O sistema nervoso stomatogastric (STNS) do caranguejo Jonas ( C. borealis) Pode ser usado para eletrofisiologia, imuno-histoquímica, e os estudos de cultura de células. A extração STNS é feito em duas partes: a dissecção macroscópica e multa.
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Artigo de método
Câncer Borealis Dissection Sistema Nervoso Stomatogastric
Neste artigo
Resumo
Resumo
O gânglio stomatogastric (STG) é um excelente modelo para estudar interações celulares e de rede, porque contém um número relativamente pequeno de células (aproximadamente 25 em C. borealis), que estão bem caracterizadas. As células do STG exibem uma ampla gama de produtos e são responsáveis pelas ações motoras do estômago. O estômago contém o moinho gástrico que quebra os alimentos, com três dentes internos, e do piloro que filtra o alimento antes de chegar ao intestino médio. O STG produz duas saídas rítmica para controlar o moinho gástrico e do piloro conhecidos como geradores de padrão central (CPG). Cada célula do STG pode participar em um ou ambos os ritmos. Estes CPG permitir o estudo de neuromodulação, a homeostase, a variabilidade celular e rede, desenvolvimento da rede, e recuperação da rede.
A dissecção do sistema nervoso stomatogastric (STNS) do caranguejo Jonas (Cancer borealis) é feito em duas partes: a dissecção macroscópica e multa. Na dissecção bruto todo o estômago é dissecada do caranguejo. Durante a dissecção fina do STNS é extraído do estômago usando um microscópio de dissecção e micro-dissecção ferramentas (ver figura 1). O STNS inclui o STG, o gânglio esofágica (OG), e os gânglios comissural (CoG), bem como os nervos que inervam os músculos do estômago. Aqui, vamos mostrar como realizar uma dissecação completa do STNS em preparação para um experimento de eletrofisiologia, onde as células do STG seria gravado a partir intracelularmente e os nervos periféricos seria usado para gravações extracelular. A técnica adequada para encontrar os nervos desejado é mostrado, assim como nossa técnica de desheathing o gânglio para revelar o somata e neuropil.
Protocolo
1. Dissecação bruta
- Coloque um caranguejo no gelo por 30 minutos para maçante os sistemas sensoriais e motoras do animal. Rodeiam por todos os lados com gelo. Devem ser usadas luvas ao manusear o caranguejo.
- Prepare-se para a dissecção macroscópica fazendo o layout da pan dissecção e as ferramentas que você irá usar. Rongeurs, osso de corte de tesoura, tesoura pequena, pinça dentada, uma espátula com uma borda afilada, um prato Sylgard revestido preto, e pinos de insetos são necessários.
- Remova o caranguejo do balde de gelo por sua perna para evitar que ele beliscar e colocá-lo na panela de dissecação.
- Remova as garras primeir....
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Discussão
A dissecção STNS é o primeiro passo na realização de um experimento de eletrofisiologia ou imuno-histoquímica, ou para a obtenção de células para cultura de células. Independentemente da experiência pretendida, a dissecção macroscópica permanecerá inalterada. No entanto, a dissecção multa pode variar. É importante planejar com antecedência quais as células e que os nervos você vai gravar a partir de. A maioria dos neurônios no STG têm processos que inervam pelo menos um músculo do estômago (ver figura 2) e são classific.......
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Agradecimentos
Agradecemos aos membros do Laboratório de Marder. Agradecemos aos nossos conselheiro, Dr. Eve Marder, por seu apoio e encorajamento. Esta pesquisa foi apoiada pelo Instituto Nacional de Distúrbios Neurológicos e Derrame Grants NS-NS-17813 e 058110.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários | |
|---|---|---|---|---|
| Sylgard Preto 170 | Outro | Dow Corning | 170 | Dissecação Grosseira |
| Tesoura Fina | Cirurgia | Fine Science Tools | 14090-09 | |
| Alfinetes para Insetos nº 6 | Cirurgia | Fine Science Tools | 26000-65 | |
| Tesoura Mayo | Cirurgia | Fine Science Tools | 14110-17 | |
| Micro-Espátula | Cirurgia | WARD’s Natural Science | 15 V 4313 | |
| Rongeurs | Cirurgia | Fine Science Tools | 16000-14 | |
| Pinça para Tecidos | Cirurgia | Fine Science Tools | 11021-12 | |
| Fio Fino de Tungstênio (diâmetro de 0,001 pol.) | Cirurgia | California Fine Wire Company | Dissecação Fina | |
| Pinça nº 5 | Cirurgia | Fine Science Tools | 91150-20 | |
| Alfinetes Minúsculos | Cirurgia | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| Tesoura de Mola Moria (lâminas de 7 mm) | Cirurgia | Fine Science Tools | 15370-52 | |
| Placa de Petri (100x15 mm) | Outro | Fisher Scientific | 08-757-12 | |
| Suporte para Alfinetes | Cirurgia | Fine Science Tools | 26018-17 | |
| Pinça Superfina nº 5SF | Cirurgia | Fine Science Tools | 11252-00 | |
| Sylgard 182 | Outro | Dow Corning | 182 | |
| Agulhas de Tungstênio | Cirurgia | Fine Science Tools | 10130-05 | |
| Microscópio de Dissecação | Microscópio | Wild | MC3 | Diversos |
| Caranguejo Jonah (C. borealis) | Animal | Commercial Lobster |
Referências
- Harris-Warrick, R. M., Marder, E., Selverston, A. I., Moulins, M. Dynamic Biological Networks: The stomatogastric nervous system. , MIT Press. Boston. (1992).
- Marder, E., Bucher, D. Understanding circuit dynamics using the stomatogastric nervous system of lobsters and crabs.<....
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Reimpressões e permissões
