Eletrofisiologia do peixe-zebra adulto: um método para medir a atividade elétrica extracelular de neurônios in vivo

Resumo

Fonte: Johnston, L., et al. Registro eletrofisiológico no cérebro de peixe-zebra adulto intacto. J. Vis. Exp. (2013)

O protocolo descreve o procedimento para realizar eletrofisiologia em peixe-zebra adulto. Este método pode ser usado para medir a atividade neural in vivo.

Protocolo

1. Eletrofisiologia

1. Desligue a torneira de parada de intubação e desconecte rapidamente a trava Luer que conecta a base de intubação ao gotejamento de tricaína.
   1. Mova a configuração de intubação intacta para o microscópio de eletrofisiologia e conecte-a ao sistema de perfusão.
   2. Ligue a água do habitat e perfunda a uma taxa de 1 ml / min por ~ 1 hora, a fim de lavar a tricaína.
2. Usando um micromanipulador sob controle visual, posicione o eletrodo secundário de forma que a ponta do eletrodo possa ser inserida na narina do animal ou no mergulho atrás da mandíbula superior.
3. Insira a agulha do eletrodo primário na abertura da craniotomia. Insira a agulha no tecido, de modo que a ponta fique posicionada bastante superficialmente dentro do tecto óptico.
   1. Se o eletrodo for muito profundo, o sinal elétrico pode ser pequeno.
4. Colete e analise a diferença elétrica registrada entre os eletrodos de referência primário e secundário. Este processo permitirá a obtenção de gravações extracelulares.
   1. Colete os dados no modo livre de lacunas a uma taxa de amostragem de 5 kHz, com um filtro passa-baixo de 0,1 kHz e um filtro passa-alta de 1 Hz.
   2. Não comece a registrar a atividade eletrofisiológica até que a água do habitat tenha perfundido por um mínimo de 45 min.
   3. Registre uma linha de base de atividade nativa por pelo menos 15 minutos antes da adição de drogas experimentais. Comece a perfusão com drogas experimentais de escolha e registre pelo tempo desejado. Em preparações saudáveis, é possível registrar a atividade neurológica por 2-3 horas.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Água do habitat			pH 7,0-7,4, condutividade de 400-450 μS; mantido por Instant Ocean e Bicarbonato de sódio
0,4% de Tricaine Tamponada	Sigma-Aldrich	E10521	pH 7,2-7,4; armazenado a -20 oC
Tubos de seringa Luer lock de 60 ml	Becton, Dickinson e Companhia	309653
Torneiras de 3 vias com conexões Luer
0,010 em fio de prata	Sistemas AM, Inc.
Suporte de eletrodo da série Q
Placa de Petri Fisherbrand 100 mm x 15 mm	Fisher Científico	NC9299146
34 G Agulha chanfrada	Instrumentos de precisão mundiais, Inc.	NF34BV
37 cm x 42 cm Kimwip	Profissional da Kimberly-Clark	TW31KEM
Tubo de 1/8 de diâmetro
Tubo de 1 mm de diâmetro
Microscópio (Leica MZ APO)	Outro microscópio pode ser usado