Injeção intraperitoneal: um método de administração de solução na cavidade abdominal de um peixe-zebra adulto

Resumo

Fonte: Luukinen, H., et al. Modelando a tuberculose em peixes-zebra adultos infectados com Mycobacterium marinum. J. Vis. Exp. (2018).

Este vídeo descreve uma técnica de injeção intraperitoneal, um método para administrar soluções na cavidade abdominal de peixe-zebra adulto.

Protocolo

1. Infecção experimental por M. marinum com injeção intraperitoneal

1. Pipetar uma gota de 5 μL da solução bacteriana diluída para um pedaço de filme de parafilme e puxar a gota para uma agulha de insulina de 30 G.
2. Use peixes selvagens de 5 a 8 meses de idade e peixes mutantes rag1−/−hu1999 para o experimento. Anestesiar o peixe-zebra adulto na água do tanque com éster etílico de ácido 3-aminobenzóico a 0,02% (pH 7,0). Posicione o lado ventral do peixe para cima em uma fenda em um plástico espumado úmido.
   NOTA: Peixes rag-/- mutantes não são capazes de sofrer recombinação somática e produzir células T e B funcionais.
3. Injete a agulha entre as barbatanas pélvicas em um ângulo de aproximadamente 45°. Mantenha a abertura da agulha para cima para observar que toda a abertura está dentro da cavidade abdominal. Injete lentamente a suspensão bacteriana e remova cuidadosamente a agulha.
   nota: Caso o marcador vermelho esteja vazando do peixe após a injeção, exclua o peixe do experimento.
4. Imediatamente após a injeção, transfira o peixe para um tanque de recuperação com água fresca do tanque.
5. Colher amostras da suspensão bacteriana em placas 7H10 de 15 em 15 minutos da alíquota bacteriana em utilização e incubar as bactérias a 29 °C durante 5 dias e verificar a dose de infecção contando as colónias nas placas.
6. Verifique o bem-estar dos peixes regularmente e sacrifique qualquer peixe com sintomas da infecção com concentração superior a 0,02% de éster etílico do ácido 3-aminobenzóico (pH 7,0).
   nota: Aproximadamente, 7% dos peixes-zebra adultos infectados com 34 ± 15 UFC e 30% dos peixes-zebra infectados com 2029 ± 709 UFC terão apresentado sintomas em 8 semanas. Os sintomas podem incluir natação anormal, falta de resposta ao toque, respiração ofegante, edema ou perda de peso observável.
7. Manter o peixe-zebra de acordo com os padrões comuns.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Mycobacterium marinum	Coleção American Type Culture	ATCC 927
Vermelho de fenol	Sigma-Aldrich	Pág. 3532
Comprimidos salinos tamponados com fosfato (PBS)	Sigma-Aldrich	P4417-50TAB
Ágar Middlebrock 7H10	BD, Thermo Fisher Científico	11799042
éster etílico do ácido 3-aminobenzóico (pH 7,0)	Sigma-Aldrich	Rolamento A5040
Agulha de insulina Omnican 100 30 G	Braun	9151133
Seringa de 1 ml	Henke Sass Wolf	Rolamento 4010.200V0