Fracionamento Subcelular

O fracionamento subcelular é usado para obter frações puras de diferentes organelas celulares de um lisado celular.

Dois métodos comumente usados para fracionamento subcelular são centrifugação diferencial e centrifugação por gradiente de densidade.

A centrifugação diferencial usa centrifugação sequencial em velocidades progressivamente crescentes para separação de organelas com base no tamanho.

Primeiro, a amostra é centrifugada a uma velocidade baixa de cerca de 400 a 600 x g para sedimentar grandes estruturas como núcleos e detritos celulares.

Em seguida, o sobrenadante é girado em alta velocidade variando de 10.000 a 20.000 x g para granular organelas como mitocôndrias, lisossomos e peroxissomos.

Ciclos de centrifugação adicionais em velocidades superiores a 80.000 x g podem separar microssomas, frações de membrana e até ribossomos.

No entanto, a centrifugação diferencial não pode separar organelas muito próximas em tamanho ou densidade, como as mitocôndrias dos peroxissomos.

Nesses casos, a centrifugação por gradiente de densidade, um método mais sensível, é uma ferramenta valiosa.

Este método usa gradientes de densidade estabelecidos usando produtos químicos

como sacarose ou