Contagem de Unidades Formadoras de Colônias (UFCs): Quantificando Bactérias de Corpos de Moscas

- Primeiro, colete as moscas no estágio desejado de desenvolvimento e coloque-as em um tubo estéril. Para contar apenas a microbiota interna, esterilize o exterior das moscas submergindo-as em etanol 70%. Para medir a microbiota interna e externa, pule esta etapa de esterilização. Em seguida, triture as moscas em um pequeno volume de meio de crescimento bacteriano usando esferas de cerâmica e um homogeneizador de tecidos, ou manualmente com um pilão. Deve-se tomar cuidado para não introduzir bactérias de fontes externas, para evitar a contaminação das amostras.

Agora você deve ter uma mistura homogênea contendo bactérias que você pode cultivar. Aumente o volume do homogenato usando meio bacteriano líquido. Realize diluições em série do homogeneizado e coloque um volume constante dessas diluições no meio de crescimento sólido apropriado para suas bactérias. À medida que as bactérias crescem, as colônias se formam no prato. Encontre a diluição que tem um intervalo de 10 a 100 colônias para determinar as Unidades Formadoras de Colônias, ou UFC, da amostra.

No protocolo de exemplo, inocularemos moscas estéreis com uma cultura gnotobiótica ou bacteriana definida e coletaremos e mediremo