Os cordões umbilicais são usados para isolar as células do músculo liso por caminhos diferentes. Neste trabalho utilizou-se o tratamento enzimático de células musculares lisas isoladas.
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Artigo de método
Isolamento da Human Umbilical células musculares arteriais (HUASMC)
Neste artigo
Resumo
Resumo
O cordão umbilical humano (UC) é uma amostra biológica que pode ser facilmente obtida logo após o nascimento. Esta amostra biológica é, na maioria das vezes, descartada e sua coleção não implica qualquer risco acrescido para a saúde dos recém-nascidos ou a mãe s. Além disso há as questões éticas são levantadas. A UC é composta por uma veia e duas artérias do qual ambas as células endoteliais (CE)
Protocolo
- Artérias são obtidos a partir de peças UC de 3-7 cm.
- Geleia de Wharton que envolve as artérias foi cuidadosamente removido, cortando-a com uma tesoura.
- Uma agulha sem corte-extremidade de um diâmetro externo de 0,6-1mm foi inserido cerca de 7 mm de uma extremidade das artérias dissecadas.
- Para remover o sangue restante no interior dos vasos, as artérias são verticalmente realizada e perfundidos com, aproximadamente 20 a 40 mL, solução salina fisiológica (PSS), usando uma seringa de 20 ml conectada a uma agulha. Se necessário, esta etapa de lavagem foi repetida por várias vezes.
- O mesmo procedimento foi repetido utilizando RPMI 1640 suplementad....
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Discussão
O SMC pode ser usado como modelo para testes futuros com drogas constrictor, para isolar e caracterizar estruturalmente os canais de cálcio tipo L, para estudar os aspectos celulares e moleculares da função vascular e usá-los em engenharia de tecidos. SMCs e ECs são fundamentais para o desenvolvimento de novos biomateriais que podem ser usados na produção de semi vasos sanguíneos sintético para ser usado em humanos.
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Agradecimentos
Hospital Amato Lusitano, Castelo Branco Portugal.
Hospital Sousa Martins, Guarda Portugal.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| DMEM-F12 | Sigma-Aldrich | 095K8311 | |
| Soro bovino fetal (FBS) | Biochrom AG | 0117T | |
| RPMI 1640 | GIBCO, por Life Technologies | 3103806 | |
| Colágeno | Sigma-Aldrich | 067K2302 | |
| Antibiótico | 10 μL/ 1 mL de meio | ||
| Tesoura | Esterilizada | ||
| Agulha | Diâmetro de 0,6-1 mm | ||
| Seringa | 10 - 20 mL | ||
| Solução salina fisiológica (PSS) | 20-40 mL por artéria | ||
| Colagenase tipo I | Sigma-Aldrich | 047K1052 | 3 mL por artéria |
| Solução salina tamponada de Hank’s (HBSS) | Colagenase diluída | ||
| Solução salina tamponada com fosfato (PBS) | Aquecida a 37°C |
Referências
- Van Rijen, H. Gap junctions in human umbilical cord endothelial cells contain multiple connexins. The American journal of physiology. 272 (1 PT 1), C117-C117 (1997).
- Martín de Llano, J. Procedure to ....
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Reimpressões e permissões
