Este artigo descreve um protocolo usado para estudar o homing das células hematopoiéticas para seus nichos na medula óssea.
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de método
Homing das células hematopoiéticas da medula óssea
Neste artigo
Resumo
Resumo
Homing é o fenômeno pelo qual transplantadas células hematopoiéticas são capazes de viajar de e para enxertar ou estabelecer residência na medula óssea. Chemomkines vários e receptores estão envolvidos no homing das células-tronco hematopoiéticas. [1, 2]
Este documento descreve o protocolo clássico homing utilizados em estudos de células-tronco hematopoiéticas. Em geral, isso envolve isolar a população de células cuja homing precisa ser investigada, manchando esta população com um corante de juros e injetar essas células na corrente sanguínea de um animal destinatário. O animal é então destinatário sacrificados em um tempo pré-determinado após a injeção e da medula óssea avaliados para a percentagem ou número absoluto de células que são positivos para a tintura de interesse. Em um dos esquemas mais comuns experimental, a eficiência homing das células hematopoiéticas de dois animais geneticamente distintos (um animal tipo selvagem e fora knock-correspondente) é comparada. Este artigo descreve o protocolo de células hematopoiéticas homing no quadro de como o experimento.
Protocolo
- Começamos a experiência homing, extraindo células para serem usadas no experimento. Para esta experiência atual que estamos interessados em descobrir se o homing de medula óssea para os nichos nos ossos longos de animais destinatário é diferente para as células extraídas da medula óssea de animais WT, como C57BL/6J (WT) e aqueles que são transgênicos nocautes para o receptor de Lysophosphatidic 1 (LPAR1) (KO).
- Antes de iniciar o experimento, iremos recolher os materiais que precisamos para este experimento. Em nosso laboratório todas as dissecções do mouse são realizadas em um fluxo laminar de cultura de tecidos, especialmente se as células vão ser transplantados em um a....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Discussão
Homing é o processo pelo qual células da medula óssea, incluindo as células-tronco, as células progenitoras e células diferenciadas, o seu caminho para a medula óssea depois de ser injetado na corrente sanguínea ou na cavidade da medula óssea de camundongos. Como é óbvio a partir da definição, um cientista pode optar por estudar o homing das células-tronco hematopoiéticas, células progenitoras ou células diferenciadas identificados por imunofenotipagem e isoladas por separação de células. Normalmente os cientistas injet.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Agradecimentos
Este protocolo foi testado e otimizado no laboratório do Dr. David Scadden. Financiamento é fornecido pelo Dana Farber Cancer Institute / Massachusetts General Hospital de Clínicas de Hematologia e Oncologia do Programa Fellowship.
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| DPBS (Salina Tamponada com Fosfato de Dulbecco’s) | Mediatech, Inc. | 21-031-CV | |
| Soro de Bezerro Fetal Esteril | Valley Biomedical, Inc. | BS3033 | |
| EDTA 0,5 M (pH 8,0) | Boston BioProducts | BM-150 | |
| Solução de Azul de Tripan | Mediatech, Inc. | 25-900-CI | |
| Tampão Lise ACK | Lonza Inc. | 10-548E | |
| Isopropranolol U.S.P. | Denison Pharmaceuticals, Inc | ||
| Solução corante celular Vybrant DiD | Invitrogen | V22887 | |
| Solução corante celular Vybrant DiI | Invitrogen | V22885 |
Referências
- Adams, G. B., et al. Stem cell engraftment at the endosteal niche is specified by the calcium-sensing receptor. Nature. 439 (7076), 599-603 (2006).
- Broxmeyer, H. E. Chemokines in hematopoiesis. Curr Opin Hematol. 15 (1), 49-58 (2008).
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Reimpressões e permissões
Explorar mais artigos
