Fonte: Koemans, T. S., et al. Drosophila Condicionamento de namoro como medida de aprendizagem e memória. J. Vis. Exp. (2017).
Este vídeo descreve um ensaio de condicionamento clássico que testa o aprendizado e a memória em Drosophila, chamado condicionamento de namoro. O ensaio é baseado na redução do namoro masculino após sofrer uma rejeição por uma fêmea pré-acasalada não receptiva. O protocolo de exemplo mostra uma configuração para o procedimento que pode ser usada para avaliar a memória de curto e longo prazo.
Este protocolo é um trecho de Koemans et al., Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory, J. Vis. Exp. (2017).
NOTA: No protocolo descrito abaixo, uma réplica de coleta, treinamento e teste é descrita. Para testar a reprodutibilidade dos resultados, essas etapas devem ser repetidas em paralelo, em vários dias e com grupos separados de moscas (Tabela 1). O protocolo é baseado em um ciclo de vida de 10 dias do ovo ao adulto, o que é normal ao criar moscas em condições constantes de 25 °C, 70% de umidade e um ciclo claro/escuro de 12 horas. Todos os aspectos deste protocolo pressupõem que as condições sejam mantidas constantes durante todo o ensaio. Os horários são indicados como horas antes do acendimento das luzes (BLO) ou após o acendimento das luzes (ALO) na incubadora, pois isso pode ser convenientemente definido dependendo da hora do dia preferida do pesquisador. Utilizar gás CO2 apenas para a colheita inicial de moscas machos virgens e para a colheita de fêmeas pré-acasaladas. Este protocolo de condicionamento de namoro é composto pelas seguintes etapas:
1. Estabelecimento de culturas de coleção de fêmeas pré-acasaladas
2. Estabelecimento de culturas para a coleta de cobaias do sexo masculino
3. Preparação de blocos habitacionais (Figura 2A)
4. Estabelecimento de frascos de acasalamento para a produção de fêmeas pré-acasaladas padronizadas
5. Coleção de cobaias masculinas
6. Treinamento
7. Teste
8. Análise de dados de vídeo e estatística
<em>P{KK101437}VIE-260B</em> | VDRC | 101437 | Dhat-at-RNAi in 60100 background |
<em>P{KK108109}VIE-260B</em> | – | – | Control-RNAi in 60100 background (gift from K. Keleman) |
<em>w+, UAS-dcr2/yhh;;elav-Gal4 (III)</em> | – | – | panneuronal driver line |
Containers for plant tissue culture | VWR | 960177 | 175 mL plastic vials |
Folded filters | Whatman | 10311643 | Filter paper to enlarge area flies can pupate on |
Flat-bottom blocks (96-wells) | Qiagen | 19579 | Used for housing blocks |
MicroAmp Clear Adhesive Film | Applied Biosystems | 4306311 | PCR adhesive film as lid on flat-bottom blocks |
Razor blade | – | – | Any sharp will do |
Needle | – | – | 0.8 mm diameter |
Aspirator | – | – | Cut a 1mL pipet tip with scissors in order to have two pieces. The narrow tip of the pipettip is placed as fly entrance in a ~80 cm flexible hose. To prevent a fly from getting in the hose, a normal piece of cotton or small mesh gaze is placed in between the tip and the hose. The other half of the pipettip can be used as mouth piece at the end of the hose. |
Courtship chambers | – | – | file S1 can be opened with indicated CAD software |
Camcorder | Sony | – | camera specification: >4M pixels, full HD. |
For manual quantification, any simple video recording device has the potential to produce a video of sufficient quality to observe courtship behavior accurately. For automated quantification, there will likely be different requirements depending on the software to be used, and users should investigate this thoroughly if automated quantification is desired. | |||
<strong>Name</strong> | <strong>Company</strong> | <strong>Catalog Number</strong> | <strong>Comments</strong> |
power food | |||
Agar | Sigma | A7002 | |
Yeast | Bruggeman | – | |
Yeast extract | MP biomedicals | 0210330391 | |
Peptone | Sigma | P6838 | |
Sucrose | Sigma | S9378 | |
Glucose | Sigma | G7021 | |
MgSO4 | Sigma | M2643 | |
CaCl2 | Merck | 1023780500 | |
Methylparabene (CAUTION) | Sigma | H5501 | |
Propionic acid (CAUTION) | Sigma | P1386 | |
Demineralized water | – | ||
Yeast paste | – | yeast grains and water mixture in a 1:1 ratio | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
normal food | |||
Agar | MP biomedicals | 215017890 | |
Yeast | bruggeman | – | |
Corn flour | de Molen | – | |
Sugar | de Molen | – | |
Methylparabene (CAUTION) | Sigma | H5501 | |
Propionic acid (CAUTION) | Sigma | P1386 | |
Demineralized water | – |