Isolamento de DNA

O DNA precisa ser isolado das células e cortado em posições precisas para muitas aplicações, como a tecnologia de DNA recombinante.

Embora diferentes tipos de métodos de extração de DNA sejam usados para diferentes tipos de células, existem três etapas padrão: lise celular, remoção de proteínas e recuperação de DNA.

Dentro das células eucarióticas, o DNA é empacotado dentro do núcleo. Assim, tanto a membrana celular quanto a membrana nuclear precisam ser rompidas para isolar o DNA.

Esta etapa pode ser feita mecanicamente, quebrando as células por meio de moagem ou sonicação, ou quimicamente, usando detergentes e enzimas para dissolver partes da membrana celular.

Uma vez que o conteúdo da célula é liberado, os detritos são separados dos componentes solúveis por centrifugação. O sobrenadante recuperado contém ácidos nucléicos e proteínas solúveis em água.

Para remover proteínas, enzimas, como proteinase K, peptidase ou lisozima, são adicionadas ao sobrenadante para quebrar as ligações peptídicas.

O DNA é recuperado do sobrenadante por meio da precipitação, adicionando álcool e um sal, como o acetato de sódio.

O precipitado isolado é dissolvido em água ou em tampão.