Os autores não têm nada a declarar.

wolbachia em drosophila infecção bacteriana

Wolbachia Bacterial Infection in Drosophila

Wolbachia em Drosophila infecção bacteriana

Meu nome é Voia Friedman. Sou pesquisadora associada na Universidade de Princeton. E hoje vou contar a vocês sobre alguns protocolos que desenvolvi para transinfectar, inicialmente para isolar, para retornar do héli de moscas infectadas e, posteriormente, ajudar a injetar o alimento contendo o héli em moscas não afetadas.Então, basicamente, este é um protocolo muito simples para isolar hemolinfa para análises básicas. Você usará este dispositivo da mepo, que contém um filtro que se coloca sobre um E. Basicamente, você precisa colocar, começando de cerca de cem moscas. Você anestesia as moscas, coloca-as no dispositivo com filtro, pode-se usar simplesmente um funil, o que facilitará muito a adição delas a este dispositivo, e depois as lava com etanol 70%.Você simplesmente retira, retira o futuro, pode descartar o etanol e, após a terceira lavagem, realiza a lavagem final com água molecular, pois não deseja que haja bactérias com traços de etanol. Bem, e então você simplesmente transfere para um novo tubo e, em seguida, centrifuga em um microcentrífugo, um micro real, por dois minutos. Depois disso, você pode injetar. Ele só alimenta moscas não afetadas.Então, basicamente, pegue uma fita adesiva dupla face; normalmente, essas fitas têm dois lados, sendo que um lado é adesivo e o outro não. Deixe o lado adesivo voltado para cima, pois é esse lado que você usará para colar as moscas em cima dela. E, basicamente, no aparato de gás, se você tiver essa luz acesa em cima, não haverá fluxo de gás, e as moscas acordarão se estiverem em cima da lâmina.Então você pode simplesmente direcionar o fluxo, criando uma pequena proteção, uma câmara com fita adesiva. Em seguida, direciona o gás sobre as moscas. Depois você coloca sua luz aqui com a fita e tem suas moscas.Cole as moscas na parte superior da fita, todas na mesma orientação, com a cabeça voltada para a direção de onde você trará a agulha. Assim, você pode passar diretamente sobre a asa e garantir que, como elas voam, não sairão voando. Se acordarem durante o procedimento, não queremos que saiam.Portanto, certifique-se de aplicar uma leve pressão com a ponta contra as asas da mosca na região da cauda. É aceitável se as asas forem danificadas. E quando você remover as moscas após a injeção, muito provavelmente elas perderão as asas de qualquer forma, mas sobreviverão.Isso pode ser útil porque você não vai perder as moscas; então ele coloca óleo mineral no micrômetro, na parte traseira da agulha, depois a injeção com a agulha polarizada, e então você pode simplesmente ajustar a pressão para trazer o material até a ponta da agulha. Eu injetei em algum lugar entre 10 e 15 nanolitros, mas, desde que eu seja consistente. Ok, então um detalhe importante nesse experimento é que a mosca, uma vez que o material está sendo injetado, quando você vê a agulha, ela precisa penetrar o máximo possível na parte superior do abdômen.Porque aqui, basicamente, quando a agulha penetra, você tem um espaço maior para movimentar para cima e para baixo. E, basicamente, se estiver mais próximo da cutícula, é menos provável que haja penetração em órgãos vitais durante o voo. É muito improvável, por exemplo, que você perfure um orifício no seu intestino, o que poderia matar o inseto durante a realização da cirurgia.Meu nome é Voia Friedman. Sou pesquisadora associada na Universidade de Princeton, no laboratório de Eric Hels. E hoje gostaria de falar com vocês sobre este protocolo que acabaram de ver, a demonstração.Este protocolo foi realizado porque queríamos comprovar que o UBA é capaz de atravessar tecidos. O UBA é um dos parasitas intracelulares mais bem-sucedidos da face da Terra, infectando de 20 a 70% dos insetos e muitas partículas.E também é muito importante em termos de doenças humanas porque infecta nematoides que transmitem doenças como a cegueira dos rios ou a filariose. Além disso, CCA é um endossimbionte obrigatório nesses vermes. E há um grande e intenso interesse no uso de CCA como meio para controlar doenças parasitárias transmitidas por mosquitos e outros vetores, como malária e dengue.Assim, este protocolo foi basicamente desenvolvido para demonstrar que, uma vez dentro da cavidade abdominal de uma mosca, as CCA podem atravessar tecidos e alcançar a linhagem germinativa. Então, basicamente, o que se pode observar aqui é o ovário de *Drosophila* e, uma vez presentes na gordura corporal, elas podem atravessar uma camada perineural rosa que envolve o ovário.Em seguida, eles atravessam uma camada muscular. Na verdade, um dos primeiros locais para onde eles entram dentro do ovário é a imagem da célula-tronco somática. Então, podem alcançar a linhagem germinativa.E esta bactéria é transmitida da mesma maneira que as mitocôndrias são transmitidas, ou seja, pela mãe, por meio dos citoplasmas presentes no óvulo. Portanto, é claro que elas precisam estar presentes na linhagem germinativa. É por isso que este protocolo foi desenvolvido.E este protocolo pode ser muito útil, pois tradicionalmente a forma pela qual as pessoas tentariam transinfectar wbaa seria basicamente pegar wbaa e introduzir uma nova espécie de inseto. Isso seria feito por meio de microinjeções no embrião. Porém, esses métodos são muito mais complicados.E basicamente aqui estamos apenas aproveitando a biologia dos o, já que eles são capazes de atravessar tecidos e migrar para os tecidos de células-tronco, podendo passar para a linhagem germinativa. Isso facilita a obtenção de UBA de certas espécies de insetos que estão infectadas, e que podem ser transmitidas a espécies não infectadas. Provavelmente, acho que é a própria injeção.Basicamente, é necessário ter cuidado para imobilizar a mosca o melhor possível. Estamos usando fita adesiva dupla face e é preciso inserir a agulha o mais próximo possível, e o mais paralelo possível à mosca, para não penetrar muito fundo. Dessa forma, é menos provável que a matemos após realizarmos a cirurgia.

Wolbachia em Drosophila infecção bacteriana

Neste artigo

Divulgações

Reimpressões e permissões

Etiquetas