Teste de preferência claro-escuro: um método para estudar o comportamento relacionado à ansiedade em peixe-zebra

Neste artigo

Resumo

Fonte: Holcombe, A., et al. Um novo método de administração de medicamentos a múltiplos peixes-zebra (Danio rerio) e a quantificação da abstinência. J. Vis. Exp.(2014)

O vídeo descreve o ensaio de preferência claro-escuro para estudar o comportamento relacionado à ansiedade em peixe-zebra após a exposição ao etanol.

Protocolo

1. Teste comportamental

Obtenha uma arena clara/escura com 9,5 cm de largura por 55 cm de comprimento e 9,5 cm de profundidade com piso branco à prova d'água (Figura 1B). Fixe papel antirreflexo à prova d'água branco e preto nas paredes internas da arena usando velcro, com metade da arena coberta de branco e metade coberta de preto. Encha a arena até uma profundidade de 5 cm com água do habitat a uma temperatura de 25-28 °C. Mantenha essa temperatura durante o teste.
Minimize os estímulos visuais externos construindo um recinto branco de três lados para a arena ser situada. Certifique-se de que a área de teste tenha iluminação difusa que não cause reflexos na superfície da água, mas seja suficientemente brilhante para o software de rastreamento de movimento ou quantificação manual post-hoc de imagens de vídeo.
Coloque a arena no recinto e defina os parâmetros de gravação e análise de movimento do software de rastreamento de comportamento. Defina a duração do teste para 5-15 min, dependendo da pergunta da pesquisa.
NOTA: Aqui, usamos 5 min.
Transporte o grupo de peixes a serem testados para a área de pesquisa no tanque de habitat e coloque-os fora do recinto da arena. Aclimate o peixe por 10 min.
Pegue suavemente um peixe do grupo apropriado e coloque no centro da arena clara/escura, certificando-se de soltar o peixe quando estiver posicionado paralelamente ao eixo longo da arena para evitar inclinar o peixe para a zona clara ou escura.
Comece a registrar o comportamento imediatamente após o animal ser solto. Fique atento a quaisquer problemas de software com o rastreamento do peixe ou para peixes pulando ou congelando. Gire a arena 180° depois que metade dos sujeitos tiver sido testada para evitar confusão devido a vieses resultantes de qual extremidade da arena está orientada para a extremidade aberta do recinto.
Após o término do teste, pesque suavemente e remova os peixes da arena para um tanque de retenção ou tanque de habitat.

2. Análise

Examine o tempo gasto em zonas claras versus escuras. Para cada grupo e cada peixe, obtenha o tempo relativo gasto nas zonas claras e escuras e analise usando um teste t de uma amostra (ou teste de classificação com sinais de Wilcoxon para dados não paramétricos; diferença de (metade do tempo total de teste) 150 seg) para determinar se os grupos preferem significativamente uma área sobre a outra.
Para comparar preferências, calcule um índice de preferência subtraindo o tempo gasto na zona clara do tempo gasto na zona escura e compare as diferenças entre os grupos. Os testes t podem ser usados para comparar dois grupos. Compare vários grupos com uma análise de variância unidirecional utilizando o teste post hoc HSD de Tukey quando necessário (ou teste de Kruskal-Wallis com o teste post hoc de comparação múltipla de Dunn para dados não paramétricos).
Compare a velocidade, o número de transições de zona, os meandros e a imobilidade entre os grupos. Use a análise de variância unidirecional utilizando o teste post hoc HSD de Tukey quando necessário (ou teste de Kruskal-Wallis com o teste post hoc de comparação múltipla de Dunn para dados não paramétricos).

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Resultados

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Figura 1: Procedimento de transferência e a arena Claro/Escuro. Essas fotos ilustram o procedimento de transferência. (A) Primeiro, os peixes estão situados no tanque de transferência (à esquerda). O tanque de dosagem contendo etanol é retratado (à direita). (BC) Mover o peixe do tanque de transferência para a solução de etanol requer que o pesquisador levante a inserção de desova para f...