SDS-PAGE

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eletroforese em gel de dodecil sulfato-poliacrilamida de sódio ou SDS-PAGE é uma técnica baseada em peso molecular que separa misturas de proteínas com base em seu tamanho.

Aqui, as proteínas da amostra são tratadas com β-mercaptoetanol e SDS.

β-mercaptoetanol é um agente redutor que quebra as ligações dissulfeto.

O SDS, um detergente carregado negativamente, liga-se às regiões hidrofóbicas para desdobrar e desnaturar as proteínas e adiciona uma carga negativa uniforme.

As amostras são então carregadas em um gel de poliacrilamida feito de monômeros de acrilamida reticulados.

O gel de empilhamento superior tem poros dilatados devido à baixa concentração de acrilamida.

Na aplicação de tensão, as amostras de proteína se empilham como moedas para entrar no gel de resolução inferior simultaneamente.

O gel de resolução tem poros menores devido a uma maior concentração de acrilamida. Ele atua como uma peneira molecular, permitindo que proteínas menores corram mais rápido, separando assim as proteínas com base em seus tamanhos.

Essas bandas de proteínas separadas são comumente visualizadas usando a coloração azul de Coomassie. O peso molecular de cada banda pode ser determinado usando proteínas marcadoras de referência.