Nós descrevemos um romance vermelho proteína fluorescente repórter (RFP) que se expressa especificamente na Drosophila. Detalhamos uma metodologia para a dissecção do disco imaginal olho e como este repórter pode ser utilizada para auxiliar na dissecção e identificação de tipos específicos de células no olho desenvolvimento.
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Artigo de método
A Novel Reporter RFP para ajudar na visualização do Disco Imaginal Eye em Drosophila
Neste artigo
Resumo
Protocolo
- O primeiro lugar uma gota de PBS em um prato Sylgard sob um microscópio de dissecação.
- Em seguida remover larvas várias vagando terceiro de um frasco ou garrafa com uma espátula e colocá-los na PBS.
- Para começar a dissecção usar suas pinças mão esquerda (se você for destro) para agarrar uma larva de dois terços do caminho para a posterior e depois usar o outro par para manter a boca escura ganchos coloridos no final da anterior.
- Agora puxe a larva movendo para além dos dois pares de pinças longe um do outro. O aparelho bucal deve vir longe do resto do corpo com o complexo de olho / cérebro em anexo.
- Para os discos mancha olho para corrigir os disc....
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Discussão
Dissecção do disco imaginal Drosophila olho é simples, mas pode levar algum tempo para dominar. Os passos críticos são a identificação do disco olho e sua dissecção longe do cérebro larval. Identificação do disco olho é mais fácil usar a linha dos olhos-RFP descrito aqui. Modificações possíveis são para remover o disco antenais ou a membrana peripodial, ou deixar o lobo óptico ligado a visualizar os axônios PR entrar no cérebro.
A linha dos olhos-RFP foi gerada por clonagem uma nove.......
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Agradecimentos
Este trabalho foi financiado pelo Kings College de Londres e da Royal Society.
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Referências
- Doroquez, D. B., Rebay, I. Crit Rev Biochem Mol Biol. 41 (6), 339-339 (2006).
- Kaul, A. K., Craig, G. M., McNeill, H., Bateman, J. M. , Forthcoming.
- Barolo, S., Castro, B., Posakony, J. W. Biotechniques. 36 (3), 436-436 (2004).
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Reimpressões e permissões
