FISH - Hibridização Fluorescente In-situ

Fluorescência A hibridização in situ ou FISH é uma técnica usada para detectar a localização de genes específicos ou partes de genes em cromossomos dentro de células fixas.

Nesta técnica, um DNA de fita simples marcado com fluorescência é usado como uma sonda para ligar partes de cromossomos que contêm uma sequência de DNA complementar, chamada de alvo.

Primeiro, as células são presas na interfase ou metáfase. As células presas são suspensas em solução tampão e espalhadas sobre uma lâmina de vidro limpa.

Em seguida, o DNA alvo e as sondas marcadas são desnaturados com calor ou produtos químicos. Esta etapa separa o DNA de fita dupla, deixando a sonda e o DNA alvo como sequências de fita simples que são capazes de emparelhamento de bases.

Em seguida, a sonda e o DNA alvo são misturados e incubados durante a noite. Isso permite que a sonda hibridize com sua sequência complementar nos cromossomos.

Uma vez concluída a hibridização, o excesso de sonda é lavado.

Se a sonda foi marcada com um fluoróforo, as localizações do DNA hibridizado podem ser visualizadas diretamente com um microscópio fluorescente.

Caso contrário, o DNA hibridizado precisa ser marcado com fluorescência antes da vis