Name: Węchowe testy behawioralne u dorosłej myszy (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-01-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min
Description: Poznaj metody testowania wrażliwości i preferencji węchowych u dorosłych myszy. Procedury obejmują habituację bez podłoża, ekspozycję na papier filtracyjny z odorantami oraz rejestrację czasu badania.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Finansowanie: Praca ta była wspierana przez stypendium przeddoktoranckie Stuart H.Q. &amp; Victoria Quan (RMW) oraz grant NIH Pioneer Award (RAS)

Ogólne badanie stanu zdrowia
Bardziej szczegółowe omówienie ogólnych badań stanu zdrowia można znaleźć w doskonałym opracowaniu dotyczącym fenotypowania behawioralnego autorstwa Jacqueline Crawley pt. What’s Wrong with my Mouse? 1. W pierwszej kolejności stosujemy zmodyfikowany zestaw testów obserwacyjnych w celu oceny ogólnego stanu zdrowia badanego osobnika. Zestaw ten obejmuje elementy kompleksowego protokołu oceny opracowanego przez Samuela Irwina2, co pozwala na szybką identyfikację osobników nieprzydatnych do dalszych badań. W skrócie, zmodyfikowany zestaw pozwala zidentyfikować zwierzęta z wadami fizycznymi (np. z silną niedowagą lub nadwagą, z zaniedbaną sierścią, z dusznością) lub wykazujące nieprawidłową postawę, lokomocję bądź zachowania. Wszystkie te objawy mogą świadczyć o chorobie. Właściwa będzie każda wstępna ocena, która w podobny sposób pozwala zidentyfikować osobniki niezdrowe.
Należy również zauważyć, że zwierzęta są traktowane humanitarnie zarówno podczas ogólnego badania stanu zdrowia, jak i podczas następnych testów. Nie stosuje się znieczulenia ani leków przeciwbólowych, ponieważ testy te nie obejmują żadnych potencjalnie bolesnych procedur.
Badanie czułości węchu
Ten test został zaprojektowany w celu wykrycia różnic w czułości węchowej pomiędzy dwiema grupami myszy (np. grupą zwierząt typu dzikiego i grupą mutantów). W teście przygotowuje się wiele rozcieńczeń zapachu. Następnie naiwne zwierzę bada pojedyncze rozcieńczenie tego zapachu, a całkowity czas eksploracji (w ciągu 3 minut) zostaje zarejestrowany. Wiele rozcieńczeń zapachu jest testowanych na różnych, naiwnych osobnikach, a całkowity czas eksploracji służy do wygenerowania krzywych zależności dawka-odpowiedź dla każdej grupy myszy. W testowaniu powinny uczestniczyć dwie osoby, z czego jedna nie powinna znać genotypów i/lub stanu badanych osobników.
Główny badacz
<ol>
<li>Przygotuj cztery czyste klatki (8 H x 10 W x 18 L, w calach), wszystkie bez ściółki. Ustaw cztery klatki w komorze z laminarnym przepływem powietrza.</li>
<li>Ustaw przegrody między poszczególnymi arenami, używając nieprzezroczystego papieru filtracyjnego. Umieść czarną płytę z brystolu na ostatniej przegrodzie w taki sposób, aby czarna strona wyścielała bok i dno klatki. Przykryj górę areny przezroczystą płytą z pleksiglasu, aby umożliwić oświetlenie areny. (a) <img src="/files/ftp_upload/old/949_2009_1_14_8/figure1new.png" alt="Równowaga statyczna; pojemnik z wodą; eksperyment fizyczny; bilans sił; analiza stabilności." data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rycina 1">(b)<img src="/files/ftp_upload/old/949_2009_1_14_9/image15.png" alt="Zbiornik do eksperymentu behawioralnego z myszami, badanie wzorców pływania i analiza reakcji stresowej." data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rycina 1.5"> Rycina 1. Konfiguracja areny. (a) Odpowiednio wyłożona, pusta arena (b) Arena z badanym zwierzęciem i zapachowym papierem filtracyjnym. </li>
 
<li>Rozpocznij habituację zwierząt. Umieść pierwsze zwierzę w pierwszej klatce w celu habituacji. Po 15 minutach przenieś pierwsze zwierzę do drugiej klatki. Oczyść pierwszą klatkę preparatem Quatricide TB. Następnie umieść drugie zwierzę w pierwszej, oczyszczonej klatce. Kontynuuj ten proces z kolejnymi zwierzętami. Ostatecznie każde zwierzę powinno przejść habituację we wszystkich trzech klatkach przed umieszczeniem w arenie (czwartej i ostatniej klatce) na kolejne 15 minut habituacji przed testem.</li>
</ol>
Badacz zaślepiony
<ol>
<li>Przygotuj odpowiednią liczbę kwadratów papieru filtracyjnego o wymiarach 2 cal x 2 cale dla próbek zapachowych.</li>
<li>Właściwie rozcieńcz wcześniej wybrany zapach. W przypadku próbek hydrofobowych, takich jak masło orzechowe, jako rozpuszczalnika należy użyć oleju; dla pozostałych próbek należy użyć wody destylowanej. Wymieszaj w wortexie.</li>
<li>Ustaw cyfrowe urządzenie do nagrywania wideo na dalekim końcu komory bezpieczeństwa biologicznego w taki sposób, aby cały koniec klatki znajdował się w polu ostrości. Nagraj film próbny, aby upewnić się, że parametry są odpowiednie.</li>
<li>Zapisz kolejność, w jakiej będą testowane rozcieńczenia, dbając o randomizację kolejności prób.</li>
<li>Zapisz numery lęgu i identyfikacyjne badanych osobników.</li>
<li>Po 15-minutowej habituacji osobnika w arenie, rozpocznij przygotowania do pierwszej próby. Pipetuj pierwsze rozcieńczenie w górę i w dół w probówce stożkowej, a następnie nanieś je na kwadrat papieru filtracyjnego. Powierzchnia papieru filtracyjnego powinna być optymalnie pokryta w ~85% (około 0.50 mls roztworu). Użyj chusteczki Kimwipe, aby upewnić się, że papier filtracyjny nie jest nadmiernie nasycony.</li>
<li>Rozpocznij nagrywanie wideo.</li>
<li>Umieść kwadrat papieru filtracyjnego w klatce po przeciwnej stronie aktualnego położenia zwierzęcia.</li>
<li>Uruchom pomiar czasu.</li>
<li>Po 3 minutach zatrzymaj nagrywanie i usuń rozcieńczony zapach.</li>
<li>Jeśli testowany jest tylko jeden zapach (np. cynamonu), usuń pierwszego badanego osobnika z areny. Powtórz kroki 6-11 dla każdego zwierzęcia, odpowiednio rozcieńczając zapach dla każdego osobnika. Jeśli jednak testowanych jest więcej niż jeden zapach, nie usuwaj badanego osobnika z areny. Zamiast tego rozpocznij pomiar czasu.</li>
<li>Odpowiednio rozcieńcz kolejny zapach, stosując te same metody, które wymieniono powyżej.</li>
<li>Po 1 minucie rozpocznij nagrywanie wideo. Umieść kwadrat papieru filtracyjnego z rozcieńczeniem kolejnego zapachu w klatce po przeciwnej stronie aktualnego położenia zwierzęcia.</li>
<li>Powtórz kroki 6-13 dla każdego zapachu, odnotowując numer pliku wideo dla każdej próby.</li>
<li>Powtórz kroki 6-14 dla każdego osobnika. <img src="/files/ftp_upload/old/949_2009_1_14_10/image2new.png" alt="Wykres słupkowy czułości węchowej porównujący czasy eksploracji dla rozcieńczeń ekstraktu z cynamonu w grupach." data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rysunek 2"> Rysunek 2. Reprezentatywne wyniki sesji testowania czułości węchowej. Każda mysz z grupy kontrolnej (Grupa A) lub grupy eksperymentalnej (Grupa B) była eksponowana na jedno z pięciu różnych rozcieńczeń ekstraktu z cynamonu na papierze filtracyjnym podczas jednej, trzyminuotowej sesji. Oceńiono całkowity czas spędzony na eksploracji papieru filtracyjnego. Myszy w Grupie A wykazują większą czułość węchową niż myszy w Grupie B.</li>
</ol>
Testy preferencji węchowych
Test ten został zaprojektowany w celu zidentyfikowania konkretnych deficytów detekcji, a mianowicie zdolności do wyczuwania zapachów atrakcyjnych lub awersyjnych. Poniższa procedura w znacznym stopniu opiera się na protokole Kobayakawa, K. i wsp.3. Ponownie w badaniu powinny uczestniczyć dwie osoby, z czego jedna powinna nie znać genotypów i/lub stanu badanych osobników. Całkowity czas eksploracji dla różnych zapachów jest ponownie rejestrowany (na podstawie analizy nagrań wideo). Zapachy, dla których całkowity czas eksploracji był dłuższy niż w przypadku wody, określa się jako „atrakcyjne”, natomiast te, dla których czas był krótszy niż dla wody, nazywa się „awersyjnymi”. Badacz analizuje następnie, czy te same zapachy są „atrakcyjne” lub „awersyjne” dla różnych osobników testowych.
Prosimy o wykonanie kroków 1-3 w sekcji Testowania Czułości Węchowej dla głównego badacza.
Zasłonięty badacz
Procedura testowania preferencji węchowych jest taka sama, z niewielkimi modyfikacjami kroków 2 i 4. Należy postępować zgodnie z krokami 1-15 w sekcji Testowania Wrażliwości Węchowej dla badacza prowadzącego próbę ślepą, z następującymi zmianami: w kroku 2, korzystając z wcześniej wybranych zapachów (kombinacji zapachów atrakcyjnych i awersyjnych), należy przygotować w probówkach stożkowych odpowiednio rozcieńczone roztwory każdego z nich. W przypadku próbek hydrofobowych, takich jak masło orzechowe, należy użyć oleju jako rozpuszczalnika; dla wszystkich pozostałych należy użyć wody destylowanej. Wymieszać w wirówce Vortex. W kroku 4, zamiast zapisywać rozcieńczenie do przetestowania, należy zapisać kolejność badanych różnych zapachów, randomizując kolejność prób.
Test ten został zaprojektowany w celu zidentyfikowania konkretnych deficytów detekcji, a mianowicie zdolności do wyczuwania zapachów atrakcyjnych lub awersyjnych. Poniższa procedura w znacznej mierze opiera się na protokole Kobayakawa, K. et al.3. Ponownie w testach powinni uczestniczyć dwaj badacze, z czego jeden nie powinien znać genotypów i/lub stanu badanych osobników. Całkowity czas eksploracji jest ponownie rejestrowany (na podstawie analizy nagrania wideo) dla różnych zapachów. Zapachy, w przypadku których całkowity czas eksploracji jest dłuższy niż dla wody, określa się jako „atrakcyjne”, natomiast te z czasem krótszym niż dla wody nazywa się „awersyjnymi”. Następnie badacz analizuje, czy te same zapachy są „atrakcyjne” lub „awersyjne” dla różnych osobników testowych.
Prosimy o wykonanie kroków 1-3 w sekcji badania wrażliwości węchowej dla głównego badacza.
Badacz zaślepiony
Procedura testowania preferencji węchowych jest taka sama, z niewielkimi modyfikacjami kroków 2, 4 i 13. Należy postępować zgodnie z krokami 1-15 w sekcji Testowania Wrażliwości Węchowej dla badacza prowadzącego próbę ślepą, z następującymi zmianami: w kroku 2, używając wcześniej wybranych zapachów (kombinacji zapachów atrakcyjnych i awersyjnych), przygotować w probówkach stożkowych odpowiednio rozcieńczone roztwory każdego z nich. W przypadku próbek hydrofobowych, takich jak masło orzechowe, jako rozpuszczalnik należy użyć oleju; dla wszystkich pozostałych należy użyć wody destylowanej. Wymieszać w wstrząsarku typu vortex. W kroku 4, zamiast zapisywać rozcieńczenie do przetestowania, należy zapisać kolejność różnych zapachów, które zostaną przebadane, randomizując tę kolejność w każdej próbie. W kroku 13 kwadrat papieru filtracyjnego z kolejnym zapachem należy umieścić w klatce po przeciwnej stronie względem obecnej pozycji zwierzęcia.
<img src="/files/ftp_upload/old/949_2009_1_14_11/image3new.png" alt="Wykres testu preferencji węchowych porównujący czas eksploracji dla zapachów: kwasu 2-metylomasłowego, wanilii, masła orzechowego." data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rycina 3">
Rycina 3. Reprezentatywne wyniki jednej sesji testu preferencji zapachowych. Każda mysz była wystawiona na działanie poszczególnych zapachów naniesionych na papier filtracyjny podczas jednej, trzyminuotowej sesji. Oceńiono całkowity czas spędzony na badaniu papieru filtracyjnego. Masło orzechowe i wanilia są zapachami atrakcyjnymi (czas badaniazapach &gt; czas badaniawoda), natomiast kwas 2-metylobutyrylowy jest zapachem awersyjnym (czas badaniazapach &lt; czas badaniawoda).
Punktacja testów węchowych
Po zarejestrowaniu wszystkich filmów dotyczących wrażliwości węchowej i preferencji, należy przeanalizować całkowity czas spędzony na eksploracji każdego rozcieńczenia/zapachu. Wszystkie filmy powinny zostać przeanalizowane przez badacza pracującego w ślepej próbie w celu zapewnienia spójności.
<ol>
<li>Przejrzyj nagranie wideo, zwracając uwagę na następujące momenty: a) umieszczenia papieru filtracyjnego w arenie, b) zbliżenia się myszy do papieru filtracyjnego, c) rozpoczęcia badania papieru filtracyjnego przez mysz oraz d) upływu trzech minut (od momentu umieszczenia papieru filtracyjnego w arenie). Wiedza o tym, kiedy skupić się na zachowaniu myszy, ułatwia dokładne określenie całkowitego czasu spędzonego na eksploracji podczas analizy.</li>
<li>Przejrzyj nagranie wideo. Odnotuj czas, w którym mysz po raz pierwszy zbadała papier filtracyjny (latencja).</li>
<li>Za pomocą stopera zmierz wszystkie okresy badania papieru w ciągu trzech minut od jego umieszczenia w arenie. Czas badania definiuje się jako każdy moment, w którym nozdrza myszy znajdują się w odległości &lt; 1 mm od papieru filtracyjnego. Ważne jest, aby nie wliczać czasu, w którym mysz znajduje się w bliskim sąsiedztwie papieru filtracyjnego, ale nie bada go aktywnie. W całkowitym czasie eksploracji nie należy uwzględniać epizodów gryzienia i lizania papieru ani epizodów siedzenia na papierze. Niezbędne jest ścisłe i konsekwentne przestrzeganie tych zasad, aby rzetelnie przeanalizować zachowanie węchowe.</li>
<li>Zapisz czas latencji, całkowity czas spędzony na badaniu papieru filtracyjnego oraz numer pliku wideo.</li>
</ol>

<ol><li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What%26rsquo%3Bs+Wrong+with+my+Mouse%3F+Behavioral+Phenotyping+of+Transgenic+and+Knockout+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">What&rsquo;s Wrong with my Mouse? Behavioral Phenotyping of Transgenic and Knockout Mice.</a> , John Wiley and Sons. 42-60 (2007).</li>
<li>Irwin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+observational+assessment%3A+Ia.+A+systematic%2C+quantitative+procedure+for+assessing+the+behavioral+and+physiologic+state+of+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacologia%22%5BJournal%5D)">Comprehensive observational assessment: Ia. A systematic, quantitative procedure for assessing the behavioral and physiologic state of the mouse.</a> Psychopharmacologia. 13, 222-257 (1968).</li>
<li>Kobayakawa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+versus+learned+odour+processing+in+the+mouse+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Innate versus learned odour processing in the mouse olfactory bulb.</a> Nature. 450, 503-508 (2007).</li>
</ol>

Wymienione testy pozwalają na szybką i wiarygodną ocenę podstawowej funkcji węchowej. Należy jednak pamiętać, że wiarygodność ta wymaga właściwego doboru i przygotowania osobników do badań. Zwierzęta chore lub w inny sposób upośledzone często wykazują niespójne wyniki. Kluczowe jest również habituowanie badanych osobników. Stwierdzono, że wykorzystanie wielu klatek podczas procesu habituacji pozwala zwierzętom oswoić się z obsługą przez eksperymentatora oraz zmianą otoczenia. Zauważono również, że czas krótszy niż wskaza...

<table><tbody><tr><td>Kwas 2-metylomasłowy</td><td>Odczynnik</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W269506</td><td>&lt;b&gt;Stosowane stężenia:&lt;/b&gt;9,16 x 10&lt;sup&gt;-1&lt;/sup&gt; &amp;#8211; 10&lt;sup&gt;-8&lt;/sup&gt; M (w H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;0)</td></tr><tr><td>Naturalny ekstrakt z wanilii</td><td>Odczynnik</td><td>McCormick &amp;amp; Co.</td><td>n/d</td><td>&lt;b&gt;Stosowane stężenia:&lt;/b&gt;rozcieńczenie 10&lt;sup&gt;-1&lt;/sup&gt; &amp;#8211; 10&lt;sup&gt;-5&lt;/sup&gt; (w H20)</td></tr><tr><td>Masło orzechowe (Skippy, Extra Crunchy)</td><td>Odczynnik</td><td>Unilever</td><td>n/d</td><td>&lt;b&gt;Stosowane stężenia:&lt;/b&gt;10% (w/v), w oleju mineralnym</td></tr><tr><td>Ekstrakt z cynamonu</td><td>Odczynnik</td><td>McCormick &amp;amp; Co.</td><td>n/d</td><td>&lt;b&gt;Stosowane stężenia:&lt;/b&gt;rozcieńczenie 10&lt;sup&gt;-1&lt;/sup&gt; &amp;#8211; 10&lt;sup&gt;-5&lt;/sup&gt; (w H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;0)</td></tr><tr><td>Olej mineralny, lekki</td><td>Odczynnik</td><td>Fisher Scientific</td><td>O121-1</td><td>&lt;b&gt;Stosowane stężenia:&lt;/b&gt;n/d</td></tr></tbody></table>

badanie zachowań węchowych u dorosłych myszy

Olfactory Behavioral Testing in the Adult Mouse

Gryzoniowy system węchowy budzi coraz większe zainteresowanie naukowców i jest badany m.in. w ramach biologii systemowej ze względu na swoje stereotypowe, a jednocześnie przystępne obwody neuronalne. Ponadto wyjątkowa zdolność tego obszaru do generowania nowych neuronów przez całe życie organizmu sprawia, że jest on atrakcyjnym systemem zarówno dla biologów rozwoju, jak i regeneracyjnych. Takie zainteresowanie stwarza potrzebę znalezienia sposobu na szybką, a zarazem wiarygodną ocenę funkcji węchowych. Wiele testów zdolności węchowych jest złożonych, zmiennych lub nie została zaprojektowana specjalnie dla myszy. Ponadto niektóre testy są wrażliwe nie tylko na wady zdolności węchowych, ale również na deficyty pamięci, co utrudnia interpretację uzyskanych wyników.
W niniejszej pracy opisujemy prosty zestaw testów zaprojektowany w celu zidentyfikowania deficytów w czułości i preferencjach węchowych. Po pierwsze, wstępna ocena ogólnego stanu zdrowia pozwala na wyłonienie zwierząt odpowiednich do dalszych badań. Po drugie, myszy są poddawane działaniu różnych rozcieńczeń zapachów, aby ustalić, czy występuje różnica w progu detekcji. Po trzecie, myszom prezentuje się różne zapachy, zarówno atrakcyjne, jak i awersyjne, co pozwala na ocenę preferencji węchowych. Te proste badania powinny sprawić, że wstępna charakterystyka zachowań węchowych stanie się dostępna dla laboratoriów o różnym stopniu wyposażenia i doświadczenia.

Fundamentalne, a zarazem unikalne właściwości układu węchowego gryzoni sprawiły, że staje się on coraz częściej przedmiotem badań biologów. Istnieje zatem potrzeba opracowania stosunkowo prostego sposobu oceny jego funkcji. W niniejszej pracy opisujemy czułe testy służące do charakterystyki wrażliwości i preferencji węchowych myszy.

Badanie zachowań węchowych u dorosłych myszy

System węchowy gryzoni budzi coraz większe zainteresowanie naukowców i jest badany, częściowo w ramach biologii systemowej, ze względu na jego stereotypową, a jednocześnie dostępną...

Układ węchowy gryzoni lub zmysł węchu stały się coraz popularniejszym obszarem badań. W celu przetestowania wrażliwości węchowej mysz poddaje się habituacji w klatce bez ściółki, a następnie wystawia na kawałki papieru filtracyjnego zawierające zwiększające się stężenia substancji zapachowej. Następnie rejestrowany jest czas, jaki mysz poświęca na badanie papieru filtracyjnego.Test preferencji węchowych przeprowadza się w dokładnie taki sam sposób. Jednak zamiast zwiększać stężenia substancji zapachowych, odnotowuje się czas, jaki mysz spędza na badaniu różnych zapachów. Witam, nazywam się Rochelle Witt i pochodzę z laboratorium dr Rosalyn Siegel z Katedry Neurobiologii na Harvard Medical School.Witam, nazywam się Jennifer Deno i również pracuję w laboratorium Siegel. Dzisiaj zaprezentujemy dwie procedury testowania węchu. Stosujemy te metody w naszym laboratorium do badania wrażliwości oraz preferencji węchowych.Zacznijmy zatem. Aby rozpocząć procedurę badania wrażliwości węchowej, należy przygotować cztery czyste klatki, w których nie ma ściółki. Klatki powinny mieć wymiary 8 cali wysokości, 10 cali szerokości i 18 cali długości.Ustaw cztery klatki w komorze z laminarnym przepływem powietrza. Następnie oddziel poszczególne areny za pomocą nieprzezroczystego papieru filtrowanego. Na koniec umieść czarny brystol na ostatniej przegrodzie w taki sposób, aby wyścielał on bok i dno klatki.Oświetl arenę, przykrywając górną część klatki przezroczystym kawałkiem pleksiglasu. Następnie rozpocznij habituację badanych osobników. Umieść pierwszy osobnik w pierwszej klatce.Po 15 minutach przenieś pierwszą osobnik do drugiej klatki. Oczyść pierwszą klatkę za pomocą Quatra side tb. Następnie umieść drugi osobnik w pierwszej, oczyszczonej klatce.Kontynuuj ten proces z kolejnymi osobnikami przed rozpoczęciem testowania. Umieść jednego z osobników w czwartej klatce i poddaj go habituacji przez kolejne 15 minut. W rezultacie w każdej z trzech pierwszych klatek powinien znaleźć się zhabituowany osobnik.Jesteśmy teraz gotowi do przygotowania próbek zapachowych. Próbki zapachowe powinny zostać przygotowane przez innego badacza, który nie zna tożsamości osobników, ich genotypów i/lub zastosowanych warunków. Rozpocznij przygotowanie próbek od wycięcia odpowiedniej liczby kwadratów z papieru filtracyjnego o wymiarach dwóch na dwie cale.Następnie w probówkach stożkowych przygotuj odpowiednie rozcieńczenia wcześniej wybranego zapachu. Należy pamiętać, że różne tła genetyczne myszy mogą wymagać odmiennego rozcieńczenia zapachu w celu skutecznego rozróżnienia grupy kontrolnej i eksperymentalnej. W związku z tą obserwacją zalecamy empiryczne ustalenie odpowiednich rozcieńczeń zapachu na osobnikach podobnych do grupy kontrolnej przed przystąpieniem do testów eksperymentalnych z myszami naiwnymi. W przypadku próbek hydrofobowych, takich jak masło orzechowe, jako rozpuszczalnik należy zastosować olej; dla wszystkich pozostałych próbek użyj odpowiedniego rozpuszczalnika.Użyj wirówki do wody destylowanej, aby upewnić się, że rozcieńczenia zostały odpowiednio wymieszane. Następnie ustaw urządzenie do cyfrowego zapisu wideo na dalnym końcu dygestorium w taki sposób, aby cały koniec klatki znajdował się w polu ostrości. Nagraj film próbny, aby upewnić się, że ustawienia kamery są odpowiednie.W dzienniku laboratoryjnym zapisz kolejność, w jakiej będą testowane rozcieńczenia, dbając o to, aby kolejność ta w każdej próbie była randomizowana. Zapisz również numer miotu oraz numer identyfikacyjny osobnika. Gdy osobnik będzie już habituowany w arenie przez 15 minut, rozpocznij przygotowania do pierwszej próby.Przenieś pierwszą rozcieńczenie do probówki stożkowej, kilkakrotnie aspirując i dyspensując ciecz, a następnie nanieś ją na kwadrat z papieru filtracyjnego. Powierzchnia papieru powinna być pokryta w około 85%. Użyj chusteczki typu Kim wipe, aby upewnić się, że papier filtracyjny nie jest nadmiernie nasycony.Po przygotowaniu zapachowego papieru filtracyjnego możemy przystąpić do pierwszego testu wrażliwości węchowej. Aby rozpocząć test, należy uruchomić nagrywanie wideo. Następnie umieść zapachowy papier filtracyjny w klatce po przeciwnej stronie względem aktualnego położenia zwierzęcia.Uruchom pomiar czasu. Po trzech minutach zatrzymaj nagrywanie i usuń zapach. Następnie ponownie uruchom stoper i przygotuj drugą próbkę zapachu.Po jednej minucie rozpocznij nagrywanie wideo. Podobnie jak wcześniej, umieść próbkę zapachową w klatce po przeciwnej stronie niż aktualne położenie zwierzęcia. Powtórz tę procedurę dla każdego rozcieńczenia zapachu i dla każdego osobnika, pamiętając o zapisaniu numeru pliku wideo dla każdej próby.Po zaprezentowaniu testu wrażliwości węchowej, należy przejść do testu preferencji węchowych. W przypadku testu preferencji węchowych należy postępować zgodnie z procedurą opisaną dla testu wrażliwości węchowej, z wyjątkiem dwóch niewielkich modyfikacji. Po pierwsze.Zamiast przygotowywać wiele rozcieńczeń jednego, wcześniej wybranego zapachu, należy przygotować zarówno zapach atrakcyjny, jak i awersyjny. Po drugie, zamiast odnotowywać rozcieńczenie do przetestowania, należy zapisać kolejność testowanych wariantów, randomizując ją w każdej próbie. Wszystkie pozostałe kroki procedury są identyczne jak w przypadku testów węchowych, w tym habituacja badanych osobników, udział badacza pracującego w ślepej próbie, aplikacja zapachu na papier filtracyjny oraz czasowy zapis wideo każdej próby.Po zakończeniu testów preferencji węchowych należy przystąpić do oceny wyników. Po zgromadzeniu wszystkich nagrań wideo z testów wrażliwości i preferencji węchowych, zmierz całkowity czas, jaki badany poświęcił na eksplorację każdego rozcieńczenia lub zapachu, aby zapewnić spójność danych. Do przeprowadzenia tej analizy należy wyznaczyć badacza pracującego w ślepym teście, który przeanalizuje nagrania wideo.Wskazane jest, aby najpierw obejrzeć wstępnie wideo i odnotować następujące momenty: kiedy papier filtracyjny zostaje umieszczony w arenie, kiedy mysz zbliża się do papieru filtracyjnego, kiedy mysz bada papier filtracyjny oraz kiedy upłyną trzy minuty od momentu początkowego umieszczenia papieru filtracyjnego w arenie. Wiedza o tym, kiedy skupić się na zachowaniu myszy, ułatwia dokładną ocenę całkowitego czasu poświęconego na eksplorację podczas późniejszej analizy. Teraz obejrzyj całe nagranie. Użyj stopera, aby zmierzyć czas wszystkich prób badania w ciągu trzech minut od umieszczenia papieru filtracyjnego w arenie.Czas badania definiuje się jako dowolny przedział czasowy, w którym nos myszy znajduje się w odległości mniejszej niż jeden milimetr od papieru filtracyjnego; ważne jest, aby nie uwzględniać czasu, w którym mysz znajduje się w bliskim sąsiedztwie papieru filtracyjnego, ale nie bada go aktywnie. W całkowitym czasie eksploracji nie należy uwzględniać epizodów gryzienia i lizania papieru, a także epizodów siedzenia na papierze. Należy ściśle i konsekwentnie przestrzegać tych zasad, aby dokładnie przeanalizować zachowania węchowe.Po przejrzeniu nagrania wideo i odnotowaniu całkowitego czasu spędzonego na badaniu papieru filtracyjnego, powtórz analizę dla wszystkich filmów. Poniżej przedstawiono reprezentatywne wyniki testów węchowych. Pierwszy wykres pokazuje wyniki sesji treningu wrażliwości węchowej.Każda mysz z grupy eksperymentalnej B lub grupy kontrolnej A była eksponowana na jedno z pięciu różnych rozcieńczeń ekstraktu z cynamonu na papierze filtracyjnym podczas jednej trzyminuotowej sesji. Oceniono całkowity czas spędzony na eksploracji papieru filtracyjnego, a wykres ten przedstawia wyniki sesji testu preferencji węchowych. Każda mysz była eksponowana na każdy z różnych zapachów na papierze filtracyjnym podczas jednej trzyminuotowej sesji.Oceniono całkowity czas spędzony na eksploracji papieru filtracyjnego. Właśnie pokazaliśmy, jak testować zdolności węchowe u dorosłych myszy; przy stosowaniu tych procedur ważne jest użycie myszy naiwnych, aby precyzyjnie badać zdolności węchowe, a nie inne funkcje, takie jak uczenie się i pamięć. To wszystko.Dziękujemy za oglądanie i życzymy powodzenia w przeprowadzaniu eksperymentów.

olfactory-behavioral-testing-in-the-adult-mouse

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Testy behawioralne dotyczące węchu u dorosłych myszy

Upośledzenie funkcji węchu jest powszechną cechą wielu zaburzeń neurodegeneracyjnych, w tym chorób Parkinsona, Alzheimera i Huntingtona. W niniejszym artykule opisujemy zestaw testów do oceny dyskryminacji i wykrywania węchu u myszy, które można wykorzystać do pomiaru zdolności węchowych w mysich modelach chorób neurodegeneracyjnych.

Testy węchowe dla mysich modeli choroby neurodegeneracyjnej

Ten manuskrypt opisuje protokół badania układu węchowego gryzoni. Test przyzwyczajenia/dezhabituacji węchowej pozwoli badaczom określić, czy mysz przyzwyczaja się do wielokrotnie prezentowanego zapachu i czy mysz wykazuje nieprzyzwyczajenie, gdy przedstawia się jej nowy zapach.

Badanie dyskryminacji i habituacji zapachowej u myszy

Przedstawiamy prosty i bezstronny test węchowy na myszach. Dzięki temu protokołowi dyskryminacja węchowa, preferencje, unikanie i wrażliwość na nowy zapach w porównaniu z wodą mogą być oceniane w pojedynczych sesjach behawioralnych. Ta metoda jest wskazana dla pojedynczego eksperymentatora, a analiza opiera się na komputerowym przetwarzaniu wideo.

Proste i wspomagane komputerowo testy węchowe dla myszy

Tutaj szkolimy myszy w zadaniu uczenia asocjacyjnego, aby przetestować rozróżnianie zapachów. Protokół ten pozwala również na badania nad zmianami strukturalnymi w mózgu wywołanymi uczeniem się.

Obiektywny i powtarzalny test uczenia się węchu i dyskryminacji u myszy

Ten artykuł zawiera szczegółowy opis nowego protokołu błędu oceny myszy. Przedstawiono również dowody na wrażliwość tego zadania węchowego na stan afektywny i omówiono jego użyteczność w różnych dziedzinach badawczych.

Ocena błędu oceny myszy za pomocą zadania kopania węchowego

Ten artykuł zawiera szczegółowy opis testu zakopanego jedzenia i eksperymentu z dyskryminacją zapachów społecznych, aby ocenić wpływ narażenia na wdychane zanieczyszczenia środowiska na funkcje węchowe u myszy.

Badanie wpływu wdychanych zanieczyszczeń środowiska na funkcje węchowe u myszy

Protokół ten opisuje konstrukcję olfaktometru do eksperymentów z zachowaniami węchowymi go/no-go. Instrukcje krok po kroku wraz ze zdjęciami są dostarczane, aby zapewnić pomyślną konstrukcję olfaktometru. Dołączone są również informacje dotyczące rozwiązywania problemów napotkanych podczas procesu.

Konstruowanie olfaktometru do badań zachowań węchowych gryzoni

W tym miejscu przedstawiamy protokół testu preferencji węchowych, który pozwala na ocenę negatywnych uprzedzeń węchowych zarówno wobec apetytywnych, jak i awersyjnych bodźców zapachowych w mysich modelach depresji.

Test preferencji węchowych do pomiaru węchowych uprzedzeń hedonicznych w mysich modelach depresji

Testowanie wrażliwości wizualnej u jaszczurek przy operant paradygmat klimatyzacji, która zatrudnia odtwarzania wideo losowych punktów, kinematograms i generowanych komputerowo bezkręgowców.

Badania wizualne Wrażliwość na prędkość i kierunek ruchu w Jaszczurki

Badanie złożonych zachowań lokomocyjnych u Drosophila melanogaster zależy od możliwości ilościowego określenia zmian w ruchu danej muchy. Niniejszy artykuł demonstruje, jak przeprowadzić ten proces przy użyciu wysokorozdzielczego systemu śledzenia.

Wysokorozdzielcze śledzenie wideo lokomocji u dorosłych osobników Drosophila melanogaster

Poznaj metody testowania wrażliwości i preferencji węchowych u dorosłych myszy. Procedury obejmują habituację bez podłoża, ekspozycję na papier filtracyjny z odorantami oraz rejestrację czasu badania.

Badanie zachowań węchowych u dorosłych myszy

Przeglądaj więcej filmów