Protocolo para Vaccinia infecção de células HeLa e análise de host e expressão gênica viral. Parte 1 de 3.
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Artigo de método
Infecção pelo Vírus Vaccinia e Análise Temporal da Expressão Gênica de Vírus: Parte 1
Neste artigo
Resumo
Protocolo
Parte 1: Configurando a infecção
- Cultivar células HeLa em frascos e espere até que as células são aproximadamente 80% confluentes.
- Prepare o suficiente meio de crescimento viral para o experimento: DMEM regular com 2% FBS e sem antibióticos acrescentou.
- A infecção pode ser realizada com o estoque bruto de um vírus vaccinia com um título conhecido, ou sacarose purificada vírus com um título conhecido, se você estiver preocupado com a expressão do gene host.
- Se você estiver usando vírus sacarose purificada, prossiga diretamente para a parte 2.
- Se você estiver usando uma ação do vírus vaccinia bruto, pouco antes da infe....
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Discussão
Passos crítica
Parte 1 & 2
Existem vários passos críticos para a criação de uma infecção vaccinia síncrona, a sonicação ser o primeiro cuidado (ou trypzinizing) do vírus, a fim de desagregar as partículas do vírus. Vaccinia é altamente propensos a agregar, e ruptura de partículas do vírus é importante para assegurar mesmo a infecção de células. A fim de alcançar uma infecção síncrono, uma alta MOI (superior a 2) deve ser usado para garantir que cada célula é infec.......
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Agradecimentos
Whitehead Institute Fellows Fundos
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários | |
|---|---|---|---|---|
| Reagente TRIzol | Reagente | Invitrogen | 15596-026 | Reagentes semelhantes, como o TriPure da Roche, também funcionam. |
| Reagente de Separação de Fases BCP | Reagente | Molecular Research Center | BP151 | |
| Conjunto de DNase Isento de RNase | Reagente | Qiagen | 79254 | O tratamento com DNase é uma etapa opcional. |
Referências
- KH, R. ubins, LE, H. ensley, GW, B. ell, Wang, C., EJ, L. efkowitz, PO, B. rown, DA, R. elman Comparative analysis of viral gene expression programs during poxvirus infection: a transcriptional map of the vaccinia and monkeypox genomes. PLoS ONE. 3 (7), e2628-e2628 (2008).
- Assarsson, E., Greenbaum, J. A., Sundström, M., Schaffer, L., Hammond, J. A., Pasquetto, V., Oseroff, C., Hendrickson, R. ....
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Reimpressões e permissões
