Optogenética do peixe-zebra: ativando neurônios somatossensoriais geneticamente modificados para estudar respostas comportamentais larvais

Neste artigo

Resumo

Fonte: Palanca A. M. S., et al. Ativação optogenética de neurônios somatossensoriais de peixe-zebra usando ChEF-tdTomato. J. Vis. Exp. (2013).

Este vídeo descreve técnicas optogenéticas ativando neurônios somatossensoriais geneticamente modificados e registrando a resposta comportamental provocada com uma câmera de vídeo de alta velocidade.

Protocolo

1. Monte larvas para experimentos de comportamento

Faça 1,5% de agarose de baixo ponto de fusão em ddH2O e armazene em um bloco de calor de 42 ° C para evitar que solidifique.
Usando uma pipeta Pasteur de vidro, transfira uma das larvas pré-selecionadas para um tubo de agarose de baixo ponto de fusão a 1,5% com o mínimo possível de água azul/embrião.
Transfira as larvas em uma gota de agarose para uma pequena placa de Petri.
Sob um microscópio de dissecação, posicione a larva dorsal para cima.
Quando a agarose solidificar, corte a agarose com uma lâmina de barbear fina (bisturi # 11), deixando uma fa....

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Resultados

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Figura 1. Diagrama de uma larva de peixe-zebra montada e neurônios representativos envolvidos na resposta ao toque larval. As larvas de peixe-zebra foram parcialmente montadas em 1,5% de baixa acarose de fusão (representada por linhas tracejadas ao redor da porção rostral da larva). Um neurônio trigêmeo (na cabeça) e um neurônio Rohon-Beard (no tronco) são representados em vermelho. As células de Mauthner são delineadas .......