Enxerto de adenocarcinoma: um método para implantar células cancerígenas nos pulmões murinos

Resumo

Fonte: Stevens, L.E. et al, Pré-condicionar as vias aéreas de camundongos com bleomicina aumenta a eficiência do enxerto ortotópico de células de câncer de pulmão. J. Vis. Exp. (2018).

Este vídeo descreve um método para enxertar células de adenocarcinoma de pulmão em pulmões murinos, pré-condicionando as vias aéreas com agente indutor de fibrose – bleomicina. Este método aumenta significativamente o enxerto ortotópico de células de câncer de pulmão em pulmões murinos

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.

1. Tratamento com bleomicina

1. Planeje injetar bleomicina em camundongos por via intratraqueal 14 dias antes do enxerto de células tumorais.
2. Descongele o estoque de bleomicina no gelo 2 h antes da injeção.
3. Depois de descongelado, dilua a bleomicina até a concentração de trabalho desejada (0,02 U/50 μL ou 0,005 U/50 μL) e mantenha-a no gelo.
   nota: A concentração de bleomicina depende da cepa de camundongo usada p....

Resultados

Tabela 1: Lista de doses recomendadas de bleomicina para cepas de camundongos testadas.

Tensão do mouse	Linha celular	Número de células injetadas	% de enxerto		p valor

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Suporte de intubação de roedores	Braintree Científico	RIS-100	Suporte recomendado para injeção intratraqueal
Bleomicina	sigma	B5507-15UN	CUIDADO Perigo para a saúde GHS08
Cateter Exel 24G	pescador	1484121	Remova a agulha. Para injeção intratraqueal
Cetamina (Ketaset inl 100 mg/mL C3N 10 mL)	Mordomo Schein	Rolamento 56344	Para anestesiar ratos
xilazina	Mordomo Schein	Rolamento 33198	Para anestesiar ratos
Seringa 1ml	BD / Pescador	Telefone: 14-823-434	Para injeções intraperitoneais
Pomada Oftálmica Veterinária Puralube	EMPRESA DE SAÚDE ANIMAL BUTLER LLC	Nº 8897	Para evitar o ressecamento dos olhos durante a anestesia
MI-150 ILUMINADOR 150W MI-150	INDÚSTRIAS DOLAN-JENNER	MI-150 / EEG2823M	Para iluminar e visualizar a traqueia
Pinça Graefe, serrilhado de 2,75 (7 cm) de comprimento	Roboz	RS-5111	Para injeção intratraqueal
Frasco T / C 75cm pescoço inclinado quadrado, tampa azul	Fisher / Corning	353135
Solução salina tamponada com fosfato	Tecnologias da Vida	14190-144
0,25% de tripsina-EDTA	Tecnologias da Vida	Rolamento 25200-056
Pipeta Pipet-Lite, Unv. SL-200XLS+	METTLER-TOLEDO INTERNACIONAL	17014411
Contador de Células Automatizado Countess	Tecnologias da Vida	AMQAX1000
D-Luciferina em pó	Perkin Elmer Ciências da Saúde Inc	122799	Para imagens luminescentes. Reconstitua o pó com PBS para uma concentração de trabalho de 15mg/mL. Proteger da luz
Bioluminiscência de Xenogênio de Espectro IVIS	Perkin Elmer Ciências da Saúde Inc	124262	Para imagens de bioluminescência in vivo
Ratos B6129SF1/J	Laboratórios Jackson	101043
Células NIH-H2030	ATCC	CRL-5914
Células PC9	Nguyen DX et al. Cell. 2009; 138:51–62
Software de imagem viva	Perkin Elmer Ciências da Saúde Inc	128113	Para análise de bioluminescência in vivo