Diversidade microbiana e fúngica

ConceitosPreparação do InstrutorProtocolo do Estudante
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  1. Examinando estruturas de colônias microbianas
    • Para começar, colete suas placas de cultura alocadas e remova o Parafilm e a tampa de uma delas.
    • Coloque a placa descoberta sob um microscópio de dissecação e, em seguida, observe as comunidades individuais dentro de cada quadrante da placa.
    • À medida que as colônias são identificadas, preencha as propriedades da colônia observadas na coluna apropriada da tabela. Clique aqui para baixar a Tabela 1
    • Em seguida, repita as observações para cada uma das outras duas espécies bacterianas.
    • Para realizar a coloração de Gram de suas três espécies bacterianas, primeiro rotule as extremidades de três lâminas de microscópio com as iniciais de cada espécie de bactéria, suas iniciais e a data. HIPÓTESES: Neste experimento, a hipótese experimental pode ser que é possível elucidar diferentes espécies e formas bacterianas usando a coloração de Gram, e que as bactérias Gram-positivas se covariam de roxo com violeta cristal, enquanto as bactérias Gram-negativas aparecerão rosa devido à contracoloração de safranina. A hipótese nula pode ser que todos os tipos bacterianos reterão as duas manchas igualmente, e a coloração não ajudará a elucidar suas espécies ou formas.
    • Para iniciar a primeira coloração, prenda um clipe na lâmina para facilitar o manuseio. Para cada esfregaço bacteriano, lembre-se de usar um circuito de inoculação limpo e esterilizado por chama.
    • Coloque duas voltas de água destilada estéril no centro da lâmina.
    • Depois de esterilizar a alça novamente, resfrie a alça tocando várias vezes em uma parte não inoculada do ágar.
    • Em seguida, remova uma pequena quantidade de cultura de uma colônia isolada e misture-a com a água da lâmina.
    • Deixe a lâmina secar à temperatura ambiente e fixe a mancha passando-a rapidamente por uma chama.
    • Depois de seco, pipete várias gotas de violeta cristal na lâmina e deixe descansar por dois a três minutos.
    • Enxágue cuidadosamente a lâmina com água destilada, direcionando o fluxo direto para o topo da lâmina, permitindo que a água escorra suavemente para baixo. Não aponte o fluxo de água diretamente para o esfregaço.
    • Em seguida, cubra a lâmina com iodo de Gram, deixe-a descansar novamente por dois minutos e depois enxágue suavemente com água destilada.
    • Descolora a lâmina com etanol a 95% até que a mancha não desapareça mais.
    • Imediatamente, enxágue a lâmina com água destilada. Isso limitará a descoloração excessiva.
    • Em seguida, adicione várias gotas de contracoloração de safranina e deixe por 30 s. Isso manchará todas as células Gram-negativas presentes.
    • Enxágue suavemente a lâmina com água destilada e seque com papel absorvente.
    • Depois de corar as outras duas lâminas da mesma maneira (etapas 6 a 17), observe cada uma com um microscópio.
    • Use uma objetiva de baixa potência primeiro para fazer ajustes grosseiros. Quando você encontrar uma seção ideal, passe para as ampliações mais altas.
    • Depois de obter mais imagens e ajustar o esfregaço com uma objetiva de média potência, adicione óleo de imersão diretamente ao esfregaço. NOTA: O óleo é necessário para objetivas de alta potência que fornecerão as melhores micrografias.
    • Agora, use lápis de cor para desenhar as bactérias observadas nos círculos de ampliação apropriados e preencha as características observadas na coluna apropriada, observando a forma da bactéria e se ela é Gram-positiva, identificada por coloração roxa mais escura, ou Gram-negativa, identificada com coloração rosa. Clique aqui para baixar a Tabela 2
    • Finalmente, repita a observação, desenho e caracterização das outras duas lâminas bacterianas coradas.
  2. Examinando estruturas fúngicas
    • Remova a placa de S. cerevisiae da incubadora e coloque uma gota de água em uma lâmina de microscópio.
    • Usando uma alça de inoculação esterilizada, espalhe uma película de fermento na gota de água e coloque uma lamínula sobre a lâmina.
    • Coloque a lâmina sob o microscópio com a menor ampliação, aumentando a ampliação para a configuração de imersão em óleo para ver as células de levedura individuais.
    • Observe a forma geral e a estrutura da levedura e identifique quaisquer células que estejam passando por reprodução assexuada por brotamento.
    • Agora, desenhe as células nos círculos de ampliação apropriados.
    • Quando terminar de observar a levedura, substitua a lâmina de S. cerevisiae por uma lâmina de Ascomycetes apothecium preparada e ajuste o microscópio para a menor ampliação.
    • Usando lápis de cor, desenhe as estruturas em ampliações baixas e altas, incluindo os ascos e ascósporos.
    • Finalmente, coloque um cogumelo-botão, Agaricus bisporus, sob o microscópio de dissecação e desenhe as características, incluindo o pileus, ou tampa, as brânquias e o estipe, ou caule.
  3. Resultados
    • Usando a coloração das bactérias registradas na tabela, determine quais espécies são Gram-positivas e quais são Gram-negativas.
    • Em seguida, observe as formas registradas na tabela para determinar quais espécies bacterianas são bacilos, cocos ou espirilos.
    • Em seguida, compare suas ilustrações das células de levedura com suas ilustrações das células bacterianas. NOTA: Leveduras do filo Ascomicetes, como S. cerevisiae, podem se reproduzir assexuadamente, o que pode ser observado através do brotamento das células ao microscópio.
    • Registre todas as observações de brotamento de células de levedura. NOTA: Os ascomicetes também podem se reproduzir sexualmente por mitose e formação de esporos haplóides.
    • Registre todas as observações de formação de esporos ou ascos observadas na tabela.
    • NOTA: Os fungos do filo Basidiomycota exibem brânquias claramente observáveis sob o pileus.
    • Registre qualquer espécie de fungo que demonstrou brânquias sob o pileus.

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