Microscopia de fluorescência de reflexão interna total

A microscopia de fluorescência de reflexão interna total, ou TIRF, cria imagens seletivas de moléculas fluorescentes em uma amostra próxima a uma superfície sólida com um índice de refração mais alto, como uma lamínula de vidro.

O feixe de laser de excitação atinge a lamínula em um ângulo crítico, resultando em reflexão interna total do feixe.

A luz refletida não entra na amostra, mas cria um campo eletromagnético estreito ou uma onda evanescente, que ilumina apenas fluoróforos dentro de 100 a 200 nanômetros da superfície da célula.

Como a onda evanescente decai rapidamente à medida que avança na amostra, a maioria dos fluoróforos de fundo não é excitada. Assim, as imagens resultantes das poucas proteínas marcadas com fluoróforo perto da superfície sólida são claras e nítidas.

O TIRF é usado rotineiramente para imagens de células vivas, como estudar o movimento de proteínas motoras como a cinesina sobre os microtúbulos ligados à lamínula.