Montagem em ágar: um método básico de montagem de embriões vivos de peixe-zebra para imagens de longo prazo

Resumo

Fonte: Hagedorn E. J., et al. Geração de embriões de peixe-zebra parabióticos por fusão cirúrgica de blástulas em desenvolvimento. J. Vis. Exp. (2016).

Este vídeo descreve instruções passo a passo sobre a montagem de embriões vivos de peixe-zebra em placa de 6 poços usando agarose de baixo ponto de fusão. Ele também fornece o processo para adquirir imagens de embriões vivos e analisá-los usando software.

Protocolo

1. Configuração do microscópio, aquisição, processamento e análise de imagens

1. Prepare agarose de baixo ponto de fusão (LMP) a 0,8%: Adicione 0,8 g de agarose LMP a 100 ml de E3 e aqueça até dissolver totalmente. Enquanto estiver quente, alíquota de 1 ml de agarose LMP em tubos de microcentrífugas de 1,5 ml em um bloco de aquecimento a 37 °C. A agarose LMP permanecerá fundida a 37 ° C. Adicione 40 μl de 4 mg / ml (25x), pH 7,0 de tricaína a cada alíquota de 1 ml de agarose LMP a 37 ° C. NOTA: Se estiver trabalhando com uma cepa pigmentada, adicione 20 μl de PTU a 0,15% (50x) a cada alíquota de 1 ml.
   1. Conservar a ....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Agarose LMP (Agarose LMP ultrapura)	Invitrogen	16520100
Tricaína (pó) (Tricaine Methanesulfonato, Tricaine-S)	Química Ocidental Inc	EM 222
Placas de 6 poços com fundo de vidro usadas para imagens	MatTek	P06G1.5-20-F
Bomba de pipeta de 10 ml (verde) (pipetador de bomba de pipeta)	Novatech Internacional	Rolamento F37898-0000