Modelo de cardiomiopatia de peixe-zebra: cardiotoxicidade induzida por drogas

Resumo

Fonte: Ma X., et. al. Um modelo de cardiomiopatia induzida por doxorrubicina em peixe-zebra adulto. J. Vis. Exp. (2018).

Este vídeo descreve a técnica de criação de um modelo de cardiomiopatia zebrafish com variações mínimas entre os grupos experimentais e, na amostra, criamos um modelo de cardiomiopatia zebrafish usando o medicamento doxorrubicina.

Protocolo

1. Injeção de DOX em peixes adultos

1. Coloque uma placa de Petri limpa de 100 mm com uma esponja dentro, sob um microscópio de dissecação, e ajuste o foco. Corte a esponja para fazer uma cavidade de cerca de 4 cm de comprimento para segurar um peixe. Faça uma cavidade mais longa para um peixe maior.
2. Preparar uma agulha de 34 G com uma microseringa de 10 μL. Enxágue a agulha com 1x tampão HBSS para remover quaisquer bolhas e blocos da seringa e do tubo.
3. Anestesiar os peixes adultos em água embrionária contendo 0,16 mg/mL de tricaína por 2 min.
   NOTA: A anestesia prolongada por mais de 5 minutos seguida de injeção de DOX pode facilmente causar a morte dos peixes.
4. Mergulhe a esponja em água embrionária com tricaína e transfira o peixe para a esponja para injeção.
5. Execute a injeção de IP DOX por um dos dois métodos descritos abaixo.
   1. Injeção de IP clássica
      1. Posicione o peixe com o abdômen para cima na cavidade da esponja. Insira rapidamente a agulha, com um ângulo de 45° em relação ao corpo do peixe, na linha média entre as nadadeiras pélvicas e penetre aproximadamente 1-2 mm. Solte toda a solução DOX lentamente. Aguarde 5 s antes de retirar a agulha. Verifique a entrega DOX por uma cor vermelha visível na barriga do peixe.
   2. Injeção de IP alternativa
      1. Coloque o peixe lateralmente na esponja com a anterior para a direita. Estabilize suavemente o peixe usando uma pinça de ponta romba com a mão esquerda e segure a microseringa com a mão direita.
      2. Posicione a agulha abaixo da linha lateral acima da barbatana pélvica, com o chanfro voltado para cima. Apontando para a posição de 7 horas em um ângulo de 45°, insira a agulha 3-4 mm na cavidade do peixe localizada entre as nadadeiras pélvica e anal e, em seguida, pressione lentamente o êmbolo. Verifique a entrega DOX por uma cor vermelha visível na barriga do peixe.
6. Transfira rapidamente o peixe injetado para um tanque de travessia limpo cheio de água fresca do sistema para permitir que o peixe se recupere. Enxágue a agulha uma vez com 1x tampão HBSS entre as injeções.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Tanque de cruzamento	Aquaneering	ZHCT100	Criação de peixes
Cloridrato de doxorrubicina	sigma	D1515-10MG
Solução salina balanceada de Hank (HBBS)	ThermoFisher	14025076	Veículo para DOX
placa de Petri de 100 mm	falcão	431741
Micro-seringa NanoFil de 10 μL	WPI	NANOFIL	Para injeção
Agulha de calibre 34	WPI	NF34BV-2	Para injeção
Tricaína	Argent		Anestesiando peixes