1. Infecção experimental por M. marinum com injeção intraperitoneal
<ol>
	<li>Pipetar uma gota de 5 μL da solução bacteriana diluída para um pedaço de filme de parafilme e puxar a gota para uma agulha de insulina de 30 G.</li>
	<li>Use peixes selvagens de 5 a 8 meses de idade e peixes mutantes rag1−/−hu1999 para o experimento. Anestesiar o peixe-zebra adulto na água do tanque com éster etílico de ácido 3-aminobenzóico a 0,02% (pH 7,0). Posicione o lado ventral do peixe para cima em uma fenda em um plástico espumado úmido. 
	NOTA: Peixes rag-/- mutantes não são capazes de sofrer recombinação somática e produzir células T e B funcionais.</li>
	<li>Injete a agulha entre as barbatanas pélvicas em um ângulo de aproximadamente 45°. Mantenha a abertura da agulha para cima para observar que toda a abertura está dentro da cavidade abdominal. Injete lentamente a suspensão bacteriana e remova cuidadosamente a agulha. 
	nota: Caso o marcador vermelho esteja vazando do peixe após a injeção, exclua o peixe do experimento.</li>
	<li>Imediatamente após a injeção, transfira o peixe para um tanque de recuperação com água fresca do tanque.</li>
	<li>Colher amostras da suspensão bacteriana em placas 7H10 de 15 em 15 minutos da alíquota bacteriana em utilização e incubar as bactérias a 29 °C durante 5 dias e verificar a dose de infecção contando as colónias nas placas.</li>
	<li>Verifique o bem-estar dos peixes regularmente e sacrifique qualquer peixe com sintomas da infecção com concentração superior a 0,02% de éster etílico do ácido 3-aminobenzóico (pH 7,0). 
	nota: Aproximadamente, 7% dos peixes-zebra adultos infectados com 34 ± 15 UFC e 30% dos peixes-zebra infectados com 2029 ± 709 UFC terão apresentado sintomas em 8 semanas. Os sintomas podem incluir natação anormal, falta de resposta ao toque, respiração ofegante, edema ou perda de peso observável.</li>
	<li>Manter o peixe-zebra de acordo com os padrões comuns.</li>
</ol>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Mycobacterium marinum </td>
			<td>Coleção American Type Culture </td>
			<td>ATCC 927</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vermelho de fenol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Pág. 3532</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Comprimidos salinos tamponados com fosfato (PBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4417-50TAB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ágar Middlebrock 7H10</td>
			<td>BD, Thermo Fisher Científico</td>
			<td>11799042</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>éster etílico do ácido 3-aminobenzóico (pH 7,0)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Rolamento A5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agulha de insulina Omnican 100 30 G</td>
			<td>Braun</td>
			<td>9151133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seringa de 1 ml</td>
			<td>Henke Sass Wolf</td>
			<td>Rolamento 4010.200V0</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

injeção intraperitoneal: um método de administração de solução na cavidade abdominal de um peixe-zebra adulto

Fonte: Luukinen, H., et al. <a href="https://www.jove.com/v/58299/" target="_blank">Modelando a tuberculose em peixes-zebra adultos infectados com Mycobacterium marinum</a>. J. Vis. Exp. (2018).
Este vídeo descreve uma técnica de injeção intraperitoneal, um método para administrar soluções na cavidade abdominal de peixe-zebra adulto.

Injeção intraperitoneal: um método de administração de solução na cavidade abdominal de um peixe-zebra adulto

Fonte: Luukinen, H., et al. Modelando a tuberculose em peixes-zebra adultos infectados com Mycobacterium marinum.  J. Vis. Exp. (2018).
Este vídeo descreve um ...

- Jejue um peixe adulto por 24 horas antes da injeção para esvaziar o trato gastrointestinal e criar espaço adicional no abdômen. No dia do procedimento, anestesie o peixe com tricaína e coloque-o em uma fenda em uma esponja úmida com o lado ventral voltado para cima.
Em seguida, pipete a quantidade desejada de solução injetável em um pedaço de filme de laboratório e puxe-o para uma agulha de insulina. Posicione a agulha entre as nadadeiras pélvicas em um ângulo de 45 graus em relação ao eixo ântero-posterior do corpo e empurre-a suavemente na linha média. Avance a agulha aproximadamente 1 a 2 milímetros na cavidade abdominal, o espaço entre a parede abdominal e os órgãos internos, e injete lentamente a solução de interesse. Aguarde cinco segundos antes de retirar a agulha para evitar qualquer derramamento. Agora, remova cuidadosamente a agulha.
Após a injeção, transfira rapidamente o peixe para um tanque de recuperação contendo água fresca do tanque. Se o peixe não começar a nadar imediatamente, gire a água perto das guelras para ajudá-lo a se recuperar da anestesia. No protocolo de exemplo, injetaremos uma solução de mycobacterium marinum em peixes mutantes RAG1 para estudar a infecção.
- Primeiro, canalize uma gota de 5 microlitros da solução bacteriana diluída para um pedaço de filme de parafina. Em seguida, puxe a gota para uma agulha de insulina de calibre 30. Use um peixe de cinco a oito meses de idade para este experimento, sendo um peixe do tipo selvagem e o outro um peixe mutante RAG.
Posicione esses peixes com o lado ventral para cima nas fendas de um pedaço de espuma de plástico úmido. Injete a agulha de insulina entre as nadadeiras pélvicas em um ângulo de 45 graus. Mantenha a abertura da agulha para cima para garantir que toda a abertura esteja dentro da cavidade abdominal. Em seguida, injete lentamente a solução bacteriana. Depois disso, remova cuidadosamente a agulha e transfira imediatamente o peixe para um tanque de recuperação cheio de água fresca do tanque.
Colher amostras da alíquota bacteriana utilizada de 15 em 15 minutos em placas 7H10. Incube essas amostras a 29 graus Celsius por cinco dias para verificar a dose de infecção. Verifique o bem-estar dos peixes regularmente, certificando-se de sacrificar qualquer peixe com sintomas de infecção, incubando-os em água com mais de 0,02% de éster etílico de ácido 3-aminobenzóico.

intraperitoneal-injection-method-solution-delivery-into-abdominal

Research

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biology

Danio rerio (zebrafish)

Adult

Intraperitoneal Injection: A Method of Solution Delivery into the Abdominal Cavity of an Adult Zebrafish

8.3K visualizações. - Jejue um peixe adulto por 24 horas antes da injeção para esvaziar o trato gastrointestinal e criar espaço adicional no abdômen. No dia do procedimento, anestesie o peixe com tricaína e coloque-o em uma fenda em uma esponja úmida com o lado ventral voltado para cima. Em seguida, pipete a quantidade desejada de solução injetável em um pedaço de filme de laboratório e puxe-o para uma agulha de insulina. Posicione a agulha entre as nadadeiras pélvicas em um ângulo de 45 grau...

Injeção intraperitoneal: um método de administração de solução na cavidade abdominal de um peixe-zebra adulto

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Name	Company	Catalog Number
Mycobacterium marinum	Coleção American Type Culture	ATCC 927
Vermelho de fenol	Sigma-Aldrich	Pág. 3532
Comprimidos salinos tamponados com fosfato (PBS)	Sigma-Aldrich	P4417-50TAB
Ágar Middlebrock 7H10	BD, Thermo Fisher Científico	11799042
éster etílico do ácido 3-aminobenzóico (pH 7,0)	Sigma-Aldrich	Rolamento A5040
Agulha de insulina Omnican 100 30 G	Braun	9151133
Seringa de 1 ml	Henke Sass Wolf	Rolamento 4010.200V0