zPDX-Análise de Invasividade: Investigando o Comportamento Invasivo de Células Cancerígenas Metastáticas em Xenoenxertos de Embrião de Peixe-Zebra

Resumo

Fonte: Ren, J. et al. Comportamento invasivo de células de câncer de mama humano em peixe-zebra embrionário. J. Vis. Exp. (2017).

Este vídeo descreve um método de microinjeção para entrega de células de câncer de mama no espaço perivitelino de embriões transgênicos de peixe-zebra. Após a incubação, visualizamos o embrião sob um microscópio fluorescente para observar a invasão, disseminação e metástase das células cancerígenas.

Protocolo

1. Imagem e análise do processo metastático

1. Colete vários embriões anestesiados com uma pipeta Pasteur de ponta larga e transfira-os para o fundo de vidro de uma placa de poliestireno.
2. Remova o excesso de água e mantenha uma quantidade limitada de água com ovo. Manipule o embrião na posição com uma ferramenta de laço de cabelo e coloque uma tampa em cima do vidro.
3. Use um microscópio confocal invertido em combinação com objetivas de imersão em água ou secas de longa distância. Posicione o embrião de forma que a região de interesse fique o mais próximo possível do objetivo.
4. Realize imagens imediatamente após a a....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Pipeta Pasteur de ponta larga (0,5-20 μL)	Eppendorf	F276456I
Microscópio confocal	Leica	SP5 STED
Microscópio estéreo	Leica	MZ16FA
Cepa de peixe-zebra Tg (fli:EGFP)			Gentilmente cedido pela Dra. Ewa SnaarJagalska (Instituto de Biologia, Universidade de Leiden, Leiden, Holanda)
Prato de poliestireno com fundo de vidro	Vontade	GWST-5040
Microscópio estéreo fluorescente	Leica	M165 FC
Tricaína (ácido 3-aminobenzóico)	SigmaAldrich	A-5040