DNA Complementar

Quase todas as células do corpo tem o mesmo DNA, mas diferentes tipos de células, como neurônios e células musculares, expressam genes diferentes porque apenas alguns genes são transcritos em RNA mensageiro ou mRNA em cada célula. No laboratório, mRNAs podem ser usados como um modelo para sintetizar o DNA complementar, cDNA, para estudar a expressão do gene. Um método comum é extrair RNA das células, em seguida, isolar o mRNA de outros tipos de RNA, como RNA ribossómico ou RNA de transferência, executando a amostra sobre uma coluna de contas com trechos de nucleotídeos de timina anexados.

Estes se ligam à cauda poli uma cadeia de nucleotídeos de adenina especificamente presente nas três pontas principais do mRNA eucariótico. Os outros tipos de RNA não se ligam e são lavados. Após o mRNA ser isolado, um primer poli está ligado para a cauda poli fornecendo um ponto de partida para as enzimas de transcriptase reversa para transcrever uma fita simples cDNA do mRNA.

Químicos, como enzimas RNase são então adicionados para degradar o RNA. Enzimas de DNA polimerase são então utilizadas para sintetizar um fio complementar ao cDNA resultando em cDNA de fita dupla, que pode ser inserido em um vetor bacteriano ou viral e usado em pesquisas de biologia molecular.