Name: protein interaction capture methods in cells
Uploaded: 2023-04-30T06:31:42.000Z
Duration: 8 min 8 s
Channel: JoVE

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High School

Physical Science

HS. Chemical Reactions

HS-PS1-5.

co-immunoprecipitation-and-pull-down-assays

Co-Immunoprecipitation and Pull-Down Assays

Os ensaios de co-imunoprecipitação (CoIP) e pull-down são métodos intimamente relacionados para identificar interações proteína-proteína estáveis. Esses métodos estão relacionados à imunoprecipitação, um método para separar uma proteína alvo ligada a um anticorpo de proteínas não ligadas. No CoIP, uma proteína ligada a anticorpos está ligada a outra proteína que não se liga ao anticorpo, isso é seguido por um processo de separação que preserva o complexo proteína-proteína. A diferença nos ensaios puxados para baixo é que as proteínas de isca marcadas por afinidade substituem anticorpos, e a cromatografia de afinidade é usada para isolar complexos proteína-proteína.
Este vídeo explica coip, ensaios pull-down, e sua implementação em laboratório. Um protocolo passo-a-passo para cada técnica é coberto, incluindo os reagentes, aparelhos e instrumentos usados para purificar e analisar proteínas ligadas. Além disso, a seção de aplicações deste vídeo descreve um procedimento para estudar como as proteínas do micovírus inibem a nucleoproteína da gripe, uma investigação sobre o papel dos íons de cálcio na calmodulina através de um ensaio de puxar para baixo, e um ensaio de puxar para baixo modificado para caracterizar interações proteicas transitórias.

ensaios de co-imunoprecipitação e pull-down

Os ensaios de co-imunoprecipitação (CoIP) e pull-down são métodos intimamente relacionados para identificar interações proteína-proteína estáveis. Esses métodos estão relacionados à imunoprecipitação, um método para separar uma proteína alvo ligada a um anticorpo de proteínas não ligadas. No CoIP, uma proteína ligada a anticorpos está ligada a outra proteína que não se liga ao anticorpo, isso é seguido por um processo de separação que preserva o complexo proteína-proteína. A diferença nos ensaios puxados para baixo é que as proteínas de isca marcadas por afinidade substituem anticorpos, e a cromatografia de afinidade é usada para isolar complexos proteína-proteína.
Este vídeo explica coip, ensaios pull-down, e sua implementação em laboratório. Um protocolo passo-a-passo para cada técnica é coberto, incluindo os reagentes, aparelhos e instrumentos usados para purificar e analisar proteínas ligadas. Além disso, a seção de aplicações deste vídeo descreve um procedimento para estudar como as proteínas do micovírus inibem a nucleoproteína da gripe, uma investigação sobre o papel dos íons de cálcio na calmodulina através de um ensaio de puxar para baixo, e um ensaio de puxar para baixo modificado para caracterizar interações proteicas transitórias.
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As interações proteína-proteína desempenham um papel significativo em uma grande variedade de funções biológicas. A maioria das interações proteína-proteína e seus efeitos biológicos ainda não foram identificados. A co-imunoprecipitação, ou CoIP, e ensaios puxados para baixo são dois métodos intimamente relacionados para a identificação de interações proteína-proteína estáveis. Este vídeo abordará os princípios dos dois ensaios, seus procedimentos laboratoriais gerais e aplicações dessas técnicas.
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<div class="chapter_text" id="script_1">
Os ensaios coIP e pull-down são variantes da imunoprecipitação, um método para isolar seletivamente uma espécie proteica de uma solução complexa. Em um experimento de imunoprecipitação, um anticorpo específico para uma proteína alvo é permitido formar um complexo imunológico com esse alvo na amostra. O complexo é então capturado em um suporte sólido, tipicamente proteína A ligada a uma conta de sepharose. Quaisquer proteínas não capturadas são removidas por etapas de centrifugação. A proteína é então liberada do anticorpo e suporte sólido, fervendo na redução do buffer de carga amostral SDS-PAGE.
A co-imunoprecipitação é conduzida da mesma forma, exceto que complexos proteicos intactos são capturados no suporte sólido. O anticorpo se liga à proteína alvo, que, por sua vez, está ligada a outra proteína que não é alvo do anticorpo. Como na imunoprecipitação, o complexo proteico é liberado do anticorpo e suporte sólido, fervendo na redução do buffer de carga de amostras SDS-PAGE.
Os ensaios de recuo são semelhantes à co-imunoprecipitação, diferindo apenas no uso de uma proteína "isca", em oposição a um anticorpo. Através de técnicas de biologia molecular, essa proteína de isca é projetada com uma etiqueta de afinidade, como uma série de resíduos de histidina. Essas etiquetas de afinidade são descritas em "Separações biomoléculas baseadas em cromatografia". A proteína é então capturada em um ligante de afinidade imobilizado específico para a tag. A proteína capturada é então incubada com uma amostra que contém proteínas que formam complexos com a "isca". O complexo proteico é liberado do suporte de afinidade por meio da lavagem com uma solução contendo um analito competitivo específico para a tag na proteína "isca". Ensaios puxados para baixo são úteis para confirmar interações proteicas previstas pela co-imunoprecipitação, e para descobrir interações proteicas desconhecidas.
Agora que os princípios da co-imunoprecipitação e dos ensaios de retirada foram discutidos, vamos olhar para seus procedimentos laboratoriais.
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Primeiro vamos discutir a co-imunoprecipitação. Para uma série de tubos de microfuge, acrescenta-se: tampão PBS, e uma solução de 50% de proteína A-sepharose, um complexo de proteína de resina que se liga ao anticorpo. Os tubos de microfuge são girados para garantir a distribuição adequada e, em seguida, a resina é lavada com tampão PBS adicional. O linsato celular, contendo a proteína desejada, e 2 μg de anticorpo são adicionados aos tubos de microfuça, e a mistura é girada por 1h a 4 °C. As contas são pelotas por centrifugação, o sobrenante é descartado, e as contas relavadas três vezes com tampão para remover proteínas não ligadas. As contas que contêm o complexo anticorpo-proteína estão na redução do buffer de carga amostral SDS-PAGE, para remoção do complexo do anticorpo e para análise por SDS-PAGE e imunoblotting.
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Agora discutiremos o procedimento para ensaios de retirada: A proteína "isca" é expressa em um plasmídeo com a etiqueta de afinidade apropriada. Depois de atingir o crescimento da fase de registro, as células são diluidas e, em seguida, centrifadas. As contas de streptavidin-sepharose suspensas, que capturam proteína "isca" marcada por biotina, são insustadas em um tubo de microfuge. As contas são então centrifadas e o supernatante cuidadosamente removido por aspiração. As contas são então lavadas com tampão, centrifugadas e removidas pelo supernatante.
As células que contêm a proteína putativa "presa", que tem afinidade com a proteína "isca", são colhidas por centrifugação. O supernascer é então adicionado ao tubo de microfuge contendo a resina, e incubado a 4 °C por 3 h em um shaker. A resina é então centrifugada, o supernacido removido, e a resina lavada para remover proteínas não ligadas. O tampão de elução é adicionado à resina, e a mistura é incubada à temperatura ambiente por 30 minutos em um shaker. A resina é então centrifugada, e o supernatante contendo o complexo desejado é analisado por imunoblotação.
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Agora que revisamos os procedimentos, vamos ver algumas das aplicações úteis de co-imunoprecipitação e ensaios puxados para baixo.
A co-imunoprecipitação pode ser útil na melhor compreensão do mecanismo de ação das enzimas. As proteínas de resistência myxovirus- ou Mx-, inibem uma ampla gama de vírus, incluindo a influenza A, para a qual o mecanismo é mal compreendido. A co-imunoprecipitação foi utilizada para estudar a interação entre a proteína Mx1 do camundongo e a nucleoproteína da gripe.
Os ensaios puxados para baixo têm se mostrado úteis no estudo dos efeitos dos segundos mensageiros, que são proteínas que comunicam um sinal do ambiente celular. Eles são um componente de uma via de sinalização onde múltiplas proteínas interagem em resposta a pistas ambientais. Os íons de cálcio atuam como mensageiros secundários, vinculando-se à calmodulina, que, por sua vez, se liga a uma grande variedade de proteínas, mediando muitos tipos de respostas biológicas. Sem o cálcio, a proteína não pode se ligar à calmodulina. Um ensaio puxado para baixo foi realizado para testar a capacidade das proteínas de se ligarem à calmodulina na presença ou ausência de íons de cálcio.
Ensaios de co-imunoprecipitação e pull-down são geralmente usados para analisar interações proteicas estáveis ou fortes, mas não transitórias. Um desenvolvimento recente em ensaios puxados para baixo, o HaloTag, simplificou o estudo de interações proteicas transitórias; HaloTag é uma etiqueta de fusão de proteínas geneticamente codificada, fundida à proteína de interesse, capaz de reagir quimicamente com um suporte sólido haloalkane. Se a análise funcional for desejada, o complexo proteico, menos a tag, em sua totalidade poderia então ser isolado incubando com protease do vírus da etch do tabaco.
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Você acabou de assistir o vídeo de JoVE sobre co-imunoprecipitação e ensaios puxados para baixo. Este vídeo descreveu os princípios dos dois métodos, os procedimentos laboratoriais gerais e algumas de suas aplicações.
Obrigado por assistir!
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Ensaios de Co-Imunoprecipitação e Pull-Down

Co-immunoprecipitation (CoIP) and pull-down assays are closely related methods to identify stable protein-protein interactions. These methods are related ...

As interações proteína-proteína desempenham um papel significativo em uma ampla variedade de funções biológicas. A maioria das interações proteína-proteína e seus efeitos biológicos ainda não foram identificados. A co-imunoprecipitação, ou CoIP, e os ensaios pull-down são dois métodos intimamente relacionados para a identificação de interações proteína-proteína estáveis. Este vídeo abordará os princípios dos dois ensaios, seus procedimentos laboratoriais gerais e aplicações dessas técnicas. CoIP e ensaios pull-down são variantes de imunoprecipitação, um método para isolar seletivamente uma espécie de proteína de uma solução complexa. Em um experimento de imunoprecipitação, um anticorpo específico para uma proteína-alvo pode formar um complexo imune com esse alvo na amostra. O complexo é então capturado em um suporte sólido, normalmente a proteína A ligada a um grânulo de sepharose. Quaisquer proteínas não capturadas são removidas por etapas de centrifugação. A proteína é então liberada do anticorpo e do suporte sólido por ebulição no tampão redutor de carregamento de amostras SDS-PAGE. A co-imunoprecipitação é conduzida da mesma maneira, exceto que complexos proteicos intactos são capturados no suporte sólido. O anticorpo se liga à proteína alvo, que, por sua vez, está ligada a outra proteína que não é alvo do anticorpo. Como na imunoprecipitação, o complexo proteico é liberado do anticorpo e do suporte sólido por ebulição na redução do tampão de carregamento de amostras SDS-PAGE. Os ensaios pull-down são semelhantes à co-imunoprecipitação, diferindo apenas no uso de uma proteína "isca", em oposição a um anticorpo. Por meio de técnicas de biologia molecular, essa proteína de isca é projetada com uma etiqueta de afinidade, como uma série de resíduos de histidina. Essas tags de afinidade são descritas em "Separações de biomoléculas baseadas em cromatografia". A proteína é então capturada em um ligante de afinidade imobilizado específico para a marca. A proteína capturada é então incubada com uma amostra que contém proteínas que formam complexos com a "isca". O complexo proteico é liberado do suporte de afinidade por lavagem com uma solução contendo um analito competitivo específico para a etiqueta na proteína "isca". Os ensaios pull-down são úteis para confirmar as interações proteicas previstas pela co-imunoprecipitação e para descobrir interações proteicas desconhecidas. Agora que os princípios de co-imunoprecipitação e ensaios pull-down foram discutidos, vejamos seus procedimentos laboratoriais. Primeiro, vamos discutir a co-imunoprecipitação. A uma série de tubos de microcentrífugas, adiciona-se o seguinte: tampão PBS e uma solução a 50% de proteína A-sepharose, um complexo resina-proteína que se liga ao anticorpo. Os tubos de microcentrífugas são girados para garantir a distribuição adequada e, em seguida, a resina é lavada com tampão PBS adicional. O lisado celular, contendo a proteína desejada, e 2 μg de anticorpo são adicionados aos tubos de microcentrífugas, e a mistura é girada por 1 h a 4 μC. Os grânulos são peletizados por centrifugação, o sobrenadante é descartado e os grânulos são lavados novamente três vezes com tampão para remover a proteína não ligada. Os grânulos contendo o complexo anticorpo-proteína estão na redução do tampão de carregamento de amostras SDS-PAGE, para remoção do complexo do anticorpo e para análise por SDS-PAGE e immunoblotting. Agora vamos discutir o procedimento para ensaios pull-down: A proteína "isca" é expressa em um plasmídeo com a etiqueta de afinidade apropriada. Depois de atingir o crescimento da fase logarítmica, as células são lisadas e centrifugadas. Grânulos suspensos de estreptavidina-sepharose, que capturam a proteína "isca" marcada com biotina, são pipetados em um tubo de microcentrífuga. As contas são então centrifugadas e o sobrenadante cuidadosamente removido por aspiração. Os grânulos são então lavados com tampão, centrifugados e o sobrenadante removido. As células que contêm a suposta proteína "presa", que tem afinidade com a proteína "isca", são colhidas por centrifugação. O sobrenadante é então adicionado ao tubo de microcentrífuga contendo a resina e incubado a 4 ? C por 3 h em uma coqueteleira. A resina é então centrifugada, o sobrenadante removido e a resina lavada para remover a proteína não ligada. O tampão de eluição é adicionado à resina e a mistura é incubada à temperatura ambiente por 30 min em um agitador. A resina é então centrifugada e o sobrenadante contendo o complexo desejado é analisado por immunoblotting. Agora que revisamos os procedimentos, vejamos algumas das aplicações úteis da co-imunoprecipitação e dos ensaios pull-down. A co-imunoprecipitação pode ser útil para uma melhor compreensão do mecanismo de ação das enzimas. As proteínas de resistência ao mixovírus ou Mx inibem uma ampla gama de vírus, incluindo a influenza A, para a qual o mecanismo é pouco compreendido. A co-imunoprecipitação foi usada para estudar a interação entre a proteína Mx1 de camundongo e a nucleoproteína influenza. Os ensaios pull-down provaram ser úteis no estudo dos efeitos dos segundos mensageiros, que são proteínas que comunicam um sinal do ambiente celular. Eles são um componente de uma via de sinalização onde várias proteínas interagem em resposta a pistas ambientais. Os íons de cálcio atuam como mensageiros secundários ligando-se à calmodulina, que, por sua vez, se liga a uma ampla variedade de proteínas, mediando muitos tipos de respostas biológicas. Sem o cálcio, a proteína não pode se ligar à calmodulina. Um ensaio pull-down foi realizado para testar a capacidade das proteínas de se ligarem à calmodulina na presença ou ausência de íons de cálcio. Os ensaios de co-imunoprecipitação e pull-down são geralmente usados para analisar interações proteicas estáveis ou fortes, mas não transitórias. Um desenvolvimento recente em ensaios pull-down, o HaloTag, simplificou o estudo de interações transitórias de proteínas; HaloTag é uma etiqueta de fusão de proteínas geneticamente codificada, fundida à proteína de interesse, capaz de reagir quimicamente com um suporte sólido de haloalcano. Se a análise funcional for desejada, o complexo proteico, menos a marca, em sua totalidade pode ser isolado por incubação com protease do vírus do tabaco. Você acabou de assistir ao vídeo da JoVE sobre co-imunoprecipitação e ensaios pull-down. Este vídeo descreveu os princípios dos dois métodos, os procedimentos laboratoriais gerais e algumas de suas aplicações. Obrigado por assistir!

Education

JoVE Science Education

Chemistry

Química

Biochemistry

Bioquímica

protein interaction capture methods in cells

Co-immunoprecipitation and pull-down assays are laboratory methods used to capture stable protein-protein interactions. Protein-protein interactions help control many biological functions, but many of them have not yet been identified. These assays are related to immunoprecipitation, which isolates a target protein from a mixed sample using an antibody.

In co-immunoprecipitation, or CoIP, an antibody binds the target protein, and that protein is already attached to another protein that the antibody does not recognize. The intact protein complex is collected on a solid support, such as protein A on sepharose beads, so the interaction is preserved during separation. In pull-down assays, the bait protein is tagged instead of using an antibody. The tagged bait is captured by affinity chromatography and used to isolate the proteins that bind to it.

The CoIP procedure begins with PBS buffer and protein A-sepharose in microfuge tubes. The tubes are rotated, washed, and then mixed with cell lysate and about 2 micrograms of antibody. After 1 hour at 4 degrees Celsius, the beads are centrifuged, washed three times, and placed in reducing SDS-PAGE sample-loading buffer. The released proteins are then analyzed by SDS-PAGE and immunoblotting.

The pull-down procedure uses a bait protein expressed with an affinity tag, such as a series of histidine residues or a biotin tag. After the cells reach log-phase growth, they are lysed and centrifuged. Streptavidin-sepharose beads can capture the biotin-tagged bait, and the beads are then washed before the putative prey protein is added. The mixture is incubated at 4 degrees Celsius for 3 hours on a shaker, washed again, and eluted with buffer. The final complex is analyzed by immunoblotting.

These methods are useful for confirming predicted protein interactions and for finding unknown ones. CoIP has been used to study how mouse Mx1 protein interacts with influenza nucleoprotein, which helps explain the action of myxovirus resistance proteins against influenza A. Pull-down assays have also been used to test how calcium ions affect calmodulin binding, since calmodulin binds many proteins only when calcium is present. For transient protein interactions, a modified pull-down approach using HaloTag can help, and tobacco etch virus protease can remove the tag if functional analysis is needed.

Protein Interaction Capture Methods in Cells

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dialysis: diffusion based separation

Dialysis for Buffer Exchange in Biochemistry

Dialysis is a common biochemistry technique for buffer exchange and desalting. It separates molecules by diffusion through a semipermeable membrane, which lets small molecules pass while holding larger biomolecules inside the sample. The membrane is the key part of the setup. Its pores create a molecular weight cutoff, so a membrane such as a 10 kDa membrane usually keeps molecules larger than 10 kilodaltons inside. This cutoff is not exact, because membranes have a range of pore sizes.

enzyme assays and kinetics

Measuring Enzyme Reaction Rates

Enzyme reaction rates can be measured with assays that track how substrate or product levels change over time. Enzymes are proteins, or sometimes RNAs, that speed up chemical reactions by lowering the activation energy needed to start them. They act on a specific substrate and help form a product that supports life processes. Enzymatic reactions are often described in three steps. First, the substrate binds to the enzyme active site and forms an enzyme-substrate complex. That complex can fall...

maldi-tof mass spectrometry

How MALDI-TOF Reads Biomolecules

MALDI-TOF mass spectrometry reads biomolecules by using a laser, a matrix, and a time-of-flight analyzer. MALDI, or matrix-assisted laser desorption ionization, helps fragile molecules keep their structure while they are moved into the mass analyzer. The analyzer then separates compounds based on size and charge. In MALDI, the sample is mixed into a matrix, usually an organic compound with aromatic and conjugated double bonds. A laser pulse strikes the spot, and the matrix absorbs most of the...

tandem mass spectrometry

Tandem Mass Spectrometry for Biomolecule Analysis

Tandem mass spectrometry is used to isolate a biomolecule and break it into smaller pieces so its makeup can be studied. Because biomolecules often have large, complex structures, it can be hard to identify their molecular composition and sequence from a single measurement. By linking mass spectrometers in series, the technique first selects one ion and then analyzes the fragments it produces. The process starts with an ion source that converts the sample into ions. A mass analyzer then...

protein crystallization

Protein Crystals for Structure Analysis

Protein crystals help scientists study protein structure and function. A crystal is a solid lattice made from purified protein molecules. These crystals are useful in structural biology because they reveal details that methods like mass spectrometry and SDS-PAGE cannot show on their own. Protein crystallization is paired with recombinant protein expression and x-ray diffraction to support this work. The process starts with a large amount of very pure protein. Researchers often make that...

chromatography-based biomolecule purification methods

chromatography-based-biomolecule-purification-methods

Protein Purification with SEC and IMAC

Protein purification with size-exclusion chromatography and affinity chromatography helps isolate biomolecules from complex mixtures. These methods are common in biochemistry because purified samples are needed before a biomolecule’s properties and activity can be studied. The video focuses on the principles behind size-exclusion chromatography, affinity chromatography, and immobilized metal affinity chromatography, or IMAC. Size-exclusion chromatography, or SEC, separates molecules by size. A...

two-dimensional gel electrophoresis

Protein Mapping with 2D Gel Electrophoresis

Protein mapping with 2D gel electrophoresis separates complex protein mixtures across two steps. The method combines isoelectric focusing, or IEF, with sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, or SDS-PAGE. Together, these methods can resolve thousands of biomolecules from a single sample by their isoelectric point and molecular weight. The first dimension is IEF. Each protein has an isoelectric point, or pI, which is the pH where its net charge is zero. Proteins are loaded...

metabolic labeling

Tracking Cell Chemistry with Metabolic Labels

Metabolic labeling tracks cell chemistry by using chemical analogs that cells take up and build into biomolecules. These labels help scientists follow biochemical changes and modifications inside cells. The labeled products can then be studied with tools such as SDS-PAGE and NMR to learn more about metabolic pathways. Several labeling strategies are shown here. Isotopic labeling uses analogs that match the natural molecule but contain uncommon isotopes, such as carbon-13 and nitrogen-15 in an...

electrophoretic mobility shift assay (emsa)

electrophoretic-mobility-shift-assay-emsa

Detecting Protein-DNA Binding by EMSA

Electrophoretic mobility shift assay, or EMSA, is a biochemical method used to detect binding between proteins and nucleic acids. It is also called a gel shift assay. The test compares how a labeled nucleic acid moves through a gel before and after it binds a protein. EMSA is used to see whether a specific protein binds to a specific nucleic acid. First, the nucleic acid is labeled to make a probe. The transcript describes radioactive phosphorus-32 as a common label. The probe is then mixed...

photometric protein determination

Measuring Protein Concentration with Absorbance

Measuring protein concentration with absorbance is a key step in many biochemical assays. Photometric methods use the fact that samples with more light-absorbing material transmit less light. Because concentration and absorption are directly related, this makes it possible to measure an unknown sample. The core idea comes from the Beer-Lambert Law. This law states that the concentration of a light-absorbing species is proportional to its absorbance. The video also introduces the Bradford assay...

density gradient ultracentrifugation

Sucrose Gradient Separation in an Ultracentrifuge

Sucrose gradient separation in an ultracentrifuge is a lab method for isolating cell parts and biomolecules. It uses differences in density to make particles sink or rise in a liquid. A high-speed ultracentrifuge speeds up this process so components can be separated without destroying them. The basic idea starts with a suspension, which is particles mixed in a liquid solvent. Particles that are denser than the solvent sediment, while less dense particles float. A rotor inside the...

co-immunoprecipitation and pull-down assays

Co-immunoprecipitation and pull-down assays are laboratory methods used to capture stable protein-protein interactions. Protein-protein interactions help control many biological functions, but many of them have not yet been identified. These assays are related to immunoprecipitation, which isolates a target protein from a mixed sample using an antibody. In co-immunoprecipitation, or CoIP, an antibody binds the target protein, and that protein is already attached to another protein that the...

reconstitution of membrane proteins

Membrane Proteins in Liposome Models

Membrane proteins can be moved into liposome models so their function can be studied outside a cell. Reconstitution means restoring an isolated biomolecule to a working form. For membrane proteins, that usually means placing a purified protein into an artificial lipid membrane. Cell membranes are made mainly of phospholipids and membrane proteins. The phospholipids form a bilayer with hydrophilic phosphate heads facing water and hydrophobic fatty acid tails facing inward. Some membrane...

f&#246;rster resonance energy transfer (fret)

FRET as a Molecular Ruler in Cells

Föster resonance energy transfer, or FRET, is a way to study close-range biochemical interactions using light-emitting molecules. A donor fluorophore can pass energy to an acceptor fluorophore when their emission and absorption spectra overlap. This transfer happens only when the pair is very close together, usually within 10 nm. Because FRET depends on distance, it is often called a molecular or spectroscopic ruler. The strength of the signal is measured as FRET efficiency, which describes...

surface plasmon resonance (spr)

SPR Biosensors for Tracking Binding Kinetics

Surface plasmon resonance, or SPR, is a way to track biomolecular binding on a label-free biosensor. It is used to measure molecular affinity, kinetics, specificity, and concentration. The method works with a thin metal layer on a prism, where changes in reflected light reveal interactions in real time. SPR sensors use a thin layer of a noble metal on the face of a prism. Light is reflected from the prism-metal interface into a photodetector. At one specific angle, called the surface plasmon...

biochemistry

Esta coleção apresenta métodos de purificação comumente usados, como cromatografia de afinidade, bem como métodos analíticos, como MALDI-TOF. Além disso, os vídeos mostram métodos para avaliar a interação e função de biomoléculas, como coimunoprecipitação e marcação metabólica.

Learn how CoIP and pull-down assays capture protein-protein interactions, from bead-based lab steps to examples with influenza proteins and calmodulin.

Protein Interaction Capture Methods in Cells | JoVE K12

Life Science

Structure and Function

HS-LS1-2.

matter-and-energy-in-organisms-and-ecosystems

Matter and Energy in Organisms and Ecosystems

HS-LS1-6.

Overview

Principles of Co-Immunoprecipitation and Pull-Down Assays

Protocol for Co-Immunoprecipitation

Protocol for Pull-Down Assays

Applications

Summary

The Periodic Table

As early chemists discovered more elements, they realized that various elements could be grouped by their similar chemical behaviors. One such grouping ...

Alkali Metals

Group 1 elements are soft and shiny metallic solids. They are malleable, ductile, and good conductors of heat and electricity. The melting points of the ...

Halogens

Group 17 elements, known as halogens, are nonmetals. At room temperature, fluorine and chlorine are gases, bromine is a liquid, and iodine a solid. ...

Noble Gases


The elements in group 18 are noble gases (helium, neon, argon, krypton, xenon, and radon). They earned the name &ldquo;noble&rdquo; because they were ...

Classifying Matter by State

Chemistry is the study of matter and the changes it undergoes. Matter is anything that has mass and occupies space. Matter is all around us; the air, ...

Classifying Matter by Composition

Matter: Pure Substances and Mixtures
According to its composition, the matter can be classified into two broad categories &mdash; pure substances and ...

physical-and-chemical-properties-of-matter

Physical and Chemical Properties of Matter

The characteristics that enable us to distinguish one substance from another are called properties.

Physical Properties of Matter

A physical property is ...

Types of Chemical Bonds

Chemical bonding theories were pioneered by American chemist Gilbert&#xA0;N. Lewis. He developed a model called the Lewis model to explain the type and ...

Lewis Symbols and the Octet Rule

Chemical bonds are complex interactions between two or more atoms or ions, which reduce the potential energy of the molecule. Gilbert N. Lewis developed a ...

Ionic Bonding and Electron Transfer

Ions are atoms or molecules bearing an electrical charge. A cation (a positive ion) forms when a neutral atom loses one or more electrons from its valence ...

The Born-Haber Cycle

Lattice Energy&#xA0;

An ionic compound is stable because of the electrostatic attraction between its positive and negative ions. The lattice energy of a ...

trends-in-lattice-energy-ion-size-and-charge

Trends in Lattice Energy: Ion Size and Charge

An ionic compound is stable because of the electrostatic attraction between its positive and negative ions. The lattice energy of a compound is a measure ...

Covalent Bonding and Lewis Structures

Compared to ionic bonds, which results from the transfer of electrons between metallic and nonmetallic atoms, covalent bonds result from the mutual ...

Electronegativity

Whether a bond is nonpolar or polar covalent is determined by a property of the bonding atoms called electronegativity.&#xA0;

Electronegativity values of ...

Ionization Energy

The amount of energy required to remove the most loosely bound electron from a gaseous atom in its ground state is called its first ionization energy ...

bond-polarity-dipole-moment-and-percent-ionic-character

Bond Polarity, Dipole Moment, and Percent Ionic Character

Bond Polarity

The absolute value of the difference in electronegativity (&Delta;EN) of two bonded atoms provides a rough measure of the polarity to be ...

Electron Affinity

The electron affinity (EA) is the energy change for adding an electron to a gaseous atom to form an anion (negative ion).



This process can be either ...

lewis-structures-of-molecular-compounds-and-polyatomic-ions

Lewis Structures of Molecular Compounds and Polyatomic Ions

To draw Lewis structures for complicated molecules and molecular ions, it is helpful to follow a step-by-step procedure as outlined:


	Determine the ...

assembly-of-a-reflux-system-for-heated-chemical-reactions

Assembly of a Reflux System for Heated Chemical Reactions

Source: Laboratory of Dr. Philip Miller &#8212; Imperial College London
Many chemical experiments require elevated temperatures before any reaction is ...

Resonance

The Lewis structure of a nitrite anion (NO2&minus;) may actually be drawn in two different ways, distinguished by the locations of the N-O and N=O ...

conducting-reactions-below-room-temperature

Conducting Reactions Below Room Temperature

Source: Laboratory of Dr. Dana Lashley - College of William and Mary
Demonstration by: Matt Smith
When new bonds are formed in the course of a chemical ...

Formal Charges

In some cases, there are seemingly more than one valid Lewis structures for molecules and polyatomic ions. The concept of formal charges can be used to ...

Coordination Chemistry Complexes

Source: Laboratory of Dr. Neal Abrams &#8212; SUNY College of Environmental Science and Forestry
Transition metals are found everywhere from vitamin ...

Exceptions to the Octet Rule

Many covalent molecules have central atoms that do not have eight electrons in their Lewis structures. These molecules fall into three categories:


	...

determining-rate-laws-and-the-order-of-reaction

Determining Rate Laws and the Order of Reaction

Source: Laboratory of Dr. Neal Abrams &#8212; SUNY College of Environmental Science and Forestry
All chemical reactions have a specific rate defining the ...

Bond Energies and Bond Lengths

Stable molecules exist because covalent bonds hold the atoms together. The strength of a covalent bond is measured by the energy required to break it, ...

Determining the Empirical Formula

Source: Laboratory of Dr. Neal Abrams - SUNY College of Environmental Science and Forestry
Determining the chemical formula of a compound is at the heart ...

Bonding in Metals

Metallic bonds are formed between two metal atoms. A simplified model to describe metallic bonding has been developed by Paul Dr&#xFC;de called the ...

determining-the-solubility-rules-of-ionic-compounds

Determining the Solubility Rules of Ionic Compounds

Source: Laboratory of Dr. Neal Abrams &#8212; SUNY College of Environmental Science and Forestry
An ionic compound&#39;s solubility can be determined via ...

atomic-radii-and-effective-nuclear-charge

Atomic Radii and Effective Nuclear Charge

The elements in groups of the periodic table exhibit similar chemical behavior. This similarity occurs because the members of a group have the same number ...

Introduction to Catalysis

Source: Laboratory of Dr. Ryan Richards &#8212; Colorado School of Mines
Catalysis is among the most important fields of modern technology and presently ...

Ionic Radii

Ionic radius is the measure used to describe the size of an ion. A cation always has fewer electrons and the same number of protons as the parent atom; it ...

Introduction to Titration

Source: Laboratory of Dr. Yee Nee Tan &#8212; Agency for Science, Technology, and Research
Titration is a common technique used to quantitatively ...

Le Ch&#226;telier's Principle

Source: Laboratory of Dr. Lynne O&#39;Connell &#8212; Boston College
When the conditions of a system at equilibrium are altered, the system responds in ...

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Preparing Anhydrous Reagents and Equipment

Source: Laboratory of Dr. Dana Lashley - College of William and Mary
Demonstrated by: Timothy Beck and Lucas Arney
Many reactions in organic chemistry are ...

Proton Exchange Membrane Fuel Cells

Source: Laboratories of Margaret Workman and Kimberly Frye - Depaul University
The United States consumes a large amount of energy &#8211; the current ...

Solutions and Concentrations

Source: Laboratory of Dr. Michael Evans &#8212; Georgia Institute of Technology
A solution is a homogeneous mixture containing some components in small ...

spectrophotometric-determination-of-an-equilibrium-constant

Spectrophotometric Determination of an Equilibrium Constant

Source: Laboratory of Dr. Michael Evans &#8212; Georgia Institute of Technology
The equilibrium constant, K, for a chemical system is the ratio of product ...

using-differential-scanning-calorimetry-to-measure-changes-in-enthalpy

Using Differential Scanning Calorimetry to Measure Changes in Enthalpy

Source: Laboratory of Dr. Terry Tritt &#8212; Clemson University
Differential Scanning Calorimetry (DSC) is a method of thermodynamic analysis based on ...

Schlenk Lines Transfer of Solvents

Source: Hsin-Chun Chiu and Tyler J. Morin, laboratory of Dr. Ian Tonks&#8212;University of Minnesota Twin Cities
Schlenk lines and high vacuum lines are ...

Construct and revise an explanation for the outcome of a simple chemical reaction based on the outermost electron states of atoms, trends in the periodic table, and knowledge of the patterns of chemical properties.

HS-PS1-2.

Chemical Equations

Chemical equations represent the identities and relative quantities of substances involved in a chemical reaction. The substances undergoing reaction are ...

Chemical Reactions in Aqueous Solutions

Chemical substances interact in many different ways. Certain chemical reactions exhibit common patterns of reactivity. Due to the vast number of chemical ...

Precipitation Reactions

In a precipitation reaction, aqueous solutions of soluble salts react to give an insoluble ionic compound &#x2013; the precipitate. The reaction occurs ...

Oxidation-Reduction Reactions

Oxidation&ndash;Reduction Reactions

Earth&rsquo;s atmosphere contains about 20% molecular oxygen, O2, a chemically reactive gas that plays an essential ...

Oxidation Numbers

In redox reactions, the transfer of electrons occurs between reacting species. Electron transfer is described by a hypothetical number called the ...

Acids, Bases and Neutralization Reactions

An acid-base reaction is one in which a hydrogen ion, H+, is transferred from one chemical species to another. Such reactions are of central importance to ...

Synthesis and Decomposition Reactions

Synthesis and decomposition are two types of redox reactions. Synthesis means to make something, whereas decomposition means to break something. The ...

Develop a model to illustrate that the release or absorption of energy from a chemical reaction system depends upon the changes in total bond energy.

HS-PS1-4.

Reaction Rate

The rate of reaction is the change in the amount of a reactant or product per unit time. Reaction rates are therefore determined by measuring the time ...

Measuring Reaction Rates

Polarimetry finds application in chemical kinetics to measure the concentration and reaction kinetics of optically active substances during a chemical ...

Apply scientific principles and evidence to explain how the rate of a physical or chemical change is affected when conditions are varied.

Protein Interaction Capture Methods in Cells

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