Aqui, demonstramos a fabricação de colágeno baseado em construções de tecido contendo os mioblastos esqueléticos. Essas construções 3-D de engenharia podem ser usados para substituir ou reparar tecidos In vivo. Para os nossos propósitos, nós projetamos estes como um canal atrioventricular elétrica para a reparação de bloqueio cardíaco completo [1].
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Artigo de método
Fabricação de Miogênica Constrói engenharia de tecidos
Neste artigo
Resumo
Resumo
Apesar do facto de pacemakers eletrônicos são salva-vidas dispositivos médicos, o seu desempenho a longo prazo em pacientes pediátricos pode ser problemático, devido a restrições impostas pelo pequeno tamanho de uma criança e seu crescimento inevitável. Conseqüentemente, há uma necessidade genuína para terapias inovadoras projetadas especificamente para pacientes pediátricos com distúrbios do ritmo cardíaco. Propomos que uma alternativa condutora biológica consiste de uma matriz à base de colágeno contendo autologously células derivadas poderiam se adaptar melhor ao crescimento, reduzir a necessidade de cirurgias recorrentes, e melhorar significativamente a qualidade de vida para esses pacientes. No presente estudo, descrevemos um procedimento para a incorporação de culturas de células primárias de mioblastos esqueléticos dentro de uma matriz de hidrogel para moldar uma estrutura de tecido cirurgicamente implantável, que servirá como um conduíte elétrico entre as câmaras superior e inferior do coração. Em última instância, nós antecipamos usando este tipo de engenharia de tecidos para restaurar a condução elétrica atrioventricular em crianças com bloqueio cardíaco completo. Em vista disso, isolamos mioblastos de músculo esquelético de ratos Lewis neonatal e placa-los para laminina revestido pratos de cultura de tecidos usando uma versão modificada de protocolos estabelecidos
Protocolo
Parte 1: Montar construir moldes de fundição
- Use uma lâmina de barbear para cortar pela metade tubos de silicone (VWR) e corte-o em três pedaços cm de comprimento.
- Coloque uma gota de implante de silicone RTV-grade adesiva (Rhodia) no interior de cada extremidade do tubo.
- Colocar rapidamente um pequeno pedaço (1 cm x 1 cm) de poliéster malha (McMaster-Carr) na queda adesivo de silicone e alinhá-lo com a extremidade do tubo. Isso irá proporcionar uma superfície ligeiramente elevada e plana para fixação construir. Repita o procedimento para a outra extremidade.
- Permitir que o molde para secar em temperatura ambiente por 3 dias. ....
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Discussão
Os moldes em que a construção de tecido serão lançados podem ser feitas em qualquer formato e tamanho, no entanto, é preciso haver pelo menos dois pontos de fixação. Caso contrário, a matriz e as células formam uma estrutura esférica e as células morrem. No protocolo, descrevemos o uso de uma malha de poliéster para esta finalidade, mas também temos utilizado com sucesso malha de aço inoxidável. Obviamente, moldes maiores exigirá mais células e um maior volume de outros ingredientes. Ao fazer os moldes, é importante par.......
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Divulgações
Experimentos em animais foram realizados de acordo com as diretrizes e regulamentos estabelecidos pela Institutional Animal Care e do Comitê Use do Hospital Infantil de Boston.
Agradecimentos
Este trabalho é suportado por verbas de pesquisa dos Institutos Nacionais de Saúde (HL068915; HL088206), o Prêmio Pesquisador Nova do Fundo de Investigação Thrasher, e contribuições para o Fundo de Condução Cardíaca do Hospital Infantil de Boston.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Tubo de silicone | VWR international | 60985-724 | |
| Adesivo de silicone | Rhodia Silicones | MED ADH 4300 RTV | |
| Malha de poliéster | McMaster-Carr | 93185T17 | |
| Laminina | Sigma-Aldrich | L2020 | |
| Meio Nutriente F-10 HAM | Sigma-Aldrich | N6908 | |
| Soro bovino fetal | Atlanta Biologicals | S11550 | |
| Penicilina/Estreptomicina | Invitrogen | 15140 | |
| Fungizone | Invitrogen | 15290-018 | |
| Dispase-2 | Roche Group | 10295825001 | |
| Colagenase 2 | Worthington Biochemical | 46H8863 | |
| Fator de crescimento de fibroblastos básico | Promega Corp. | G5071 | |
| Placas de cultura de tecidos de 150 mm | BD Biosciences | 353025 | |
| Tripsina-EDTA 0,05% (1X) | GIBCO, by Life Technologies | 25300 | |
| Solução salina balanceada de Hanks 1X | Invitrogen | 14170-112 | |
| NaHCO3 7,5% | GIBCO, by Life Technologies | 25080-094 | |
| Filtro de células de 70 μm | BD Biosciences | 352350 | |
| Placas de 6 poços | BD Biosciences | 353046 | |
| Frasco cônico de 50 mL | BD Biosciences | 352098 | |
| Frasco cônico de 15 mL | BD Biosciences | 352099 | |
| Filtro de 0,2 μm | Nalge Nunc international | 194-2520 |
Referências
- Choi, Y. H. Cardiac conduction through engineered tissue. Am J Pathol. 169 (1), 72-85 (2006).
- Rando, T. A., Blau, H. M. Primary mouse myoblast purification, characterization, and transplantation for cell-mediated gene therapy. J Cell Biol. 125
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Reimpressões e permissões
