in vivo Eletroporação: um método específico do local para transfectar o peixe-zebra

Neste artigo

Resumo

Fonte: Durovic, T., et al. Método de eletroporação para entrega in vivo de DNA de plasmídeo no telencéfalo de peixe-zebra adulto. J. Vis. Exp. (2019).

Este vídeo descreve a eletroporação in vivo, que é uma técnica de entrega de DNA em células ependimogliais em peixes-zebra adultos.

Protocolo

1. Eletroporação

Retire o peixe da configuração de injecção enquanto o mantém na esponja.
Mergulhe o lado interno da ponta dos eletrodos no gel de ultrassom.
Cubra o telencéfalo do peixe com uma pequena quantidade de gel de ultrassom.
Posicione a cabeça do peixe entre os eletrodos, colocando o eletrodo positivo no lado ventral da cabeça do peixe e o eletrodo negativo no lado dorsal (Figura 1C), enquanto ainda segura o corpo do peixe na esponja. Isso define a direção do fluxo da corrente necessária para eletroporar a ependimoglia, posicionada na zona subventricular.
Pressione os eletrodos com suavidade e precisão contra o telencéfalo (Figura 1 C). Administre a corrente com o pedal. Segure os eletrodos no lugar até que todos os cinco pulsos terminem.

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Resultados

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Figura 1: Representação esquemática da seção coronal do telencéfalo evertido do peixe-zebra. (A) Esquema de uma seção coronal do telencéfalo do peixe-zebra, destacando a posição das células ependimogliais, que revestem a superfície ventricular e constroem a parede ventricular ventral. A camada ependimária dorsal está unindo os dois hemisférios e cobrindo o ventrículo (V), localizado entre duas camadas ce...