drosófila Condicionamento de namoro: um método para testar o aprendizado e a memória em moscas

-Primeiro, isole machos únicos ingênuos ou não acasalados de Drosophila melanogastor. Então, para condicionar os machos, adicione uma fêmea que já tenha acasalado e, portanto, não seja receptiva ao namoro. O macho exibe comportamentos típicos de namoro, como orientar-se em direção a ela, segui-la, bater nela com uma pata dianteira e estender e vibrar sua asa para produzir a canção de namoro. Ele também pode tentar lamber e acasalar. Não importa os esforços, a fêmea permanece não receptiva e o macho experimenta uma rejeição. Assim, ele aprende a não cortejar uma fêmea previamente acasalada.

Para testar a memória do macho, deixe-o descansar e depois exponha-o a outra fêmea acasalada. O macho treinado não tentará cortejar essa mosca porque ele retém a memória da rejeição passada. No protocolo de exemplo, veremos como as moscas são tratadas durante as fases de treinamento e teste de um ensaio de condicionamento de namoro para avaliação da memória de curto e longo prazo.

- Comece anestesiando todos os adultos dos arquivos de acasalamento de quatro dias. Separe os sexos e transfira fêmeas pré-acasaladas para cada um dos 12 poços de uma fileira de um bloco habitacional. Em seguida, usando um aspirador e sem anestesia, remova os machos ingênuos de seus poços domésticos e transfira-os para os poços contendo as fêmeas pré-acasaladas. Repita esse processo na segunda linha para configurar mais 12 pares.

Para testar o aprendizado ou a memória de curto prazo, execute essa configuração ao amanhecer e deixe o período de treinamento durar uma hora. Para testar a memória de longo prazo, configure os pares quatro horas antes do amanhecer subjetivo e deixe o treinamento continuar por oito horas.

- Para que o aprendizado e a memória sejam estabelecidos, é importante que os machos não copulem, portanto, verifique periodicamente os pares durante o período de treinamento, para garantir que os machos estejam sendo rejeitados.

Quando o período de treinamento terminar, remova suavemente os machos dos poços usando um aspirador, não anestesia com dióxido de carbono. Carregue os machos em um novo bloco de alojamento. Para o experimento de aprendizagem, teste imediatamente os machos após o treinamento, sem período de descanso. Para o experimento de memória de curto prazo, permita aos machos uma hora de descanso antes de iniciar o estágio de teste. Para o experimento de memória de longo prazo, descanse os machos até o próximo amanhecer subjetivo.

Para se preparar para o estágio de teste do experimento, anestesie as fêmeas pré-acasaladas e transfira-as para um novo alimento normal vil. Aguarde pelo menos uma hora para que as moscas se recuperem da anestesia. Em seguida, prepare a configuração de teste. Certifique-se de ter os gravadores de vídeo prontos para registrar a atividade nas arenas de namoro.

Para iniciar o teste, use uma aspiração suave para transferir um macho de teste do bloco habitacional para a arena de namoro com as divisórias fechadas. Mova os orifícios de entrada entre as arenas até que todas as 18 arenas estejam carregadas com machos solteiros. Em seguida, usando a mesma técnica, transfira fêmeas pré-acasaladas individuais para cada uma das 18 arenas, mas para o lado oposto das divisórias. Agora, vire cuidadosamente a arena de namoro e coloque-a sob a câmera de vídeo com as aberturas do poço em direção à superfície branca do banco. Em seguida, remova as divisórias e inicie a gravação do vídeo. Registre pelo menos 10 minutos de atividade. Quando o experimento terminar, remova as moscas das arenas usando um vácuo e ventile as câmaras de namoro por pelo menos 10 minutos antes de serem reutilizadas.