Ensaio de evitação e timotaxia do peixe-zebra: um método de alto rendimento para examinar o comportamento larval em resposta a estímulos visuais aversivos

Neste artigo

Resumo

Fonte: Richendrfer, H., et al. Análises comportamentais automatizadas de alto rendimento em larvas de peixe-zebra. J. Vis. Exp.(2013)

O vídeo descreve o ensaio de evitação e tigmotaxia de larvas de peixe-zebra. O vídeo examina o comportamento das larvas de peixe-zebra em resposta ao estímulo visual aversivo.

Protocolo

1. Captura de imagem

Até 20 larvas podem ser colocadas em cada faixa das placas. Normalmente, 5 larvas por pista são usadas para facilitar o rastreamento mais preciso da velocidade de natação e reduzir o número de larvas necessárias por experimento. As pistas podem ser preenchidas com água de ovo com ou sem produtos farmacêuticos ou tóxicos, dependendo do experimento. No entanto, as faixas não devem ser preenchidas até que sejam colocadas nos gabinetes de imagem; Isso evitará o transbordamento. Para consistência, as larvas devem ter um período de aclimatação de dez minutos após serem colocadas nos moldes de agarose e posicionadas em cima da tela do laptop. Mover eficientemente as larvas da placa de Petri para a pista de agarose ajudará a reduzir o estresse das larvas. Isso é mais fácil quando as larvas estão alojadas em tanques rasos ou placas de Petri.
Os gabinetes de imagem incluem uma câmera digital Canon usada para fotografia com lapso de tempo e um laptop. A câmera deve ser colocada na parte superior do gabinete e apontada para a parte inferior do gabinete, onde um laptop com tela de 15.6 polegadas deve ser colocado com a tela voltada para cima (Figura 1). Quatro placas devem ser posicionadas manualmente diretamente na parte superior da tela do laptop. Neste momento, as pistas podem ser completadas com água de ovo ou tratamento químico para que fiquem niveladas com o topo da pista (para eliminar sombras nas bordas das pistas nas imagens).
Uma apresentação em PowerPoint é usada como um estímulo aversivo para as larvas. No passado, bolas vermelhas em movimento eram mostradas às larvas de peixe-zebra em 6 ou 12 placas de vários poços. O PowerPoint atual começa com um fundo branco em branco por 15 minutos, seguido por 15 minutos de uma barra vermelha em movimento na metade superior da placa (Figura 2). Para eliminar o superaquecimento das larvas, é melhor comprar um laptop com temperatura de tela que não ultrapasse 28 °C. Para evitar a evaporação do líquido dentro das faixas de agarose, o tempo máximo de imagem deve ser mantido abaixo de uma hora.
A câmera digital deve ser programada para fotografia com lapso de tempo, tirando fotos a cada 6 segundos para um total de 300 imagens por experimento. No entanto, a frequência e a duração podem ser ajustadas dependendo do experimento e da quantificação comportamental. No passado, tempos de imagem estendidos eram empregados usando intervalos mais longos entre cada imagem. A câmera pode ser configurada para uma resolução mais baixa para imagens em velocidade de vídeo (30 quadros por segundo). Embora a resolução mais baixa limite as gravações a uma única placa multipoços, as gravações de vídeo são apropriadas para imagens de eventos de natação rápida.

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Resultados

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Figura 1. Gabinetes de imagem. Os gabinetes de imagem foram especialmente construídos em nosso laboratório e usados para análises comportamentais de alto rendimento. Uma câmera digital de 15 megapixels foi anexada à parte superior do gabinete voltada para baixo para coletar imagens de lapso de tempo das larvas em placas multilane colocadas em cima da tela de um laptop. Entre as placas e a tela há um difusor de plástico q...