Ablação hepática direcionada: induzindo a morte de hepatócitos com metronidazol em larvas de peixe-zebra transgênico

Resumo

Fonte: Choi T.Y., et al. Ablação específica de hepatócitos em peixe-zebra para estudar a regeneração hepática de origem biliar. J. Vis. Exp. (2015)

O artigo descreve a ablação hepática direcionada, um método para induzir a morte de hepatócitos com metronidazol em larvas transgênicas de peixe-zebra. O protocolo de amostra descreve o processo de geração, manipulação e avaliação da ablação hepática direcionada em peixe-zebra.

Protocolo

1. Preparação de embriões/larvas

1. Transferir 100 embriões para uma placa de Petri de 100 mm com 25 ml de água do ovo. Não conservar mais de 100 embriões por placa de Petri e criá-los a 28 °C.
2. Para inibir a pigmentação, adicione feniltioureia (PTU) nas placas de Petri antes de 10 horas após a fertilização (hpf) e crie embriões/larvas até 80 hpf. A concentração final de PTU é de 0,2 mM.
   CUIDADO: PTU é tóxico. Use de acordo com as diretrizes de manuseio apropriadas.
3. Anestesiar as larvas adicionando éster etílico de ácido 3-aminobenzóico (Tricaine), a uma concentração final de 0,016%, nas placas de Petri. Em seguida, ....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Pó de éster etílico de ácido 3-aminobenzóico (tricaína)	Sigma-Aldrich	Rolamento A5040	Faça estoque de tricaína a 0,4% (15 mM): Leve 0,4 g de tricaína a 100 mL com água de ovo. Ajuste para pH 7.
Dimetilsulfóxido (DMSO)	Sigma-Aldrich	D8418
Metronidazol	Sigma-Aldrich	M1547
N-feniltioureia (PTU)	Sigma-Aldrich	Pág. 7629
Placa de Petri de 100 x 15 mm	Denville Scientific Inc.	M5300
água de ovo			0,3 g/L de sais marinhos 'Instant Ocean' e 0,5 mM CaSO4 em água destilada.
microscópio de epifluorescência	Leica Microsystems	M205FA