Borrão do Sul

Southern blotting é uma técnica em que uma sonda de DNA marcada hibridiza com um DNA alvo para detectar uma sequência específica dentro de um genoma.

A técnica recebeu o nome de Edwin Southern, o biólogo britânico que a desenvolveu pela primeira vez.

O procedimento segue cinco etapas principais: eletroforese, desnaturação, transferência de membrana, hibridização e visualização.

Primeiro, o DNA genômico é digerido por enzimas de restrição e os fragmentos de DNA resultantes são carregados em um gel de agarose e separados por eletroforese em gel.

Para desnaturação ou separação do DNA de fita dupla em dois DNA de fita simples, ou ssDNA, o gel é embebido em uma solução de hidróxido de sódio.

O gel é então colocado em uma esponja em uma solução neutralizante de DNA contendo cloreto de sódio e tampão tris, para redefinir seu pH para 7,0.

Em seguida, uma membrana de náilon é colocada em cima do gel e pesada com uma pilha de toalhas de papel. O ssDNA é transferido para a membrana por ação capilar, enquanto a alta concentração de sal na solução neutralizante ajuda o DNA a se ligar.

Quando irradiado com raios UV, o DNA torna-se covalentemente reticulado à membrana. Isso impede a difusão e imo