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1.Configuração do Campo Magnético com a Manipulação do Campo Magnético Unidimensional
- Ligue a unidade de alimentação (Figura 1A).
- Coloque o túnel enrolado no local onde o protocolo reotático será realizado (seção 3), mas mantenha-o desconectado do aparelho de natação (Figura 1A). Coloque uma sonda magnética conectada com um Gauss/Teslâmetro dentro do túnel e verifique qual tensão é necessária para obter o valor do campo magnético escolhido ao longo do eixo maior do túnel.
NOTA: Devido às propriedades magnéticas de um solenóide, o campo é razoavelmente uniforme dentro do túnel; Isso pode ser verificado movendo lentamente a sonda horizontal e verticalmente.
- Desconecte a sonda e conecte o túnel de fluxo ao aparelho de natação.
- Comece com o protocolo reotático (seção 3).
2. Configuração do Campo Magnético com a Manipulação do Campo Magnético Tridimensional
- Ligue os drivers de CPU, DAC e bobina (Figura 1B).
- Defina o campo magnético escolhido em cada um dos três eixos (x, y e z).
- Coloque o túnel no centro do conjunto de pares de Helmholtz.
- Comece com o protocolo reotático (seção 3).
3. Ensaio da reotaxia do peixe-zebra na câmara de escoamento
- Transfira de um a cinco peixes para o túnel de fluxo usando um tanque de 2 L com as laterais e o fundo obscurecidos.
- Ligue a bomba e ajuste a vazão no túnel para 1.7 cm/s.
nota: Essa água lenta manterá a água no túnel oxigenada e facilitará a recuperação dos animais.
- Deixe os animais se aclimatarem ao túnel de natação por 1 h.
- Inicie a gravação em vídeo do comportamento dos peixes no túnel.
nota: Usamos uma câmera (por exemplo, Yi 4K Action) com controle remoto (por exemplo, Bluetooth) e salvamos o vídeo como .mpg (30 quadros/s).
- Iniciar o aumento gradual da vazão de acordo com o protocolo experimental escolhido (1,3 cm/s neste estudo; Figura 2).
NOTA: Para este protocolo, usamos baixas taxas de fluxo que, para o peixe-zebra, variam de 0 a 2,8 BL (comprimentos do corpo) / s. Essas velocidades de fluxo estão na faixa inferior de taxas de fluxo que induzem a natação orientada contínua em peixe-zebra (3% a 15% da velocidade crítica de natação [Ucrit]). O uso de baixas vazões (seguindo o protocolo de Brett) está ligado às características comportamentais específicas dessa espécie na presença de correntes de água. O peixe-zebra tende a nadar ao longo do eixo principal da câmara, girando com frequência, mesmo na presença de fluxo de água, e tende a nadar tanto a montante quanto a jusante. Esse comportamento é afetado pela vazão de água, desaparecendo em velocidades relativamente altas (>8 BL/s), quando os animais nadam continuamente voltados para a montante (resposta reotática positiva total). Deslocamentos verticais e transversais são muito raros.
- Realize a morfometria dos animais (sexo e comprimento total [TL], comprimento do garfo [FL] ou BL) em fotos de peixes em uma câmara morfométrica.
- Selecione a imagem apropriada.
- Abra a imagem no ImageJ.
- Observe o sexo do animal (o peixe-zebra macho é esguio e tende a ser amarelado, enquanto as fêmeas são mais arredondadas e tendem a ter colorações azuis e brancas).
- Clique em Analisar > Definir escala e defina a escala da imagem em centímetros, usando todo o comprimento horizontal do túnel como referência.
- Clique em Analisar > Medir e registre o comprimento linear do animal.
- Calcule seu peso corporal (PN).
nota: BW é calculado a partir de relacionamentos sexo-FL-BW previamente construídos no laboratório ou de metadados. Todo o procedimento evita o estresse de manipulação dos animais.
