Criação de Murina Experimental aneurismas de aorta abdominal com Elastase

Resumo

Este vídeo mostra como induzir aneurismas da aorta abdominal (AAA) em camundongos através de infusão intraluminal transitória da elastase pancreática suína no segmento de infra-renal da aorta abdominal. O modelo tem a capacidade de adicionar uma visão ampla para o pathobiology da AAA, devido ao surgimento de inúmeros transgênicos e camundongos knockout do gene.

Resumo

Infusão intraluminal transitória da elastase pancreática suína no segmento de infra-renal da aorta abdominal é o modelo animal mais usado do aneurisma de aorta abdominal (AAA) desde que foi descrita pela primeira vez em ratos por Anidjar e colegas. Lógica ¹ A para o seu desenvolvimento foi baseado sobre a natureza perturbada de elastina observado em AAA. Este modelo de rato tenha sido modificado para produzir AAA na região da aorta infra-renal de ratos. ² O modelo tem a capacidade de adicionar uma visão ampla para o pathobiology da AAA, devido ao surgimento de inúmeros transgênicos e camundongos knockout do gene. Além disso, é uma plataforma viável para testar potenciais agentes terapêuticos para AAA. Neste vídeo, demonstramos o processo de infusão elastase AAA utilizado em nosso laboratório.

Os ratos são anestesiados com isoflurano 2,5%, e uma laparotomia é realizada sob condições estéreis. O aortais abdominal isolada com o auxílio de um estereomicroscópio operacional (Leica). Depois de colocar ligaduras temporário em torno da aorta proximal e distal, um aortotomia é criado na bifurcação com a ponta de uma agulha de calibre 30. Um segmento de calor cônico da PE-10 tubos de polietileno é introduzido através da aortotomia e seguro. A luz aórtica é posteriormente perfundidos por 5-15 minutos a 100 mm Hg com o tipo contendo salina eu suína elastase pancreática (4,5 U / mL; Sigma Chemical Co.). Após a remoção do cateter de perfusão, o aortotomia é reparado sem constrição da luz.

Protocolo

1. Os ratos são anestesiados com isoflurano inalado 2.0-3.0ml / L.
2. O abdômen é raspado e limpo com álcool e betadine.
3. O rato é colocado em posição supina sobre o campo operatório.
4. Luvas estéreis são usadas pelo cirurgião, e os instrumentos utilizados foram esterilizados com esterilizador talão quente.
5. A incisão mediana abdominal longa é feita. Conteúdo abdominal são retraídos fora do abdômen com gaze estéril para expor a aorta abdominal.
6. A aorta abdominal é isolado a partir do nível da veia renal esquerda até a bifurcação.
7. Os ramos da aorta abdominal são expostos e ligados com 10-0 suturas. Todos os ramos da aorta dentro de 1,0 centímetro da bifurcação são ligadas.
8. Temporária 6,0 ligaduras de seda são colocados ao redor das partes proximal e distal da aorta
9. Aortotomia é criado na bifurcação com uma agulha de calibre 30.
10. Heat-cônico tubo de polietileno (PE-10) é introduzido através da aortotomia e garantiu com um empate.
11. Usando um saco de soro pendurado na altura de 136 cm para calibrar 100 mmHg, a aorta é preenchido com solução salina contendo 4,5 U / mL Tipo I elastase pancreática suína. A aorta dilata normalmente a 150-170% do seu diâmetro original durante a perfusão elastase 15/05 minutos.
12. O cateter de perfusão é então removido eo aortotomia fechada com uma sutura 10-0 para evitar a constrição.
13. Após a aortotomia está fechado, a ligadura distal é removido.
14. Se houver pouco ou nenhum sangramento da aortotomia reparado, a ligadura proximal for removido. A aorta expandiu enche de sangue imediatamente.
15. Os intestinos são retornados para o abdômen, ea ferida é fechada em duas camadas com 6-0 nylon / polipropileno.
16. 0,25% Bupivicaime gotas (appx uma gota para cada centímetro do tamanho da incisão) são colocados sobre a ferida e uma dose de Caprofen (5mg/kg) é administrada por via subcutânea.
17. O mouse é colocado em uma área quente e geralmente se recupera dentro de 15 minutos.

Figura 1. Result Representante da Elastase induzida AAA.

Discussão

Estudos anteriores observaram variação de lote para lote significativo no desenvolvimento de diferentes preparações AAA elastase comercial ^3. Assim, é fundamental para monitorar lotes de produção, bem como ter grupos de controle apropriados a fim de documentar a capacidade da preparação para induzir AAA.

Curiosamente, a susceptibilidade para o desenvolvimento deste modelo AAA é dependente da cepa do mouse usado ^3. O rato usado no vídeo atual é da cepa C57BL / 6, que tem...

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Elastase pancreática suína tipo I	Reagente	Sigma-Aldrich	E1250
Tubo de polietileno (PE-10)		BD Biosciences	427400
CHANGE-A-TIP		Bovie Medical Corporation	18010-00 (FST)	caneta de eletrocoagulação
LEICA MZ6		Leica Microsystems		estereomicroscópio
LEICA DFC290HD		Leica Microsystems		câmera USB
Image Pro Express ver. 6.0		Media Cybernetics Inc.		software