Contagem de Unidades Formadoras de Colônias (UFCs): Quantificando Bactérias de Corpos de Moscas

Resumo

Fonte: Koyle, M. L., et al. Criando a mosca-da-fruta e Drosophila melanogaster sob condições axênicas e gnotobióticas. J. Vis. Exp. (2016).

A microbiota de Drosophila afeta o desenvolvimento, a imunidade e a fisiologia do animal. Este vídeo descreve um método para quantificar bactérias de moscas, determinando as unidades formadoras de colônias de preparações de corpo inteiro. O protocolo apresentado demonstra a técnica com moscas, criadas em condições gnotobióticas usando quatro espécies bacterianas.

Protocolo

Este protocolo é um trecho de Koyle et al., Criando a mosca-da-fruta Drosophila melanogaster sob condições axênicas e gnotobióticas, J. Vis. Exp. (2016).

1. Ovos descorionados e transferência para dieta estéril

1. Prepare o gabinete de biossegurança pulverizando o interior (incluindo as laterais) com etanol 70%. Limpe o fundo com um lenço de papel e esterilize o capuz com luz ultravioleta por ~ 15 min. Esterilize todos os suprimentos não biológicos (copos de amostra, pincel, pinça, recipiente de lixo, 400 ml de água esterilizada e 100 ml de hipoclorito de sódio a 0,6%) pulverizando com etanol e colocando ....

Resultados

Arquivo de código suplementar: Cálculos de amostra. Clique aqui para visualizar este arquivo (clique com o botão direito para fazer o download).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Levedura de cerveja	MP Biomédicos, LLC.	903312
glicose	Sigma Aldrich	158968-3KG
Ágar	Fisher - Laboratório Científico	mosca802010
Concentrado de suco de uva 100% da Welch's	Walmart ou outra mercearia	9116196
Gaiola: 32 onças Recipiente redondo translúcido de delicatessen	Loja Webstaurant	999L5032Y
Tampa de recipiente de delicatessen redonda translúcida	Loja Webstaurant	999YNL500
Garrafas de estoque	Genesee Científico	32-130
Droso-Plugues	Genesee Científico	49-101
Malha de nylon	Genesee Científico	Rolamento 57-102
Bucha de plástico	Depósito doméstico	100404002
Tampão plástico da bucha	Depósito doméstico	100153897
Copo de amostra	Parceiros MedSupply	K01-207067
Repetidor M4	Eppendorf	4982000322
Tubos de centrífuga de 50 ml	Tubos de centrífuga TrueLine	TR2003
Caixas de comida	EUA Científico	Rolamento 2316-5001
Matriz de lise D em massa	MP Biomédicos, LLC.	116540434
Ponteiras de pipeta de filtro, 300 μl	EUA Científico	1120-9810
Placas de Petri	Vendas de produtos de laboratório	M089303
etanol	Laboratórios Decon, INC.	2701
pincel	Walmart	Rolamento 5133
fórceps	pescador	Rolamento 08-882
Alvejante doméstico (6-8% de hipoclorito)	Walmart	550646751
Peptona Universal	Genesee Científico	20-260
Extrato de levedura	Fisher Científico	BP1422-500
Fosfato dipotássico	Sigma Aldrich	Rolamento P3786-1KG
Citrato de amônio	Sigma Aldrich	25102-500 ouros
Acetato de sódio	VWR	Rolamento 97061-994
Sulfato de magnésio	Fisher Científico	M63-500
Sulfato de manganês	Sigma Aldrich	10034-96-5
MRS em pó	Sigma Aldrich	69966-500G
Leitor de placas de 96 poços	BioTek (Época)	NA
Tubos de centrífuga de 1,7 ml	EUA Científico	1615-5500
Ponteiras de pipeta de filtro, 1.000 μl	EUA Científico	1122-1830
Placas de 96 poços	Greiner Bio-One	655101
Grânulos de cerâmica	MP Biomédicos, LLC.	Nº 6540-434
Homogeneizador de tecidos	MP Biomédicos, LLC.	116004500
Gabinete de Biossegurança Classe 1	Thermo Científico	Modelo 1395