Procedimento de transplante do epitélio mamário

Resumo

Este artigo demonstra o procedimento desenvolvido por DeOme KB Et al. (1959) eo procedimento poupando desenvolvido pela Brill B Et al. (2008) para limpar o quarto bloco de gordura mamária inguinal de um rato púbere em preparação para o transplante de fragmentos mamários, células epiteliais mamárias, ou nas células mamárias tumor.

Resumo

Este artigo descreve e compara o processo de apuramento de gordura pad desenvolvido pela DeOme KB et al. ¹ e poupando o procedimento desenvolvido por Brill B et al. ^2, seguido pelo procedimento de transplante mamárias epiteliais. O procedimento de transplante de mama é amplamente utilizado por biólogos mamárias porque ele tira vantagem do fato de que um maior desenvolvimento do epitélio mamário não ocorre até depois da puberdade. Menos 3 semanas de idade, o crescimento da árvore mamárias epiteliais se limita à vizinhança do mamilo ea almofada de gordura é em grande parte desprovida de epitélio mamário, mas por sete semanas de idade da árvore do epitélio ductal se estende por todo o bloco inteiro de gordura. Portanto, se esta pequena porção do bloco de gordura contendo epitélio, na região entre o mamilo eo nó de linfa, é removida a 3 semanas de idade, o epitélio endógena nunca vai preencher o pad mamárias gordura ea gordura abdominal é descrita como "apagada ". Neste momento, epitélio mamário de outra fonte pode ser transplantado no bloco limpo de gordura onde ela tem o potencial para estender mamário ductal árvores por todo o bloco de gordura. Este procedimento tem sido utilizado em muitos modelos experimentais, incluindo a análise do fenótipo de tumor no tecido mamário transgênicos epiteliais sem os efeitos de confusão do genótipo sobre todo o animal ^3, na identificação de células-tronco mamário através do transplante de células em diluição limite ^{de 4,5,} determinando se nodules hyperplastic proceder para tumores mamários ^6, e para avaliar o efeito da exposição a hormônios prévio sobre o comportamento do epitélio mamário ^7,8.

Três semanas os ratos são anestesiados anfitrião velho, limpo e contido em um estágio cirúrgico. Uma incisão médio-sagital é feita através da pele, mas não o peritônio, que se estende do púbis ao esterno. Cortes oblíquos são feitas através da pele da incisão médio-sagital do outro lado da pelve para cada perna. A pele é puxada para longe do peritônio para expor a glândula mamária inguinal 4. A gordura abdominal é limpo com a remoção do tecido adiposo anterior pad para o nó de linfa. Fragmentos de epitélio ou células epiteliais são transplantadas para o teclado limpo restantes gordura eo mouse está fechado.

Protocolo

1. Preparação do Epitélio Transplant

Tecido do doador frescos ou congelados epitelial pode ser transplantado para a almofada limpa de gordura, mas a preparação prévia do epitélio do doador congelado é mais conveniente, com uma redução mínima na eficiência de transplante (> 85% de eficiência). O protocolo para a preparação do epitélio do doador congelados é a seguinte:

Antes de preparar epitélio transplante de doadores, preparar a mídia congelar por epitélio e alíquota sobre 1ml em criotubos. Isto pode ser armazenado a 4 ° C por até seis meses até ser necessário. Congelamento de mídia contém DMEM/F12 media tampon....

Discussão

Neste relatório, apresentamos dois métodos alternativos para limpar o mouse pad mamárias de gordura na preparação para transplantes mamárias epiteliais. O procedimento padrão tem sido em uso desde o seu desenvolvimento em 1959 por DeOme et al. ¹ Enquanto mais invasivo, o método padrão é o método preferido para treinar o novato porque a estrutura e orientação da glândula mamária são facilmente visualizadas. No entanto, o procedimento poupador pode ser preferido pelo cirurgião mais experiente por causa.......