu kontrolnego uszkodzeń DNA z wykorzystaniem ekstraktów z jaj Xenopus

Opisujemy zbieranie niezapłodnionych jaj Xenopus tropicalis i produkcję ekstraktu z jaj zatrzymanego przez mejozę II. Ten ekstrakt z jaj może być stosowany do oczyszczania mikrotubul i RNA związanych z mikrotubulami.

Produkcja ekstraktów jajowych Xenopus tropicalis w celu identyfikacji RNA związanych z mikrotubulami

Opisano metodę analizy degradacji białek za pomocą radioaktywnego i lucyferazy-fuzyjnego białka w ekstrakcie z jaj Xenopus oraz jej adaptację do wysokoprzepustowych badań przesiewowych dla małocząsteczkowych modulatorów degradacji białek.

Rekonstytucja degradacji β-kateniny w ekstrakcie z jaj Xenopus

Molekularne mechanizmy dekondensacji wysoce zagęszczonej chromatyny mitotycznej są źle zdefiniowane. Przedstawiamy bezkomórkowy test oparty na mitotycznych klastrach chromatyny wyizolowanych z komórek HeLa i ekstraktu z jaj Xenopus laevis, który wiernie odtwarza proces dekondensacji in vitro.

Test bezkomórkowy do badania dekondensacji chromatyny pod koniec mitozy

Mechanizmy skalowania komórkowego i wewnątrzkomórkowego pozostają nieuchwytne. Stosowanie ekstraktów z zarodków Xenopus staje się coraz bardziej powszechne w celu wyjaśnienia mechanizmów regulacji wielkości organelli. Metoda ta opisuje przygotowanie ekstraktu z zarodka i nowatorski test skalowania jądrowego, za pomocą którego można zidentyfikować mechanizmy regulacji wielkości jądra.

Bezkomórkowy test wykorzystujący ekstrakty z zarodków Xenopus laevis do badania mechanizmów regulacji wielkości jądra

Prezentujemy metodę generowania in vitro samopodtrzymujących się oscylacji mitotycznych na poziomie pojedynczej komórki poprzez kapsułkowanie ekstraktów jajecznych Xenopus laevis w mikroemulsjach typu woda w oleju.

Rekonstrukcja oscylacji cyklu komórkowego w mikroemulsjach bezkomórkowych ekstraktów jajowych Xenopus

Opisujemy metodę przygotowania i obrazowania na żywo nierozcieńczonych ekstraktów cytoplazmatycznych z jaj Xenopus laevis.

Xenopus laevis (Xenopus laevis) Przygotowanie ekstraktu z jaj i metody obrazowania na żywo do wizualizacji dynamicznej organizacji cytoplazmy

Naucz się przygotowywać i frakcjonować ekstrakty z jaj Xenopus laevis do rekonstrukcji procesów komórkowych. Ta metoda pozwala uzyskać frakcje cytoplazmatyczne i błonowe do analizy biochemicznej.

Przygotowanie i frakcjonowanie ekstraktów z jaj Xenopus laevis

Przeglądaj więcej filmów